检索结果-内蒙古大学图书馆

家畜生态学报 2016年第4期37卷 9-15页

作者：窦立静赵赓高磊杨井泉沈敏新疆石河子市兽医卫生检疫所新疆石河子832003 新疆农垦科学院省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室新疆石河子832000

试验以促甲状腺激素受体(thyroid stimulating hormone receptor,TSHR)作为影响绵羊季节性繁殖的候选基因开展了多态性分析研究。结果在绵羊TSHR基因CDS区发现了一处c.31A>G突变位点,该突变为错义突变(T315A)。该位点在不同繁殖特性... 详细信息

试验以促甲状腺激素受体(thyroid stimulating hormone receptor,TSHR)作为影响绵羊季节性繁殖的候选基因开展了多态性分析研究。结果在绵羊TSHR基因CDS区发现了一处c.31A>G突变位点,该突变为错义突变(T315A)。该位点在不同繁殖特性(季节性繁殖和常年发情)绵羊群体的基因型和等位基因频率有着明显不同的分布趋势,GG基因型和G等位基因为常年发情的3个绵羊品种(多浪羊、小尾寒羊、湖羊)的优势基因型和优势等位基因;常年发情的3个绵羊群体和季节性繁殖的3个绵羊群体之间等位基因G/A比值存在显著性差异(P<0.05)。研究结果表明该SNP位点上G等位基因与绵羊常年发情性状具有显著的相关性,该位点碱基突变可能导致TSHR构象改变,与TSH结合能力发生变化,进行影响到绵羊的季节性繁殖活动。

关键词： TSHR 单链构象多态性季节性繁殖绵羊

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扬子鳄抗病毒潜力检测的Ⅰ类MHC基因的特异性引物及分型方法

扬子鳄抗病毒潜力检测的Ⅰ类MHC基因的特异性引物及分型方法

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作者：方盛国万秋红倪小伟 310027 浙江省杭州市西湖区浙大路38号

本发明涉及用于一套扩增扬子鳄抗病毒潜力检测的Ⅰ类主要组织相容性复合物基因序列的单位点特异性引物及分型方法，引物的具体序列如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.8所示。本发明的扩增引物，在扬子鳄种群内具有稳定的单位点特异扩增能力，其... 详细信息

标准号: CN105349535B

本发明涉及用于一套扩增扬子鳄抗病毒潜力检测的Ⅰ类主要组织相容性复合物基因序列的单位点特异性引物及分型方法，引物的具体序列如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.8所示。本发明的扩增引物，在扬子鳄种群内具有稳定的单位点特异扩增能力，其扩增得到产物可以通过后续的单链构象多态性检测(single strand conformation polymorphism,SSCP)实验对不同的个体进行基因分型，实现对种群中扬子鳄个体Ⅰ类MHC基因多态性的评估，检测其抵抗病毒性疾病的潜力，为扬子鳄保护工作中的新种群奠基者选择、野化放归个体选择以及人工配对等工作提供重要参考。

关键词：扩增检测种群组织相容性复合物单链构象多态性病毒性疾病特异性引物个体选择基因分型基因序列扩增引物特异扩增多态性抗病毒新种群分型引物配对抵抗参考评估

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鸭A-FABP基因多态性在品种和世代间的比较分析

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河南农业科学 2016年第8期45卷 131-135页

作者：董飚秦豪荣王健孙国波纪荣超江苏农牧科技职业学院江苏泰州225300 国家级水禽基因库江苏泰州225300

为了解脂肪型脂肪酸结合蛋白(adipocyte fatty-acid binding protein,A-FABP)基因在不同鸭品种、世代间的突变情况,以山麻鸭、巢湖鸭、金定鸭(3个世代群体)等9个鸭品种为材料,设计2对引物,用SSCP方法检测A-FABP基因多态性,比较不同鸭品... 详细信息

为了解脂肪型脂肪酸结合蛋白(adipocyte fatty-acid binding protein,A-FABP)基因在不同鸭品种、世代间的突变情况,以山麻鸭、巢湖鸭、金定鸭(3个世代群体)等9个鸭品种为材料,设计2对引物,用SSCP方法检测A-FABP基因多态性,比较不同鸭品种之间、金定鸭3个世代群体之间基因型、等位基因频率、群体遗传参数。结果显示,9个鸭品种中共形成A、B、C、D 4个等位基因,对不同基因型序列进行比较发现,在内含子1中有6个单核苷酸突变。在9个鸭品种中,B等位基因频率均明显高于A、C、D。大部分鸭品种之间基因型频率存在显著性差异,金定鸭3个世代群体之间基因型频率无明显差异。所有鸭品种的群体杂合度都在0.4以上,山麻鸭、攸县麻鸭、广西小麻鸭、金定鸭3个世代群体均为中度多态,其他鸭品种为高度多态。除山麻鸭和临武鸭外,其他鸭品种均处于HardyWeinberg平衡状态。可见,鸭不同品种中A-FABP基因具有丰富的单核苷酸多态性,采用小群保种方式,金定鸭A-FABP基因多态位点形成的基因型频率在世代间无显著性变化。

