检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2015年第3期31卷 394-402页

作者：俞晓丽王宁马洋洋万千惠秦明鸣王华岩西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心陕西杨凌712100 宁夏医科大学人体解剖学与组织胚胎学系生育力保持教育部重点实验室宁夏生殖与遗传重点实验室宁夏银川750004

干细胞通过诱导培养,在体外能够分化为卵母细胞样细胞(Oocyte-like cell,OLC),将其置于体内环境能够有效地改善OLC的质量和发育能力。通过检测猪卵泡液中激素和Bmp 15蛋白的含量,选取了中等卵泡的卵泡液对人羊水干细胞进行体外诱导培养,... 详细信息

干细胞通过诱导培养,在体外能够分化为卵母细胞样细胞(Oocyte-like cell,OLC),将其置于体内环境能够有效地改善OLC的质量和发育能力。通过检测猪卵泡液中激素和Bmp 15蛋白的含量,选取了中等卵泡的卵泡液对人羊水干细胞进行体外诱导培养,10 d后,经实时定量PCR检测发现,早期生殖细胞样细胞团高表达生殖基因oct4和重新甲基化转移酶基因dnmt3b。将这些细胞团用猪卵泡膜包裹后形成移植物,移植到小鼠肾被膜下。1个月后取出移植物,发现移植物内的细胞在形态上,不仅与正常的卵母细胞极为相似,而且还表达生殖细胞和卵母细胞特异标记基因(oct4、nanog、stella、ifitm3、dazl、nanos3、bmp15和gdf9)。证明技术体系能够有效改善OLC的形成和发育能力。

关键词：人羊水干细胞卵母细胞样细胞骨形成蛋白15 卵泡液分化

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成年干细胞分化为卵母细胞样细胞的研究进展

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生殖与避孕 2009年第5期29卷 314-318页

作者：熊明娣杨蓓米美玲邹挺南昌大学医学院生理教研室南昌330006

近年研究表明不仅胚胎干细胞、胚胎性腺和皮肤细胞能分化产生卵母细胞,而且成年骨髓干细胞能表达生殖干细胞的标志基因、移植雌鼠骨髓细胞可使不育的受体卵巢中重新出现卵母细胞和卵泡,卵巢表面上皮细胞能形成生殖细胞样细胞,并分化为... 详细信息

近年研究表明不仅胚胎干细胞、胚胎性腺和皮肤细胞能分化产生卵母细胞,而且成年骨髓干细胞能表达生殖干细胞的标志基因、移植雌鼠骨髓细胞可使不育的受体卵巢中重新出现卵母细胞和卵泡,卵巢表面上皮细胞能形成生殖细胞样细胞,并分化为透明带蛋白阳性的卵母细胞和组装形成新的初级卵泡,以及胰腺干细胞也能诱导出现干细胞标志物、生殖细胞标志物以及减数分裂标志基因表达,产生卵母细胞样细胞,但是这些新产生的卵母细胞是否有正常功能受到质疑,卵母细胞生成调控的分子基础正在进一步探索之中。

关键词：卵母细胞样细胞骨髓干细胞成年干细胞分化

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卵母细胞样细胞体外产生的研究进展

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河北医科大学学报 2021年第9期42卷 1109-1113页

作者：张荣李宁(综述) 杨秋云刘广芝(审校) 河南省人民医院妇产科河南郑州450066 河南省人民医院国际医疗中心河南郑州450003 河南省人民医院干细胞研究中心河南郑州450003

干细胞技术在多个系统的多种疾病中取得了巨大进展,在生殖领域,利用干细胞体外诱导分化的细胞模型是探索人类卵子发生调控过程的有力工具,干细胞分化产生的功能成熟的配子在早发性卵巢功能不全的细胞治疗中有一定前景。笔者简要介绍了... 详细信息

干细胞技术在多个系统的多种疾病中取得了巨大进展,在生殖领域,利用干细胞体外诱导分化的细胞模型是探索人类卵子发生调控过程的有力工具,干细胞分化产生的功能成熟的配子在早发性卵巢功能不全的细胞治疗中有一定前景。笔者简要介绍了由卵巢干细胞、间充质干细胞、诱导多能干细胞、胚胎干细胞、皮肤衍生干细胞及极小胚胎样干细胞体外诱导分化产生卵母细胞样细胞的研究进展,以期为探索卵子的发生调控机制提供可能的细胞模型,并为卵巢功能不全患者提供可能的细胞治疗方法。

