检索结果-内蒙古大学图书馆

中国组织工程研究 2025年第7期29卷 1395-1400页

作者：何龙才宋文学明江陈光唐王军浩廖益东崔君拴徐卡娅贵州医科大学贵州省贵阳市550004 贵阳市第一人民医院贵州省贵阳市550002 贵州医科大学附属医院神经外科贵州省贵阳市550004 贵州医科大学附属医院高压氧科贵州省贵阳市550004

背景:原代皮质神经元和小胶质细胞在探索神经系统疾病细胞疗法中起着至关重要的作用,而目前获得2种细胞的方法大多较繁琐,需分别单独提取。因此找到一种便捷、快速可同时提取2种细胞的方法十分关键。目的:探索一种新型同时提取原代皮质... 详细信息

背景:原代皮质神经元和小胶质细胞在探索神经系统疾病细胞疗法中起着至关重要的作用,而目前获得2种细胞的方法大多较繁琐,需分别单独提取。因此找到一种便捷、快速可同时提取2种细胞的方法十分关键。目的:探索一种新型同时提取原代皮质神经元及小胶质细胞的方法。方法:取24 h内新生SD大鼠乳鼠,将大脑取出放入装有DMEM的培养皿中,去除软脑膜后备用。同一脑组织,先提取原代神经元,再将剩余脑组织用于提取小胶质细胞,整个过程在冰上操作。原代皮质神经元提取培养步骤:镊子夹取2.0-3.0 mm厚度大脑皮质组织置于培养皿,用木瓜蛋白酶消化20 min,中止消化后吹打组织呈互相粘连的组织悬液,吸上清细胞悬液,过滤、分装到15 mL离心管中,离心并重悬后将细胞接种于左旋多聚赖氨酸包被的6孔板爬片上放入细胞培养箱,每隔1 d观察神经元形态,第7天进行MAP2和β-Tubulin免疫荧光染色鉴定。小胶质细胞提取培养步骤:夹取上一步取皮质后剩余脑组织,厚度8-10 mm,置于培养皿,用胰酶消化20 min,中止消化后吹打组织呈匀浆,然后将匀浆转移到培养瓶中培养,第14天将培养瓶封口后进行恒温水平摇床振荡2 h,小胶质细胞脱落于上清中;取纯化后的小胶质细胞继续培养3 d进行Iba1免疫荧光染色鉴定。结果与结论:(1)神经元培养24 h后贴壁、胞体变大,部分神经元长出突触;培养到第3,5天时胞体进一步增大,大部分神经元已呈突触形态,部分神经元成团生长;第7天时,神经元突触延长增粗并互相连接成网。经β-Tubulin、MAP2免疫荧光染色鉴定为神经元。(2)小胶质细胞培养第1天换液后可见细胞贴壁生长;第3,5,7天时细胞密度均较小,细胞形态呈高亮椭圆或圆形,但已基本成团块状生长于其他细胞上层;第10天时小胶质细胞密度明显增大;第14天时小胶质细胞呈致密团块状生长于其他细胞上层,此时可进行分离纯化。取分离纯化后细胞再培养至第3天,经Iba1免疫荧光鉴定为小胶质细胞,且纯度大于95%。(3)结果表明,经此法提取并培养获得的原代皮质神经元和小胶质细胞纯度高、形态好、成活率高。

关键词：原代皮质神经元小胶质细胞 SD大鼠细胞提取细胞培养

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体外培养原代皮质神经元糖氧剥夺/复糖复氧模型筛选与亚低温有联合作用的神经保护剂的研究

体外培养原代皮质神经元糖氧剥夺/复糖复氧模型筛选与亚低温有联...

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作者：高筱雅南方医科大学

学位级别：博士

研究背景：\n 中国脑血管病年均发病率为193-779/10万，死亡率81-441/10万不等，已经成为中国第一位的死因和致残原因。缺血性脑血管病——脑梗死占脑血管病的大多数，其中大面积脑梗死的死亡率可高达80％，且绝大部分导致严重残疾... 详细信息