关键词：鸭 A-FABP基因单链构象多态性单核苷酸多态性遗传分析

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不对称PCR的引物浓度优化及在柑橘基因型分析上的应用

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江苏农业科学 2016年第11期44卷 46-48页

作者：魏召新朱世平阳佳位闫树堂洪林中国农业科学院柑橘研究所重庆402260 重庆市农业科学院果树研究所重庆402260

对柑橘不对称PCR的引物比例浓度进行优化筛选,并以不同柑橘品种的基因组片段为模板验证不对称PCR在柑橘品种基因型分析中的可行性。结果表明,不对称PCR双侧的引物最佳浓度因引物不同而不同,当浓度为10∶1时均能达到理想效果,可见不对称... 详细信息

对柑橘不对称PCR的引物比例浓度进行优化筛选,并以不同柑橘品种的基因组片段为模板验证不对称PCR在柑橘品种基因型分析中的可行性。结果表明,不对称PCR双侧的引物最佳浓度因引物不同而不同,当浓度为10∶1时均能达到理想效果,可见不对称PCR可以用于柑橘基因型分析。

关键词：不对称PCR 单链构象多态性柑橘引物浓度比基因型分析

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利用毛细管电泳—单链构象多态性技术鉴定常见血液感染病原菌的研究

利用毛细管电泳—单链构象多态性技术鉴定常见血液感染病原菌的研...

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作者：刘春江第三军医大学

学位级别：硕士

背景随着社会老龄化进程的加快及HIV感染人群的增多,免疫力低下群体的范围也在不断扩大。每年有大量的患者死于血液感染[1, 2],尤其是因败血症导致的新生儿死亡[3]。据全国医院感染监控网的报告显示,菌血症的发病率在医院内感染中的构... 详细信息