关键词：卵母细胞卵母细胞样细胞干细胞

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骨形成蛋白-15示踪猪羊水干细胞向卵母细胞样细胞诱导分化

骨形成蛋白-15示踪猪羊水干细胞向卵母细胞样细胞诱导分化

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作者：秦明鸣西北农林科技大学

学位级别：硕士

骨形成蛋白-1（5Bone morphorgenetic protein-15，BMP-15）与生长分化因子-9（Growthdifferention factor9，GDF-9）同属于转移生长因子-β（Transforming differentiation factor β，TGF-β）家族的成员，具有相似的生物学功能。研究表明，BMP-15在卵母细胞中特异表达，对雌性生殖细胞的生长发育发挥重要作用。本实验从9种不同猪组织和4种不同细胞系中检测BMP-15和GDF-9的表达特异性，构建BMP-15、GDF-9报告载体，检测启动子在不同细胞中的活性。通过显微操作方法检测BMP-15在体外成熟卵母细胞中的表达。由于BMP-15具有组织表达特异性，将其作为标记应用于体外雌性生殖细胞的诱导研究是可行的。猪羊水干细胞（amniotic fluid stem cell，AFSC）是一种Oct4阳性的多能性干细胞，具有高分化潜能、强增殖能力等优点，可作为体外获得卵母细胞样细胞（oocyte-like cell，OLC）的种子细胞。构建稳转pBMP15-EGFP的猪AFSC系BMP15-AFSC，诱导该细胞向OLC分化。通过RT-PCR、免疫荧光等技术对体外诱导分化的BMP15-AFSC进行生物学特性检测，在体外转分化干细胞过程中验证报告载体的示踪能力。一、猪BMP-15的组织特异性表达采集成体猪的9种不同组织，包括卵巢、睾丸、胃脏、肝脏、肌肉、肾脏、心脏、胸腺和肺脏，用RT-PCR方法检测BMP-15和GDF-9在这些组织中的表达。结果显示BMP-15比GDF-9具有更强的组织特异性，仅在卵巢组织中高表达。RT-PCR检测BMP-15、GDF-9在猪卵母细胞、中国仓鼠卵巢细胞（CHO）、小鼠成肌细胞（C2C12）和猪AFSC中的表达，结果显示，BMP-15仅在猪卵母细胞和CHO中表达，而GDF-9还可以在猪AFSC中表达。这从分子生物学角度说明BMP-15可以作为猪AFSC诱导分化为OLC过程中的一个特异性标记。通过免疫组织化学方法定位BMP-15在猪卵巢组织中的表达，结果显示BMP-15可在初级卵母细胞、次级卵母细胞和成熟卵母细胞中表达。二、猪pBMP15-EGFP、pGDF9-EGFP报告载体的构建及活性检测从猪的卵巢组织中克隆了长度分别为2.2kb和1.7kb的BMP-15和GDF-9启动子片段，与pEGFP-1载体连接，构建了pBMP15-EGFP和pGDF9-EGFP报告载体。将报告载体分别转染CHO、C2C12和猪AFSC细胞，结果显示BMP-15启动子仅在CHO中有表达，而GDF-9启动子在CHO和猪AFSC中都有表达，从而验证采用BMP-15作为猪AFSC体外诱导的示踪标记是可行的。为了进一步检测BMP-15在卵母细胞成熟及孤雌激活过程中的表达功能，将“BMP15-EGFP”DNA片段注射GV期猪卵母细胞中，在荧光显微镜下观察细胞成熟过程中的绿色荧光的表达。结果显示，体外成熟培养9h、18h、27h时，均观察到绿色荧光表达阳性的细胞，而在2、4-细胞期胚胎中，荧光强度明显减弱，说明BMP-15在孤雌胚胎期不再发挥主要作用。三、BMP-15示踪猪AFSC诱导分化为OLC 将pBMP15-EGFP转染猪AFSC，通过G418药物筛选，建立了稳转细胞系（BMP15-AFSC）。体外特异性诱导该细胞向OLC分化，通过荧光显微镜观察绿色荧光的表达和细胞形态的变化。结果显示诱导4天时，在成纤维样细胞中观察到绿色荧光；8天时细胞形态多变为圆形，并且这些圆形细胞呈GFP阳性；诱导12天时，细胞多成圆团状出现，且绿色荧光明显表达。免疫荧光结果显示，诱导过程中SCP3基因逐渐表达。RT-PCR结果显示，诱导12天的细胞表达c-Mos、FSHR、p450c17、StAR、ZP3和DAZL等生殖标志基因。总之，上述研究结果验证了BMP15报告载体可以作为卵子发生的一个特异标记，从而实现对猪AFSC向卵母细胞的诱导过程进行示踪的目的。