研究背景：\n 中国脑血管病年均发病率为193-779/10万，死亡率81-441/10万不等，已经成为中国第一位的死因和致残原因。缺血性脑血管病——脑梗死占脑血管病的大多数，其中大面积脑梗死的死亡率可高达80％，且绝大部分导致严重残疾。脑血管病的高发病率、高致死率、高致残率，给社会和家庭带来沉重的负担。\n 如何降低大面积脑梗死的致残率和致死率是目前研究的热点和难点。脑缺血后神经细胞的损害是一系列缺血级联效应的后果，包括线粒体功能紊乱、细胞内钙超载、高钠和低K+、ROS和NO生成增加、兴奋性氨基酸毒性、炎性因子及粘附分子释放增加、微血管阻塞、血脑屏障破坏、Caspase蛋白家族的级联激活等。在梗死后几分钟到几天，不同的病理过程在时间上互相重叠并起到推波助澜的作用。脑梗死病变区按缺血的程度可分为缺血核心区和缺血半暗带区。核心区内细胞因完全缺血、过度激活的兴奋性神经递质/受体的毒性等致使细胞在几分钟内死亡。缺血半暗带区的细胞因缺血后周边侧枝循环的再灌注，还有存活的可能。由于再灌注时间窗只有4.5h，许多患者就诊时核心区的细胞已不可逆死亡，因此靶向干预缺血半暗带区是目前实验研究和临床治疗的主要目标。\n 在脑保护治疗中，治疗性低温是目前被临床证明有效的脑保护措施之一。亚低温通常指28～35℃，而临床广泛应用的是33-34℃。亚低温在颅脑外伤、心肺复苏后缺血缺氧性脑病和新生儿窒息的治疗中都取得了卓著的成绩。但是，亚低温在脑梗死治疗方面的应用近年才刚刚起步，实验室及临床的证据尚不充足。我们前期的研究表明，亚低温可以缩小MCAO大鼠的梗死灶面积，但是神经功能评分并没有随之改善，因此需要进一步采取措施提高疗效。此外，亚低温治疗也有许多副作用，如寒战，过度镇静抑制呼吸功能，以及长时间亚低温使肺部感染、下肢深静脉血栓等并发症发生率增加等等。因此，有必要联合应用有协同作用的药物，以进一步改善亚低温治疗的效果，改善脑梗死的预后。\n 目前有报道在体外或体内实验中具有神经保护作用的药物很多，从其作用机制来看，包括谷氨酸受体阻滞剂、γ-氨基丁酸受体激动剂、钙离子拮抗剂、自由基清除剂、抗生素和免疫抑制剂、生长因子类、5-羟色胺受体激动剂、膜成分及其稳定剂、脑代谢剂、神经肽类、抗糖尿病药物、激素类、中成药及各种新药等。但是，这些药物在临床转化方面均遇到了障碍。究其原因，除了动物实验设计缺陷、种族差异、药物疗效不够显著、临床应用时机大多晚于实验研究、副作用过大等之外，还因为脑梗死后的损害涉及到多个相互关联、互相重叠的病理机制，而一种药物仅仅作用于缺血级联的一个或某几个环节，作用靶点过于单一，不能对缺血级联产生有效应的结果。基于脑梗死病理机制的复杂性和多样性，联用多种有协同作用的药物或治疗方法有可能取得突破性的效果，如联合非药物性神经保护手段——治疗性低温。\n 在亚低温与神经保护剂联合应用方面国内外均有所涉猎。国内外和我们前期的研究都证实，某些药物如硫酸镁、脑源性神经生长因子等，在与亚低温联用治疗实验动物脑梗死时表现出协同效应。但是，目前国内外尚未有研究对现有的神经保护剂与亚低温联用的疗效进行过系统的筛选。\n 我们根据神经保护剂的作用机制、可获得性、毒性、易用性等特点选取了26种神经保护剂纳入研究。与动物模型和人体实验相比，体外糖氧剥夺/复糖复氧(OGD/R)模型可在体外模拟不同程度的缺血/再灌注状态，实验条件更一致，并能进行高通量的单药或复合药物筛选，耗时耗资少，具有动物模型及人体实验不可比拟的优越性;而神经元细胞是脑组织中的主要细胞，其预后决定了脑组织的总体预后，因此我们首先建立了原代皮质神经元的重度OGD/R模型，然后利用这一模型对26个神经保护剂与亚低温的联合作用进行了筛选。我们选取了细胞活力和凋亡率作为药物筛选的两个主要指标，前者反映活细胞数目的多少，后者反映细胞受损伤的程度。此外，脑梗死后的缺血级联过程中与神经元细胞有关的几个主要环节包括:细胞内钙超载、线粒体膜电位下降、ROS生成、NO生成、Caspase-3的激活，因此我们进一步验证了筛选出的药物与亚低温联合治疗对这些环节的保护作用。\n 研究目的:\n (1)利用体外培养原代皮质神经元重度OGD/R细胞模型筛选与亚低温具有协同作用的神经保护剂;\n (2)在原代皮质神经元的体外重度OGD/R模型中，进一步验证联合应用神经保护剂和亚低温对缺血再灌注级联反应的各个环节的保护作用。\n 研究方法:\n (1)体外培养原代皮质神经元，免疫组化神经元特异标记物β-TubulinⅢ染色鉴定神经元细胞纯度。\n (2)建立原代皮质神经元体外重度OGD/R模型，体外模拟重度脑缺血/再灌注状态。体外培养原代皮质神经元随机分成5组:OG

