检索结果-内蒙古大学图书馆

中华医学遗传学杂志 2003年第3期20卷 228-231页

作者：钟昌高李麓芸陆长富林戈傅俊江罗克莉卢光琇中南大学生殖与干细胞工程研究所(原湘雅医学院人类生殖工程研究室)中信湘雅生殖与遗传专科医院长沙410078

目的　探讨单细胞水平诊断软骨发育不全 ( achondroplasia,ACH)的可靠性 ,为开展 ACH的胚胎植入前遗传学诊断 ( preimplantation genetic diagnosis,PGD)打下基础。方法　采用巢式 pcr扩增单淋巴细胞及单卵裂球的成纤维细胞生长因子受... 详细信息

目的　探讨单细胞水平诊断软骨发育不全 ( achondroplasia,ACH)的可靠性 ,为开展 ACH的胚胎植入前遗传学诊断 ( preimplantation genetic diagnosis,PGD)打下基础。方法　采用巢式 pcr扩增单淋巴细胞及单卵裂球的成纤维细胞生长因子受体 3基因的高发突变位点 G380 R区域 ,用限制酶 Bfm 消化 pcr产物 ,10 %聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。结果　单淋巴细胞的 pcr扩增成功率为 90 .4 % ,等位基因脱扣发生率为 8.2 % ,诊断准确率为 91.8% ;单卵裂球的扩增成功率为 75 .4 %。结论　单细胞巢式 pcr诊断 ACH是比较稳定。

关键词：单细胞巢式pcr 诊断软骨发育不全胚胎植入前遗传学诊断

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单细胞巢式pcr检测RHD的初步研究

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中国输血杂志 2015年第7期28卷 760-762页

作者：刘建强吴大洲张印则周华友徐华陕西省血液中心陕西西安710061 深圳市血液中心广州中医药大学第二附属医院

目的建立单细胞巢式pcr检测技术,用以检测单个细胞的RHD。方法采用稀释法获得单个细胞,直接提取DNA,根据RHD特点设计两对特异性引物进行巢式pcr,凝胶电泳观察结果,将扩增产物测序以检测扩增的目的基因。结果通过巢式pcr,阳性对照可以获... 详细信息

目的建立单细胞巢式pcr检测技术,用以检测单个细胞的RHD。方法采用稀释法获得单个细胞,直接提取DNA,根据RHD特点设计两对特异性引物进行巢式pcr,凝胶电泳观察结果,将扩增产物测序以检测扩增的目的基因。结果通过巢式pcr,阳性对照可以获得明显的目的产物,阴性和空白对照无扩增产物,10份Rh阳性单细胞检测标本均能检出RHD。结论建立的检测RHD单细胞巢式pcr检测技术具有很好的特异性和敏感性,可应用于生殖医学等领域,为预防Rh新生儿溶血病提供新的技术途径。

关键词：单细胞巢式pcr RHD 生殖医学 Rh新生儿溶血病

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基于单个B细胞抗O型口蹄疫病毒单克隆抗体的研制

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中国兽医科学 2019年第9期49卷 1082-1089页

作者：张雨秦晓东朱学亮殷相平李彦敏张志东中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046

为了建立基于单个B细胞制备抗体技术,本研究以O型灭活FMDV为抗原,采集健康C57/BL小鼠脾细胞,经过磁珠富集、流式B220+/CD38+/Ig G1+/抗原+分选,获得单个抗原特异性的B细胞。经单细胞巢式pcr反应扩增获得抗体完整轻、重链可变区序列后,... 详细信息

为了建立基于单个B细胞制备抗体技术,本研究以O型灭活FMDV为抗原,采集健康C57/BL小鼠脾细胞,经过磁珠富集、流式B220+/CD38+/Ig G1+/抗原+分选,获得单个抗原特异性的B细胞。经单细胞巢式pcr反应扩增获得抗体完整轻、重链可变区序列后,分别构建轻/重链表达质粒,然后共转染HEK-293细胞后,成功获得3株特异性单克隆抗体,且证明均属于Ig G1型抗体;ELISA结果显示,获得的3株抗体均能与O型FMDV抗原结合;免疫荧光试验证明,3株抗体能够特异性结合细胞内复制的O型FMDV。本研究成功建立了基于单个B细胞直接制备抗FMDV单抗的方法,为后期开发特异性单克隆抗体打下了坚实的基础。