关键词：猪 BMP-15 启动子羊水干细胞卵母细胞样细胞

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hAMSC对小鼠卵巢上皮细胞向卵母细胞样细胞分化的影响

hAMSC对小鼠卵巢上皮细胞向卵母细胞样细胞分化的影响

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作者：龚九妹遵义医学院

学位级别：硕士

目的:建立人羊膜间充质干细胞(h AMSC)和小鼠卵巢上皮细胞(OSEC)共培养模型,初步探讨h AMSC对小鼠OSEC向卵母细胞样细胞分化的影响。方法:采用酶消化法和差速贴壁法分离、纯化hAMSC和小鼠OSEC,流式细胞术和免疫细胞化学染色分别鉴定h A... 详细信息

目的:建立人羊膜间充质干细胞(h AMSC)和小鼠卵巢上皮细胞(OSEC)共培养模型,初步探讨h AMSC对小鼠OSEC向卵母细胞样细胞分化的影响。方法:采用酶消化法和差速贴壁法分离、纯化hAMSC和小鼠OSEC,流式细胞术和免疫细胞化学染色分别鉴定h AMSC和OSEC。应用transwell板,建立h AMSC和小鼠OSEC共培养模型,观察h AMSC对小鼠OSEC细胞形态变化,免疫组化、图像分析与实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测上皮细胞、多能性和生殖细胞标志物的m RNA和蛋白表达。结果:1 P4代h AMSC呈长梭形、漩涡状贴壁生长,流式细胞术鉴定h AMSC高表达CD44、CD90、CD73、CD105,不表达或低表达CD45、CD34、CD19、CD11b和HLA-DR。2免疫细胞化学染色结果显示,传至P2代的小鼠OSEC阳性表达广谱角蛋白Pan-cytokeratin,提示小鼠OSEC为上皮细胞性来源。P3 OSEC与h AMSC共培养组与OSEC单独培养组OSEC均表达上皮角蛋白Pan-cytokeratin阳性,并可表达生殖细胞特异性的标志物Ddx4/MVH和多能性标志蛋白Oct4,且共培养组小鼠OSEC Pan-cytokeratin、Ddx4/MVH、Oct4三种蛋白表达明显高于单独培养组(P<0.05)。3 RT-PCR检测结果显示,共培养组小鼠OSEC生殖干细胞特征标志性基因Gdf9、Nanog、Ddx4/MVH m RNA表达量显著高于单独培养组(P<0.05),但两组OSEC中均未到ZP基因m RNA的表达。结论:体外培养的小鼠OSEC表达上皮来源标志Pan-cytokeratin及多能性标志蛋白Oct4、Nanong和生殖细胞特征性标志物Ddx4/MVH和Gdf9,表明OSEC可能是一种重要的卵巢干细胞来源;h AMSC与OSEC共培养,可促进OSEC向卵母细胞样细胞分化。

关键词：卵巢生殖干细胞卵巢上皮细胞卵母细胞样细胞人羊膜间充质干细胞

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干细胞向卵母细胞样细胞分化研究进展

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中华临床医师杂志（电子版） 2014年第5期8卷 101-104页

作者：范静姜宏安徽医科大学解放军临床学院生殖医学中心合肥230031

胚胎干细胞和成体干细胞如骨髓间充质干细胞等在特定的培养条件下可向卵母细胞样细胞分化,但形成的卵母细胞样细胞能否进行减数分裂并进一步生成有受精能力和发育潜能的配子尚不清楚。若能在体外将成体干细胞向有功能的卵母细胞样细胞... 详细信息

胚胎干细胞和成体干细胞如骨髓间充质干细胞等在特定的培养条件下可向卵母细胞样细胞分化,但形成的卵母细胞样细胞能否进行减数分裂并进一步生成有受精能力和发育潜能的配子尚不清楚。若能在体外将成体干细胞向有功能的卵母细胞样细胞诱导分化,并通过体外受精的方式生成健康的子代,将为卵子缺乏所致不育女性提供一条新的治疗途径。本文对近年发表的有关干细胞体外向卵母细胞样细胞分化的文献进行综述,以探讨其临床应用的可行性。

关键词：胚胎干细胞成体干细胞细胞分化不育卵母细胞样细胞

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hAMSCs对小鼠卵巢上皮细胞向卵母细胞样细胞分化的影响

hAMSCs对小鼠卵巢上皮细胞向卵母细胞样细胞分化的影响

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中国药理学会第十届全国基础与临床生殖药理学术研讨会暨2017育英生殖药理论坛