关键词：脑血管病原代皮质神经元体外糖氧剥夺/复糖复氧模型亚低温治疗神经保护剂

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过表达CYLD对氧糖剥夺/复氧大鼠原代皮质神经元中NF-κB信号通路的影响

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中国细胞生物学学报 2019年第8期41卷 1551-1557页

作者：朱君胥虹贝周雪灵卢文豪罗勇重庆医科大学附属第一医院神经内科

脑卒中是目前导致我国人口寿命缩短的最主要原因之一。在缺血性脑卒中的局灶性缺血/再灌注后,受损脑组织中存在多种复杂的病理生理机制,核因子-κB(nuclear factor kappaB, NF-κB)信号通路参与的炎症反应是重要机制之一。相关研究显示... 详细信息

脑卒中是目前导致我国人口寿命缩短的最主要原因之一。在缺血性脑卒中的局灶性缺血/再灌注后,受损脑组织中存在多种复杂的病理生理机制,核因子-κB(nuclear factor kappaB, NF-κB)信号通路参与的炎症反应是重要机制之一。相关研究显示,头帕肿瘤综合征蛋白(cylindromatosis, CYLD)可以参与NF-κB信号通路的调节。在脑缺血/再灌注损伤中,上调CYLD表达水平,对氧糖剥夺/复氧后NF-κB信号通路是否存在影响?如何影响?尚未见明确报道,这需要我们进一步探究。该研究通过上调CYLD在SD大鼠原代皮质神经元中的表达水平,观察其对氧糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation, OGD/R)后神经元中NF-κB信号通路的影响。使用过表达慢病毒感染体外培养的原代皮质神经元,采用免疫荧光实验鉴定神经元, Western blot及RT-qPCR验证CYLD的过表达情况, CCK-8实验检测细胞活力, Western blot检测p-IκBα的蛋白表达情况, RT-qPCR检测NF-κB p65的mRNA表达情况。结果显示,过表达CYLD慢病毒可有效提高神经元中CYLD的表达水平;过表达CYLD后,较对照组相比,神经元在氧糖剥夺/复氧处理后的活力有所增高, p-IκBα的表达水平有所下降,同时NF-κB p65的m RNA表达水平也明显降低。研究结果表明,在原代皮质神经元中过表达CYLD,能减轻氧糖剥夺/再复氧对神经元的损伤、抑制NF-κB信号通路的激活。

关键词： CYLD NF-κB信号通路原代皮质神经元氧糖剥夺/复氧

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白藜芦醇预处理对缺糖缺氧再灌注损伤大鼠原代皮质神经元的保护作用及机制研究

白藜芦醇预处理对缺糖缺氧再灌注损伤大鼠原代皮质神经元的保护...

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作者：张黎黎重庆医科大学

学位级别：硕士

目的：探讨白藜芦醇预处理对缺糖缺氧再灌注损伤大鼠原代皮质神经元的保护作用及可能机制。　　方法：40μmol/L白藜芦醇预处理大鼠原代皮质神经元24小时,皮质神经元缺糖缺氧150分钟，随即恢复正常培养24小时。实验分为3组，即正常组，... 详细信息