背景随着社会老龄化进程的加快及HIV感染人群的增多,免疫力低下群体的范围也在不断扩大。每年有大量的患者死于血液感染[1, 2],尤其是因败血症导致的新生儿死亡[3]。据全国医院感染监控网的报告显示,菌血症的发病率在医院内感染中的构成比为1.3%,发病率为48.56/10万[4]。在美国因血液感染所致的败血症是导致病人死亡的十大原因之一[5]。因此,及时诊断感染病原菌并给予抗菌治疗,是降低死亡率的重要一步。培养法作为细菌诊断的金标准,耗时长,操作繁琐,对营养要求高的细菌难以检出(如肺炎链球菌等),而且易受抗生素的影响,常导致某些细菌无法生长。因此探索建立一种快速检测血液中的微量病原菌的方法成为亟待解决的问题。细菌的核糖体小亚基rRNA是近年来进行细菌分类和鉴定研究的热点,为病原菌的分子生物学快速检测提供了理想靶点[6-9]。 20世纪80年代,在传统平板凝胶电泳(slab gel electrophoresis, SGE)的基础上发展了毛细管电泳技术(capillary electrophoresis, CE),用于快速分离生物大分子。Orita等[10]在同期发展了用于基因分型的单链构象多态性分析技术(single strand conformation polymorphism, SSCP)。后来,Kuypers等[11]将两项技术相结合形成了CE-SSCP来进行基因的突变分析。由于该技术具有样品用量少、灵敏度高、分析能力强、定量性能好等诸多优点,在生命科学中已被广泛应用于基因突变检测、PCR产物分析、SNP的快速分型以及mRNA定量[12]、抗菌活性分析[13]等。本研究利用通用引物PCR,结合毛细管电泳-单链构象多态性分析技术(CE-SSCP)对常见的血液感染病原菌:金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、表皮葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、粪肠球菌、肺炎链球菌进行了检测,进而建立了一种快速检测常见血液感染病原菌的方法。方法1.经查阅文献,选取常见血液感染病原菌:金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、表皮葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、粪肠球菌、肺炎链球菌为研究对象,通过NCBI查询其全基因组序列,利用ClustalX 1.81软件进行多重序列比对,查找16S rDNA、23S rDNA基因序列的保守区域,在此保守区设计通用引物。2.提取上述病原菌标准菌株的基因组DNA后,分别对16S rRNA基因和16S-23S rRNA间区进行PCR扩增,然后进行CE-SSCP分析,建立标准菌株的CE-SSCP图谱并进行机器码识别。同时对该方法的敏感度进行研究。3.收集临床菌株进行CE-SSCP分析,所获得的图谱与所建立的标准菌株图谱进行比较验证。同时将CE-SSCP法与传统培养法进行比较。结果1.在16S rDNA和23S rDNA的保守区域设计的通用引物,能够一次对所研究的七种病原菌进行扩增,且片段长度与实际相符合,条带结果清晰,未见明显的非特异性扩增条带和引物二聚体。2.16S rRNA基因的PCR产物经CE-SSCP分析,七种病原菌具有不同的等位片段长度(Cv≤0.046%)和出峰时间点(Cv≥1.33%):前者重复性由于后者。经多次测量计算出其等位片段长度范围为:金黄色葡萄球菌(317.40-317.61),大肠杆菌(309.83-309.99),铜绿假单胞菌(305.30-305.59),表皮葡萄球菌(316.34-316.63),肺炎克雷伯菌(307.76-307.96),粪肠球菌(327.28-327.57),肺炎链球菌(315.86 -315.62)。16S-23S rDNA间区经分析后,也呈现不同的CE-SSCP图谱,其图谱经机器码识别,可使细菌的差异鉴别更加快捷。3.对七种血液感染病原菌临床菌株进行检测,所有细菌都在所建立的等位片段长度范围之内。该法与培养法的符合率为94.8%,敏感度达18 CFU/ml。结论1.所设计的通用引物能够一次对所研究的七种病原菌进行扩增,且条带结果清晰,未见明显的非特异性条带和引物二聚体。2.16S rRNA基因的PCR产物经CE-SSCP分析,可同时对七种病原菌进行鉴定,这对混合感染的检测具有重要意义。通过对CE-SSCP两个判定指标的研究,认为利用等位片段长度进行细菌鉴定要优于出峰时间点,从而提高了细菌检测的准确性。对16S-23S rRNA间区的CE-SSCP图谱识别引入机器码技术,使细菌的差异鉴别更加快捷,为开发自动化分析软件提供了思路。3.利用该方法在4～6小时内可对常见的七种血液感染病原菌进行检测,且快速、敏感,操作简便,为其临床应用奠定了基础。

关键词：毛细管电泳单链构象多态性通用引物血液感染

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利用单链构象多态性检测牛脊椎畸形综合症方法的建立

利用单链构象多态性检测牛脊椎畸形综合症方法的建立

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第二届京津冀畜牧兽医科技创新论坛暨第六届新思想、新方法、新观点“首农杯”论坛

作者：李艳华张胜利朱玉林薛建华吕小青孙凤俊梁洪斌北京奶牛中心北京 100192 中国农业大学北京 100193

脊椎畸形综合症(CVM)是由常染色体上SLC35A3基因单碱基突变(G→T)引起的隐性遗传疾病，纯合时可以造成妊娠奶牛早期流产、死胎或出生犊牛畸形等综合症状，严重影响了奶牛生产性能的表现，给奶牛养殖业带来了很大损失。该研究利用自行设... 详细信息

脊椎畸形综合症(CVM)是由常染色体上SLC35A3基因单碱基突变(G→T)引起的隐性遗传疾病，纯合时可以造成妊娠奶牛早期流产、死胎或出生犊牛畸形等综合症状，严重影响了奶牛生产性能的表现，给奶牛养殖业带来了很大损失。该研究利用自行设计的特异性PCR引物，通过对PCR、PCR-SSCP条件的筛选和优化，并结合DNA序列测定，建立了PCR-SSCP检测CVM有害基因的新方法，该方法简便快捷、准确率高，使用样品宽泛，适合大样本筛选，为奶牛CVM有害基因的分型和筛选提供了新的方法和思路，为我国奶牛的分子选育提供了可靠的理论依据。

关键词：奶牛脊椎畸形综合症基因检测单链构象多态性生产性能奶牛养殖

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毛细管电泳单链构象多态性分析检测胃癌p53基因282位密码子的突变

