检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：王佳芮华中科技大学

学位级别：硕士

生发泡阻滞(germinal vesicle arrest,GV阻滞)是一种卵母细胞成熟阻滞疾病,于1990年首次报道。该病患者的卵母细胞生发泡不能破裂,从而无法启动减数分裂,不能产生成熟的卵母细胞,最终导致女性不育。本论文研究了八个卵母细胞成熟阻滞家... 详细信息

生发泡阻滞(germinal vesicle arrest,GV阻滞)是一种卵母细胞成熟阻滞疾病,于1990年首次报道。该病患者的卵母细胞生发泡不能破裂,从而无法启动减数分裂,不能产生成熟的卵母细胞,最终导致女性不育。本论文研究了八个卵母细胞成熟阻滞家系,通过遗传学分析发现了两个家系的患者携带致病基因PATL2(Protein associated with topoisomeraseⅡ)的新突变,进一步通过生化与分子生物学方法研究了这些突变致病的分子机制。我们对八个家系的遗传学分析发现:家系1的先证者携带PATL2基因的纯合错义突变c.1376C>A,该突变导致第459位氨基酸由丝氨酸变成酪氨酸(p.S459Y),患者的父亲母亲都携带该位点的杂合突变,表型正常;家系2的先证者携带PATL2基因的纯合错义突变c.1528C>A,导致该基因编码蛋白的第510位氨基酸由脯氨酸变成苏氨酸(p.P510T),先证者妹妹也是患者,携带同样的纯合突变,而表型正常的父母是该位点的杂合突变携带者。PATL2蛋白氨基酸序列保守性分析结果显示这两个氨基酸位点在进化过程中都高度保守。生物信息学预测这两个点突变都是有害突变,S459Y突变导致了局部氢键数量减少和氢键位置的改变,可能影响蛋白稳定性,导致蛋白表达下降。为了明确这两个突变对蛋白表达的影响,我们构建了GFP标记的野生型和突变型人类PATL2基因表达载体,将其转染HEK293T细胞,48小时后提取细胞的总蛋白并通过Western检测PATL2蛋白的表达水平,结果表明与野生型相比,S459Y和P510T突变型PATL2蛋白的表达水平显著降低。蛋白定位结果表明突变对PATL2蛋白定位无影响。目前对人的PATL2基因突变导致GV阻滞的致病机制还不清楚,PATL2在爪蟾中的同源蛋白P100与CPEB等蛋白互作形成的复合体能够调控CCNB1的表达,CCNB1是调控生发泡破裂的MPF(Maturation promoting factors)组分之一,因此我们推测PATL2基因突变可能通过CCNB1蛋白影响生发泡破裂。为了理解PATL2基因突变致病的机制,我们研究了野生和突变型PATL2蛋白与CCNB1蛋白的互作。Co-IP结果表明S459Y和P510T突变蛋白仍能与CCNB1蛋白互作,但由于突变型PATL2蛋白的表达水平显著减低,这种表达水平的降低也可能影响到CCNB1蛋白的表达,从而影响MPF活性,最终影响生发泡破裂。本研究通过对八个卵母细胞成熟阻滞家系的遗传学分析发现了PATL2基因的两个新的致病突变c.1376C>A(p.S459Y)和c.1528C>A(p.P510T),通过生物信息学预测发现这两个突变可能影响蛋白的结构和功能,进一步通过体外表达实验确认了这两个突变降低了PATL2蛋白的表达水平,但突变对蛋白定位没有影响,突变的PATL2蛋白仍然可以与CCNB1蛋白互作,但由于突变型PATL2蛋白的表达水平是显著减低的,这种表达水平的降低可能影响到CCNB1蛋白的表达,从而影响MPF活性,最终影响生发泡破裂。本研究不仅丰富了PATL2基因突变谱,也为理解PALT2基因突变如何影响蛋白的功能提供了新的认识,为GV阻滞疾病的诊治提供了新的思路。

关键词： GV阻滞 PATL2基因突变卵母细胞成熟阻滞

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PATL2基因c.1363C>T纯合无义突变致卵母细胞成熟阻滞1例

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中华生殖与避孕杂志 2024年第9期44卷 955-958页

作者：邓佳刘律君黄华林刘敏孟祥鹤廖娇蕾邓爱民毛增辉湖南师范大学附属长沙市妇幼保健院生殖医学中心区域遗传性出生缺陷防控研究重点实验室长沙410007 中南大学湘雅二医院妇产科生殖医学中心长沙410011

卵母细胞成熟阻滞是一种极其罕见的原发性不孕症,表现为卵子发育停滞,卵母细胞完全受精失败,受精前后卵母细胞凋亡以及早期胚胎发育停滞等。本案例探讨了1例经2次控制性超促排卵均未获成熟卵母细胞为特征的原发不孕患者的遗传学病因。... 详细信息