目的：探讨白藜芦醇预处理对缺糖缺氧再灌注损伤大鼠原代皮质神经元的保护作用及可能机制。　　方法：40μmol/L白藜芦醇预处理大鼠原代皮质神经元24小时,皮质神经元缺糖缺氧150分钟，随即恢复正常培养24小时。实验分为3组，即正常组，模型组，白藜芦醇组。MTT法检测细胞活力。化学比色法测定培养上清液LDH活性和细胞内SOD活性。TUNEL检测细胞凋亡。免疫印迹法和免疫荧光法检测蛋白Nrf2、Bcl-2、Caspase-3、NQO-1的表达。　　结果：白藜芦醇组较模型组可显著降低培养上清液LDH活性，增强细胞内SOD活性和神经元细胞活力，减少细胞凋亡，上调Bcl-2、Nrf2和NQO-1蛋白表达，下调Caspase-3蛋白表达，促进Nrf2蛋白从细胞浆转移到细胞核。　　结论：白藜芦醇对大鼠原代皮质神经元缺糖缺氧再灌注损伤有保护作用，其机制可能是通过抗凋亡和抗氧化而实现。

关键词：白藜芦醇预处理原代皮质神经元缺糖缺氧再灌注损伤

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HIF-1α在缺糖缺氧诱导的原代皮质神经元Necroptosis中的表达及其意义

HIF-1α在缺糖缺氧诱导的原代皮质神经元Necroptosis中的表达及其...

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作者：张翠翠徐州医学院

学位级别：硕士

目的：研究低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α, HIF-1α)是否参与缺糖缺氧诱导的原代皮质神经元Necroptosis， necrostatin-1(Nec-1)对其表达是否有影响。 　　方法：原代皮质神经元培养14天，予Casep... 详细信息

目的：研究低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α, HIF-1α)是否参与缺糖缺氧诱导的原代皮质神经元Necroptosis， necrostatin-1(Nec-1)对其表达是否有影响。 　　方法：原代皮质神经元培养14天，予Casepase抑制剂z-VAD-FMK20μmol/L预保护，缺糖缺氧(OGD)2h、再灌注0、2、6、12、24、48h，进行LDH测定RT-PCR测HIF-1αRNA表达；免疫组化定性检测HIF-1α表达情况；Western blot检测总HIF-1α蛋白表达情况；分别提取细胞质、细胞核蛋白，Western blot分别检测胞质、胞核内HIF-1α蛋白表达情况。予不同浓度Nec-1(0.1、1、5、10、25、50μmol/L)，原代皮质神经元OGD后检测LDH, RT-PCR和Western blot测HIF-1αRNA和蛋亡1表达。予YC-1(4μ mol/L)预作用30min, OGD2h再灌注12h检测HIF-1α蛋白表达水平及LDH水平。 　　结果：Casepase抑制剂z-VAD-FMK(20μmol/L)预作用30min，缺糖缺氧2h后培养基中LDH增加（P＜0.05），再灌注12h达高峰；缺糖缺氧后HIF-1αRNA表达无变化（P＞0.05）；免疫组化检测显示细胞核和细胞质内均有蛋白表达；HIF-1α总蛋白表达增加(P＜0.05)，再灌注12h达高峰；神经元OGD2h、再灌注6h时细胞质HIF-1α蛋白表达达高峰(P＜0.05)，随后降低；再灌注12h时，细胞核HIF-1α蛋白表达达高峰(P＜0.05)，随后降低。Nec-15μmol/L时LDH明显降低（P＜0.05），25umol/L时与正常组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。予Nec-125μmol/L时HIF-1α蛋白明显减少（P＜0.05），RNA无明显变化。予YC-1(4μ mol/L)作用后HIF-1α蛋白表达明显降低(P＜0.05), LDH水平明显降低(P＜0.05)。 　　结论：HIF-1α参与了缺糖缺氧诱导的原代皮质神经元Necroptosis, Nec-1能够使HIF-1α蛋白表达降低，起到细胞保护作用。

关键词：坏死样凋亡 HIF-1α necrostatin-1 YC-1 蛋白表达缺糖缺氧原代皮质神经元

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BPDE通过p53--SLC7A11--ALOX12/p53--SAT1--ALOX15通路诱导大鼠原代皮质神经元铁死亡的机制研究

BPDE通过p53--SLC7A11--ALOX12/p53--SAT1--ALOX15通路诱导大鼠原...