毛细管电泳单链构象多态性分析检测胃癌p53基因282位密码子的突变

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西北地区第六届色谱学术报告会甘肃省第十一届色谱年会

作者：张爱梅王荣兰州军区兰州总医院临床药理基地西北师范大学生命科学学院

p53基因点突变在胃癌的发生过程中起重要作用,基因点突变的检测将有助于临床准确诊断胃癌。本实验用PCR扩增包含282位密码子的胃癌及癌旁正常组织p53基因,扩增样品经95℃变性,以CE-SSCP对其突变情况进行检测。

关键词：胃癌基因突变毛细管电泳单链构象多态性

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毛细管电泳单链构象多态性分析检测胃癌p53基因282位密码子的突变

毛细管电泳单链构象多态性分析检测胃癌p53基因282位密码子的突变

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西北地区第六届色谱学术报告会暨甘肃省第十一届色谱年会

作者：张爱梅王荣兰州军区兰州总医院临床药理基地兰州 730050 西北师范大学生命科学学院兰州 730000 兰州军区兰州总医院临床药理基地兰州 730050

p53基因点突变在胃癌的发生过程中起重要作用，基因点突变的检测将有助于临床准确诊断胃癌。本实验用PCR扩增包含282位密码子的胃癌及癌旁正常组织p53基因，扩增样品经95℃变性，以CE-SSCP对其突变情况进行检测。

关键词：胃癌基因突变毛细管电泳单链构象多态性基因点突变

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扬子鳄抗细菌潜力检测的Ⅱ类MHC基因的特异性引物及分型方法

扬子鳄抗细菌潜力检测的Ⅱ类MHC基因的特异性引物及分型方法

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作者：方盛国万秋红翟腾 310027 浙江省杭州市西湖区浙大路38号

本发明涉及一对用于扩增扬子鳄抗细菌潜力检测的Ⅱ类主要组织相容性复合物基因的单位点特异性引物及分型方法，引物的具体序列如SEQ？ID？NO.1～SEQ？ID？NO.2所示。本发明的扩增引物，在扬子鳄种群内具有稳定的单位点特异扩增能力，其... 详细信息

标准号: CN105316409A

本发明涉及一对用于扩增扬子鳄抗细菌潜力检测的Ⅱ类主要组织相容性复合物基因的单位点特异性引物及分型方法，引物的具体序列如SEQ？ID？NO.1～SEQ？ID？NO.2所示。本发明的扩增引物，在扬子鳄种群内具有稳定的单位点特异扩增能力，其扩增得到产物可以通过后续的单链构象多态性检测(single？strand？conformation？polymorphism,SSCP)实验对不同的个体进行基因分型，实现对种群中扬子鳄个体Ⅱ类MHC基因多态性的评估，检测其抵抗细菌性疾病的潜力，为扬子鳄保护工作中的新种群奠基者选择、野化放归个体选择以及人工配对等工作提供重要参考。

关键词：扬子鳄单位点扩增检测主要组织相容性复合物单链构象多态性特异性引物细菌性疾病个体选择基因分型扩增引物人工配对特异扩增多态性抗细菌新种群种群中分型引物种群抵抗奠基后续一对参考基因评估工作涉及选择保护稳定进行

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大熊猫抗细菌潜力检测的II类MHC基因的特异性引物及分型方法

大熊猫抗细菌潜力检测的II类MHC基因的特异性引物及分型方法

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作者：方盛国万秋红陈艺燕 310027 浙江省杭州市西湖区浙大路38号

本发明公开了大熊猫抗细菌潜力检测的II类MHC基因的特异性引物及分型方法。引物序列如序列表所示，大熊猫II类MHC区域DRA、DRB3、DQA1、DQA2、DQB1和DQB2基因二号外显子的分型方法是采用所述的扩增产物，用单链构象多态性对目标片断进... 详细信息

标准号: CN105274233A

本发明公开了大熊猫抗细菌潜力检测的II类MHC基因的特异性引物及分型方法。引物序列如序列表所示，大熊猫II类MHC区域DRA、DRB3、DQA1、DQA2、DQB1和DQB2基因二号外显子的分型方法是采用所述的扩增产物，用单链构象多态性对目标片断进行基因分型。II类MHC负责结合及呈递细菌抗原，从而激发相应免疫反应，本发明有利于正确进行大熊猫II类MHC基因分型和基因多态性分析，因此能帮助我们进一步研究与细菌引起的疾病有关的特定等位基因、评估大熊猫抗病能力以及更好地进行大熊猫保护育种。

关键词：大熊猫分型单链构象多态性基因多态性分析特异性引物等位基因基因分型抗病能力扩增产物细菌抗原引物序列呈递抗细菌序列表片断细菌育种进行基因激发疾病检测评估公开帮助正确保护结合研究

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