卵母细胞成熟阻滞是一种极其罕见的原发性不孕症,表现为卵子发育停滞,卵母细胞完全受精失败,受精前后卵母细胞凋亡以及早期胚胎发育停滞等。本案例探讨了1例经2次控制性超促排卵均未获成熟卵母细胞为特征的原发不孕患者的遗传学病因。采集患者外周血进行全外显子组测序,经生物信息学筛选可疑致病突变,并对患者及其父母进行Sanger测序验证。结果显示,患者检测到PATL2基因的纯合无义突变c.1363C>T(***455*),Sanger测序结果显示其父母均为携带该突变的杂合变异,经HGMD数据库查询c.1363C>T为目前未见报道的罕见致病变异。本案例显示PATL2基因突变可引起卵母细胞成熟阻滞,建议对这类患者尽早进行外显子测序并行遗传咨询,以选择适宜的助孕措施。

关键词：原发不孕全外显子组测序卵母细胞成熟阻滞 PATL2基因

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TRIP13基因新突变导致卵母细胞成熟阻滞为特征的女性不孕

引用

遗传 2023年第6期45卷 514-525页

作者：吕香江郭静林戈中南大学基础医学院生殖与干细胞工程研究所长沙410078 中信湘雅生殖与遗传专科医院长沙410008

卵母细胞成熟阻滞(oocyte maturation arrest,OMA)是指卵母细胞减数分裂过程异常而导致的卵母细胞成熟障碍的一种罕见的临床现象,也是女性原发性不孕的原因之一。这类患者临床上常表现为:反复促排卵后无法获得成熟卵子,并且未成熟卵母... 详细信息

卵母细胞成熟阻滞(oocyte maturation arrest,OMA)是指卵母细胞减数分裂过程异常而导致的卵母细胞成熟障碍的一种罕见的临床现象,也是女性原发性不孕的原因之一。这类患者临床上常表现为:反复促排卵后无法获得成熟卵子,并且未成熟卵母细胞经体外培养后仍不能成熟。迄今研究发现PATL2、TUBB8和TRIP13基因突变与OMA有关,但是有关OMA的遗传学分子因素及机制研究仍不完整。本研究通过收集临床上辅助生殖助孕过程中35名反复出现OMA的原发不孕女性患者的外周血,提取其基因组DNA进行全外显子组测序分析,对疑似致病突变进行验证及家系共分离分析,发现先证者1的TRIP13基因9号外显子存在纯合突变c.859A>G,突变导致对应编码的287位的氨基酸由异亮氨酸突变为缬氨酸(***287Val);先证者2的TRIP13基因1号外显子存在纯合突变c.77A>G,突变导致对应编码的26位的氨基酸由组氨酸突变为精氨酸(***26Arg);先证者3的TRIP13基因的4号和12号外显子存在复合杂合突变c.409G>A和c.1150A>G,c.409G>A突变导致对应编码的137位的氨基酸由天冬氨酸突变为天冬酰胺(***137Asn),c.1150A>G突变导致对应编码的384位的氨基酸由丝氨酸突变为甘氨酸(***384Gly),三名患者所携带的突变均引起TRIP13基因编码的TRIP13蛋白发生错义突变。其中3个突变位点在国内外尚未有文献报道。此外,通过在HeLa细胞中分别转染四个突变质粒,并进行体外免疫印记实验和细胞增殖实验,发现这些突变会造成不同程度的TRIP13蛋白表达的增加以及细胞增殖速率异常。本文总结了既往研究报道的TRIP13基因突变位点,丰富了TRIP13致病基因突变谱,为进一步研究TRIP13基因导致OMA的致病机制及临床的诊断和治疗提供了依据。

关键词：卵母细胞成熟阻滞 TRIP13 减数分裂女性不孕

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卵母细胞成熟障碍的致病基因研究

卵母细胞成熟障碍的致病基因研究

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作者：杨萍山东大学

学位级别：博士

成熟的卵母细胞是成功受精和胚胎发育能力的主要决定因素。卵母细胞成熟障碍影响受精及早期胚胎发育。本论文的主要内容是使用全外显子组测序和Sanger测序技术,探究卵母细胞成熟障碍的致病基因。第一章以卵母细胞成熟障碍家系为研究对象... 详细信息