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作者：徐昭梦山西医科大学

学位级别：硕士

目的:　　苯并（a）芘-7,8-二氢二醇-9,10-环氧化物（BPDE）作为苯并[a]芘（B[a]P）的最终代谢物，可引起神经细胞损伤和死亡，但其机制尚不清楚。铁死亡是一种以铁依赖性脂质过氧化为特征的新型程序性细胞死亡，在许多神经系统疾病中... 详细信息

目的:　　苯并（a）芘-7,8-二氢二醇-9,10-环氧化物（BPDE）作为苯并[a]芘（B[a]P）的最终代谢物，可引起神经细胞损伤和死亡，但其机制尚不清楚。铁死亡是一种以铁依赖性脂质过氧化为特征的新型程序性细胞死亡，在许多神经系统疾病中发挥了重要作用。BPDE是否能引起神经细胞铁死亡及目前尚不清楚。本研究以大鼠原代皮质神经元为模型，探讨BPDE诱导原代皮质神经元铁死亡及其机制。　　方法:　　取新生0～24h的SD乳鼠大脑皮质，提取并培养大鼠皮质神经元，按照研究目的进行分组处理。1.将大鼠原代皮质神经元分为溶剂对照组（DMSO）和BPDE染毒组（0.125、0.25、0.5 μmol/L）,染毒24h,观察BPDE诱发大鼠原代皮质神经元铁死亡的作用;2.将大鼠原代皮质神经元分为溶剂对照组（DMSO）、BPDE组、BPDE+DFO组和BPDE+Fer-1组，染毒24h,观察铁死亡抑制剂DFO和Fer-1干预对BPDE暴露诱发原代皮质神经元铁死亡的影响;3.将大鼠原代皮质神经元分为溶剂对照组（DMSO）、BPDE组和BPDE+Pifithrin-μ组，染毒24h,观察P53及相关通路在BPDE暴露诱发原代皮质神经元铁死亡中的作用及其机制。　　CCK-8法检测细胞活力;透射电镜观察皮质神经元超微结构变化;用C11-BODIPY探针检测细胞ROS含量;FerroOrange荧光探针检测细胞内Fe2+含量;试剂盒检测细胞谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活力、丙二醛（MDA）含量和总超氧化物歧化酶（SOD）活性;逆转录定量PCR检测p53、SLC7A11、ALOX12、SAT1 和 ALOX15 相对表达量;Western blot 检测 GPX4、ACSL4、SLC7A11、COX2,p53、ALOX12、SAT1 和 ALOX15 蛋白相对表达水平。　　结果:　　***暴露导致大鼠原代皮质神经元铁死亡。随着BPDE染毒剂量的增加，原代皮质神经元细胞活力显著下降(p＜0.01)。电镜结果显示，0.125 μmol/L染毒组的线粒体有一些轻微的变化，出现凋亡小体;在0.25μmol/L染毒组中，线粒体体积缩小，双层膜密度增加，线粒体嵴减少;在0.5μmol/L染毒组中，线粒体明显皱缩，嵴减少甚至消失，膜密度明显增加。与对照组相比，0.125μmol/L、0.25 μmol/L和0.5μmol/L BPDE染毒组细胞中Fe2+的荧光强度显著增加(p＜0.01);0.25 μmol/L和0.5μmol/L BPDE染毒组细胞中ROS的荧光强度显著增加(p＜0.01),GSH含量、GSH-PX活性和SOD活性显著降低(p＜0.01)，MDA含量显著升高(p＜0.01)。Western Blot检测结果显示，与对照组相比，0.25 μmol/L和 0.5 μmol/L BPDE染毒组ACSL4蛋白表达水平显著升高(p＜0.01),SLC7A11蛋白表达水平显著降低(p＜0.01);0.5 μmol/L染毒组COX2蛋白表达水平显著升高(p＜0.01),GPX4蛋白表达水平降低(p＜0.05)。　　用铁死亡抑制剂DFO和Fer-1干预后，0.5 μmol/L染毒组存活率明显升高(p＜0.01),ROS和Fe2+的荧光强度明显减弱(p＜0.01),GSH含量、GSH-PX活性和SOD活性明显上升(p＜0.01),MDA含量明显降低(p＜0.05)。DFO干预可使0.5 μmol/L染毒组ACSL4蛋白表达水平显著降低(p＜0.01),SLC7A11蛋白表达水平显著升高(p＜0.01),COX2蛋白表达水平显著降低(p＜0.01),GPX4蛋白表达水平升高(p＜0.05);Fer-1干预后，0.5 μmol/L染毒组ACSL4蛋白表达水平显著降低(p＜0.05),SLC7A11蛋白表达水平显著升高(p＜0.05);COX2蛋白表达水平显著降低(p＜0.05),GPX4蛋白表达水平升高(p＜0.01)。　　***可导致p53及下游基因的表达水平改变。与对照组相比，0.25μmol/L 和 0.5 μmol/L BPDE 染毒组 p53、SAT1、ALOX 15 和 ALOX 12 mRNA 水平显著升高，SLC7A11 mRNA 水平显著降低(p＜0.05);0.25 μmol/L 和 0.5 μmol/L BPDE染毒组p53、SAT1、ALOX15和ALOX12蛋白表达水平均显著增加(p＜0.05),0.5 μmol/LBPDE染毒组SLC7A11蛋白表达水平显著降低(p＜0.05)。　　3.P53抑制剂Pifithrin-μ可抑制BPDE诱导的大鼠原代皮质神经元铁死亡。Pifithrin-μ干预可使0.5μmol