作者：余丽梅龚九妹范振海王钰莹罗欣刘荣霞遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室贵州省骨髓与羊膜干细胞基础与临床研究科技创新团队

目的:探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSC)对小鼠卵巢上皮细胞(OSEC)向卵母细胞样细胞分化的影响。方法:采用酶消化法和差速贴壁法分离、纯化hAMSC和小鼠OSEC,并用transwell板进行共培养,流式细胞术和免疫细胞化学染色鉴定,实时荧光定量聚合... 详细信息

目的:探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSC)对小鼠卵巢上皮细胞(OSEC)向卵母细胞样细胞分化的影响。方法:采用酶消化法和差速贴壁法分离、纯化hAMSC和小鼠OSEC,并用transwell板进行共培养,流式细胞术和免疫细胞化学染色鉴定,实时荧光定量聚合酶链反应检测标志基因表达变化。结果:P4代hAMSC呈长梭形、贴壁生长,高表达CD44、CD90、CD73、CD105,不表达CD45、 CD34、 CD19、 CD11b和HLA-DR。P2代小鼠OSEC阳性表达上皮角蛋白Pan-cytokeratin。P3代OSEC与hAMSC共培养后,OSEC所阳性表达Pan-cytokeratin和生殖细胞特异性标志物Ddx4/MVH及多能性标志蛋白Oct4的水平明显高于单独培养的OSEC(P<0.05)。共培养组OSEC表达生殖干细胞特征标志性基因Gdf9、Nanog、Ddx4/MVHmRNA水平显著高于单独培养组(P<0.05),但两组OSEC中均未到ZP基因m RNA表达。结论:OSEC可能是一种重要的卵巢干细胞来源,与hAMSC共培养后,可促进OSEC向卵母细胞样细胞分化。

关键词：人羊膜间充质干细胞卵巢卵巢表面上皮细胞卵母细胞样细胞

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诱导骨髓SSEA-1^+干细胞向卵母细胞分化的初步研究

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生殖与避孕 2015年第8期35卷 538-543,560页

作者：范静姜宏殷慧群汪存利何瑞冰解放军第105医院生殖医学中心合肥230031

目的:探讨骨髓SSEA-1+干细胞向卵母细胞分化的潜能。方法:采用免疫磁珠分选系统(MACS)分选骨髓中SSEA-1+干细胞,接种于小鼠成纤维细胞(mE Fs)饲养层上,在含1 000 U/ml白血病抑制因子(LIF)的DMEM/F12培养液中将SSEA-1+干细胞传代培养至第... 详细信息

目的:探讨骨髓SSEA-1+干细胞向卵母细胞分化的潜能。方法:采用免疫磁珠分选系统(MACS)分选骨髓中SSEA-1+干细胞,接种于小鼠成纤维细胞(mE Fs)饲养层上,在含1 000 U/ml白血病抑制因子(LIF)的DMEM/F12培养液中将SSEA-1+干细胞传代培养至第2代(P2),撤去饲养层,在含20 ng/ml骨形成蛋白4(BMP4)的培养液中进行定向诱导,并分阶段加入体积分数10%人卵泡液、0.005 IU/ml卵泡刺激素(FSH)和0.003 IU/ml黄体生成素(LH)。光学显微镜下观察细胞形态学变化,检测不同发育阶段生殖细胞相关特异性基因Dazl、Fragilis、Mvh、Nobox、Oct4、Stella、STRA8、Gdf9的表达。结果:骨髓SSEA-1+干细胞生殖细胞相关特异性基因表达水平均显著高于骨髓单个核细胞和SSEA-1-细胞(P<0.05)。小鼠骨髓SSEA-1+干细胞与m EFs共培养后呈圆形,碱性磷酸酶染色阳性,显示细胞处于未分化状态。BMP4诱导7 d SSEA-1+干细胞形成细胞集落,14 d可见类胚体(EB)样结构形成,21 d可观察到卵母细胞样结构,且随诱导时间的延长生殖细胞相关特异性基因尤其卵母细胞减数分裂基因Stra8和Gdf9表达水平显著升高。结论:骨髓SSEA-1+干细胞具备向类卵母细胞样细胞分化的潜能。

关键词：骨髓间充质干细胞(BMSCs) 卵母细胞样细胞骨形成蛋白4(BMP4) 细胞分化 qRT-PCR

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FSH、hCG对骨髓间充质干细胞悬滴培养形成卵泡样结构和分泌性激素的影响

FSH、hCG对骨髓间充质干细胞悬滴培养形成卵泡样结构和分泌性激素...