关键词：单个B细胞口蹄疫病毒抗体流式分选技术单细胞巢式pcr

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外周血循环肿瘤细胞的EGFR突变的检测

外周血循环肿瘤细胞的EGFR突变的检测

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作者：冉然北京协和医学院

学位级别：硕士

目的：建立一种NSCLC患者外周血CTC的EGFR基因突变检测技术,以使NSCLC患者在EGFR-TKI治疗的获益。方法：首先将H1975细胞株混入抽取的正常人血液内,模拟NSCLC患者外周血。使用免疫磁珠阴性法富集CTC,再使用免疫荧光染色的方法鉴别循环... 详细信息

目的：建立一种NSCLC患者外周血CTC的EGFR基因突变检测技术,以使NSCLC患者在EGFR-TKI治疗的获益。方法：首先将H1975细胞株混入抽取的正常人血液内,模拟NSCLC患者外周血。使用免疫磁珠阴性法富集CTC,再使用免疫荧光染色的方法鉴别循环肿瘤细胞,并尝试了FISH法辅助鉴别CTC。比较了包括激光显微切割(LCM)在内的多种单细胞分离技术。对比研究了单细胞和多细胞pcr的扩增阳性率；研究了单细胞全基因组扩增(WGA)与巢式pcr扩增阳性率的关系；并使用测序的方法进行了单细胞EGFR基因突变检测。结果：通过免疫磁珠阴性富集和免疫荧光染色,混入血液内的H1975细胞回收率达到77.2±9.5%；并论证了LCM对本实验的适用性和意义。多细胞pcr的阳性扩增率也仅为50%,不显著优于单细胞pcr。使用WGA不能明显的提高巢式pcr的扩增阳性率,但是对于单细胞的多位点检测有重要的意义。通过本方法的处理,测序法的敏感性即可满足EGFR基因突变的检测要求。结论：本研究所建立的外周血单个CTC的EGFR基因突变检测方法在H1975细胞株上已得到充分的验证,有望于NSCLC患者上取得结果。本方法也可用于其他任何实体瘤的单细胞多基因位点的检测,对于肿瘤学的研究提供了新的研究途径。

关键词：循环肿瘤细胞 EGFR 免疫磁珠阴性富集免疫荧光染色激光显微切割全基因组扩增单细胞巢式pcr 测序

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单基因遗传病的基因诊断及其应用研究

单基因遗传病的基因诊断及其应用研究

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作者：钟昌高中南大学

学位级别：博士

单基因遗传病种类多,发病率高,不仅对患者的健康造成了严重危害,而且也给家庭和社会带来了沉重的精神和经济负担。应用遗传病的基因诊断技术,可对不同发育时期的个体进行遗传病的基因诊断,既可诊断出生后的遗传病患者和症状前患者,又可... 详细信息