成熟的卵母细胞是成功受精和胚胎发育能力的主要决定因素。卵母细胞成熟障碍影响受精及早期胚胎发育。本论文的主要内容是使用全外显子组测序和Sanger测序技术,探究卵母细胞成熟障碍的致病基因。第一章以卵母细胞成熟障碍家系为研究对象,发现了卵细胞特异性转录因子TBPL2隐性突变可致卵母细胞成熟障碍;第二章在我们前期研究基础上,扩大样本量,进一步研究透明带蛋白ZP基因在卵母细胞退变患者中的致病作用;第三章总结了TUBB8基因在山东人群卵母细胞成熟障碍患者中的变异特征。第一章 TBPL2基因突变引起卵母细胞成熟障碍的机制研究研究背景及目的:成熟的卵母细胞是成功妊娠的重要前提。卵母细胞成熟障碍会引起受精失败及合子或胚胎发育阻滞。随着辅助生殖技术在治疗不孕症中的普遍使用,临床上发现有部分罕见患者表现为多个周期的卵母细胞成熟障碍和/或早期胚胎发育阻滞,导致治疗周期失败。卵母细胞成熟障碍的致病基因与机制尚未明确,研究报道遗传原因可能占主要因素。然而,目前已知的致病基因突变仅能解释约30%的卵母细胞成熟障碍患者,仍有很大部分的卵母细胞成熟障碍患者的致病原因尚未明了。因此,本章研究的目的是利用卵母细胞成熟障碍不孕家系,定位新的卵母细胞成熟障碍的致病基因。研究方法:对2个独立的卵母细胞成熟障碍家系进行全外显子组测序,根据变异位点的类型、频率、致病性预测、基因表达量和功能注释等标准筛选变异位点,对筛选得到的位点在患者和家系成员中进行Sanger测序验证。利用Clustal Omega软件分析突变位点的序列保守性,生物学软件预测突变位点的致病性,并依据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)推荐的指南和标准对变异位点进行评估分类。为验证两个家系的突变位点是否独立,对两个家系的先证者进行短串联重复序列(STR)位点检测。使用minigene实验在体外研究剪接位点突变对mRNA完整性的影响;利用卵母细胞cDNA测序在体内补充验证突变对剪接的影响。对患者及对照的卵母细胞进行单细胞转录组学测序,分析突变对卵母细胞转录组的影响。研究结果:在两个以卵母细胞成熟障碍为特征的独立家系中发现了TATA-box binding protein like 2(TBPL2)基因的同一个纯合剪接突变 c.788+3A>G,p.R233X。突变位于TBPL2的核心功能域C-端结构域,且位点的位置在不同物种之间高度保守。生物信息学预测该突变可能影响剪接。依据ACMG推荐的标准和指南,该变异被评估为致病的。STR位点分析显示,两个家系的突变位点是独立的。体外minigene实验及卵母细胞cDNA测序发现,突变破坏了 TBPL2 mRNA的完整性,引起外显子4跳跃缺失,导致产生一个仅有232个氨基酸的截短蛋白,且该蛋白缺失大部分的核心功能域。TBPL2是脊椎动物卵母细胞特异性表达的通用转录因子,与卵母细胞特异表达基因的启动子结合并调节其表达,因此我们分析了突变患者卵母细胞转录组的变化。单卵转录组测序结果显示,突变引起卵母细胞下调基因明显多于上调基因,下调基因主要富集在RNA转录相关的通路。与卵母细胞成熟、受精和早期胚胎发育相关的基因如BMP15、GDF9、ZP1、ZP4、TLE6和KHDC3L等关键基因的表达显著下调,表明转录因子TBPL2突变导致卵母细胞基因表达的广泛改变。研究结论:TBPL2基因在女性生殖中具有重要作用。TBPL2基因纯合突变c.788+3A>G破坏mRNA的完整性,产生缺失大部分核心功能域的截短蛋白,导致卵母细胞成熟、受精及早期胚胎发育相关的关键基因的表达明显下调,进而可能影响卵母细胞成熟与早期胚胎发育。第二章ZP相关基因在卵母细胞成熟障碍中的作用及机制研究研究背景及目的:我们课题组前期研究发现ZP3基因突变破坏ZP3与ZP2蛋白的结合,阻碍透明带形成,导致卵母细胞成熟障碍,表现为卵子退变。该类患者表现为辅助生殖治疗时的控制性超促排或自然周期中,B超监测卵泡发育大小和数量正常,血雌激素值正常,而取卵时反复抽吸及冲洗卵泡,仅获得退变的卵母细胞或空粘液团,即属于真性空卵泡综合征(empty follicle syndrome,EFS)。然而,人类透明带(zonapellucida,ZP)蛋白包含ZP1-4,除了 ZP3突变,其他ZP基因突变是否也参与卵子退变,期望发现致病基因突变解释空卵泡综合征的病因。研究方法:本研究收集了迄今为止最大报道样本量-35例的真性EFS患者外周血样本,所有患者在不同的生殖中心进行了 1～6个治疗周期,但是没有获得卵母细胞或仅获得退变的卵母细胞。对患者外周血样本提取基因组DNA,并进行全外显子组测序和Sanger测序,按照严格的标准包括变异位点的类型、频率、致病性预测、基因表达量和功能注释等筛选变异位点,对筛选得到的位点在患者与家系其余成员中进

关键词：卵母细胞成熟障碍女性不孕症 TBPL2 基因突变卵母细胞成熟障碍卵母细胞退变空卵泡综合征女性不孕症透明带编码基因 MI阻滞多原核形成基因突变卵母细胞成熟阻滞 TUBB8

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