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作者：陈婷南昌大学

学位级别：硕士

目的：本研究采用雌性大鼠骨髓间充质干细胞(female bone marrow mensenchymalstem cells, FBMSCs)悬滴培养再转入平板培养，观察是否能分化为有功能性的卵泡样结构和有否卵母细胞样细胞排出，是否产生性激素，观察影响性腺发育的全反... 详细信息

目的：本研究采用雌性大鼠骨髓间充质干细胞(female bone marrow mensenchymalstem cells, FBMSCs)悬滴培养再转入平板培养，观察是否能分化为有功能性的卵泡样结构和有否卵母细胞样细胞排出，是否产生性激素，观察影响性腺发育的全反式视黄酸(retinoic acid, RA)、卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone, FSH)及人绒毛膜促性腺激素(Human chorionic gonadotropin, hCG)对其分化效果有否影响，为骨髓移植后部分女性病人恢复生殖功能及FBMSCs移植治疗卵巢早衰、骨质疏松的机理提供实验依据，为人造卵巢研究奠定基础。方法：全骨髓贴壁法分离成年雌性SD大鼠的骨髓干细胞,用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养增殖,传代至第2代,以加入20%胎牛血清的DMEM培养液为基本培液,用悬滴培养3天转平板培养方法，加RA、FSH及hCG诱导分化，倒置显微镜观察细胞的形态学变化，是否出现功能性的卵泡样结构和卵母细胞样细胞排出;放射免疫法（RIA）测定各组培养液的雌二醇、睾酮、孕酮和雄烯二酮浓度变化，分析FBMSCs诱导分化细胞产生雌二醇、睾酮、孕酮和雄烯二酮的能力及对促性腺激素的反应性，判断是否产生有功能的卵泡和卵母细胞样细胞;实时定量PCR方法检测卵母细胞标志物SCP3、ZP3和GDF-9、卵泡膜细胞标志物LHR和P450scc及颗粒细胞标志物FSHR和P450arom等表达，western blot和免疫细胞化学方法检测SCP3、ZP3、LHR和FSHR表达。结果： 1、离体培养的第2代雌性大鼠骨髓干细胞，主要表现为大小均一、梭形的贴壁细胞,表达CD44、CD71,不表达CD34、CD45,表明是FBMSCs。 2、FBMSCs悬滴培养3天转平板培养,获得能够长期培养不断增殖、分化的细胞团。 3、以加入20%胎牛血清的DMEM培养液为基本培液,4周内对照组与加入RA、FSH、hCG处理组的FBMSCs能够增殖、分化并形成细胞团,4周后RA组细胞团和细胞数减少,而FSH、hCG与对照组FBMSCs继续增殖、分化、形成更大细胞团和卵泡样结构,并有卵母细胞样细胞排出(64天)。 4、RT-PCR和Real Time PCR结果表明对照组、RA组、FSH组和hCG组FBMSCs均表达Stra8、Oct4、C-kit、Vasa、SCP3、ZP3、GDF-9、FSHR、Follistatin、P450arom、LHR和P450scc;免疫细胞化学结果表明4组FBMSCs均有SCP3、FSHR、LHR、ZP3阳性细胞;Western blot结果表明4组FBMSCs均有SCP3、FSHR、ZP3蛋白质表达,表明FBMSCs能够向卵母细胞样细胞、颗粒细胞样细胞和卵泡膜细胞分化。 5、两批次用RIA测定4组培养液中性激素浓度,第一批测0天、悬滴转平板培养后4组1、3、5、7、10、14、18、21、28、37、43天,结果表明雌二醇在21-43天4组都有明显增加,雄烯二酮和睾酮在10-21天、孕酮在5-7天4组都有明显减少,第二批测0天、30、48、64天4组培养液中的性激素浓度,雌二醇在48、64天而雄烯二酮和睾酮在30-64天4组都有明显增加,孕酮无明显变化。结论：悬滴培养转入平板培养的4组FBMSCs均可形成卵泡样结构和有卵母细胞样细胞从中排出，并可合成、分泌性激素，表明FBMSCs可诱导分化为卵母细胞样细胞、颗粒细胞样细胞、卵泡膜细胞，产生有一定功能的卵泡样结构。

关键词：雌性骨髓间充质干细胞分化卵泡样结构卵母细胞样细胞性激素

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