单基因遗传病种类多,发病率高,不仅对患者的健康造成了严重危害,而且也给家庭和社会带来了沉重的精神和经济负担。应用遗传病的基因诊断技术,可对不同发育时期的个体进行遗传病的基因诊断,既可诊断出生后的遗传病患者和症状前患者,又可诊断出生前的胎儿(产前诊断),甚至对着床前胚胎也可作出诊断(胚胎植入前遗传学诊断)。因此能对患者和症状前患者及时采取治疗措施和婚姻生育指导。而根据高危妊娠的产前基因诊断结果,选择性地终止异常胚胎妊娠,可防止遗传病患儿的出生。而通过胚胎植入前遗传学诊断(Preimplantation genetic diagnosis,PGD),在妇女怀孕前筛选正常胚胎移植,诞生健康的婴儿,可使妇女避免因反复选择性流产所引起的身心痛苦。对有生育遗传病患儿风险的夫妇而言,他们又多了一种可供选择的预防手段。为了全方位地防止单基因遗传病患儿的出生,本研究旨在丰富和完善我所现有的一般基因诊断及产前基因诊断技术,并以我室成熟的辅助生殖技术为依托,建立以软骨发育不全和β-地中海贫血为代表的单细胞pcr诊断单基因遗传病的技术平台,在此基础上,进一步将该技术推向临床,开展单基因病的PGD,并为众多单基因遗传病PGD的开展打下基础。不断丰富遗传病的预防手段,不仅从出生后诊断遗传病患者和症状前患者,而且从产前水平,甚至从植入前水平阻断遗传病的传递,减少遗传病患儿的出生。 1.联合运用St14(DXS52)位点VNTR和FⅧ基因内的(CA)n重复多态性对甲型血友病进行基因诊断及产前基因诊断由于甲型血友病基因结构庞大,基因缺陷复杂多变,迄今已发现756种基因突变,且散布于基因内,缺乏突变热点,给直接基因诊断带来了一定的困难。因此,建立基于甲型血友病基因内外的(CA)n重复和VNTR多态性的连锁分析方法将成为该病的简捷、有效的基因诊断手段。我们采用上述2个串联重复多态位点进行连锁分析完成了对HA家系的间接基因诊断。分析表明单用上述2个多态位点中的1个对9个HA家系进行连锁分析,可诊断率均为66.7%,联合2个多态位点,则可诊断率提高到88.9%,完成了4个家系的产前基因诊断,并利用(CA)n多态分析监测到了St14位点分析时发生的重组事件,纠正了单用St14位点的VNTR多态

关键词：单基因遗传病基因诊断产前基因诊断植入前胚胎遗传学诊断单细胞巢式pcr

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杜氏肌营养不良症(DMD)的植入前遗传学诊断

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中国现代医学杂志 2009年第17期19卷 2588-2592页

作者：钟昌高李麓芸陆长富林戈龚斐张瞻廖宏庆张红卢光琇中南大学生殖与干细胞工程研究所(中信湘雅生殖与遗传专科医院生殖中心) 湖南长沙410078

目的对杜氏肌营养不良症(duchenne muscular dystrophy,DMD)进行植入前遗传学诊断(preim-plantation genetic diagnosis,PGD),阻断DMD患儿的出生。方法针对患者的DMD基因的48号外显子缺失位点采用巢式pcr分别对患者和携带者的单个淋巴... 详细信息

目的对杜氏肌营养不良症(duchenne muscular dystrophy,DMD)进行植入前遗传学诊断(preim-plantation genetic diagnosis,PGD),阻断DMD患儿的出生。方法针对患者的DMD基因的48号外显子缺失位点采用巢式pcr分别对患者和携带者的单个淋巴细胞、行体外授精-胚胎移植治疗的健康志愿捐献者的单个卵裂球细胞进行扩增,建立稳定的经单细胞基因诊断DMD的方法。再对在该中心进行超排和体外授精-胚胎移植治疗的DMD携带者的胚胎活检后完成PGD,根据诊断结果选择健康的优质的胚胎移植入子宫。结果携带者的单个淋巴细胞的pcr扩增成功率为90.5%(95/105),健康志愿捐献者的单个卵裂球细胞pcr扩增成功率为85.7%(54/63),假阳性率为0(0/28)。分别对3例DMD携带者施行了植入前遗传学诊断,病例1移植了2枚未受累的优质胚胎,且成功妊娠单胎并已于2005年4月分娩了1个健康的女婴;病例2移植了2枚优良胚胎,不幸的是未能妊娠。病例3诊断为未受累的仅有的2枚胚胎因胚胎质量差而未能移植。结论该组采用的方案可对DMD基因的48号外显子缺失突变的DMD家庭进行PGD,达到了阻断DMD患儿出生的目的。

关键词：杜氏肌营养不良症单细胞巢式pcr 植入前遗传学诊断 DMD基因48号外显子缺失

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