关键词：二羟环氧苯并芘神经毒性原代皮质神经元铁死亡

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TLR3及其下游蛋白在缺糖缺氧损伤的原代皮质神经元中的表达及意义

TLR3及其下游蛋白在缺糖缺氧损伤的原代皮质神经元中的表达及意义

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作者：王小鹏徐州医学院

学位级别：硕士

目的：探讨TLR3信号转导通路在缺糖缺氧损伤的大鼠原代皮质神经元中的作用机制。 　　方法：体外培养SD大鼠胎鼠原代皮质神经元，分为4组，化学合成的3对小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)和阴性对照(negative ... 详细信息

目的：探讨TLR3信号转导通路在缺糖缺氧损伤的大鼠原代皮质神经元中的作用机制。 　　方法：体外培养SD大鼠胎鼠原代皮质神经元，分为4组，化学合成的3对小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)和阴性对照(negative control，NC)序列通过脂质体转染试剂Hiperfect于第5、7天转染入原代神经元，并于第7天对神经元缺糖缺氧(oxygen-glucose deprivation，OGD)，2小时后复糖复氧重复转染24小时，Western-blot法检测TLR3表达，筛选出最佳转染序列。将神经元分为3组，对照组，OGD组，OGD+siRNA组。对照组神经元正常条件培养;OGD组于第7天缺糖缺氧2小时后复糖复氧24小时;OGD+siRNA组神经元分别于第5、7天行siRNA转染，并于第7天缺糖缺氧2小时后复糖复氧24小时。DAPI荧光染色后于倒置相差显微镜下观察各组神经元凋亡率，Western-blot法检测各组神经元TLR3及其下游蛋白IRF3、IFN-β的表达。SPSS13.0软件进行统计学分析，多组之间比较采用单因素方差分析。 　　结果：***转染神经元筛选实验western-blot结果:与阴性对照组相比，3组siRNA干扰序列抑制TLR3蛋白表达都是有效的，同TLR3-1280，TLR3-418相比，TLR3-1724抑制TLR3表达效果最佳，为最优转染序列(P＜0.05)。 　　***荧光染色结果:对照组未见神经元凋亡。与对照组相比，OGD组、OGD+siRNA组神经元凋亡增加（P＜0.05），与OGD组相比，OGD+siRNA组较OGD组神经元凋亡率低(P＜0.05）。 　　***-blot结果:同对照组相比，OGD组和OGD+siRNA组TLR3、IRF3以及IFN-β表达显著增加(P＜0.05）;同OGD组相比，OGD+siRNA组TLR3、IRF3以及IFN-β表达量较低(P＜0.05)。 　　结论：***3信号转导通路在神经元缺糖缺氧损伤后被激活，TLR3、IRF3、IFN-β表达上调。2.通过siRNA抑制TLR3蛋白的表达可以改善神经元缺糖缺氧损伤状态。

关键词：缺糖缺氧损伤原代皮质神经元 Toll样受体3 细胞表达

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TLR3及其下游蛋白在缺糖缺氧诱导的原代皮质神经元表达及其意义

TLR3及其下游蛋白在缺糖缺氧诱导的原代皮质神经元表达及其意义

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作者：宋璞徐州医学院

学位级别：硕士

目的：通过观察Toll样受体3(Toll-like receptor3，TLR3)及其下游蛋白在TLR3激动剂poly(I：C)-LMW预处理后缺糖缺氧诱导的原代皮质神经元的表达情况，探讨TLR3信号通路在缺血性脑血管病发生后皮质神经元损伤中的作用机制。<br&am... 详细信息

目的：通过观察Toll样受体3(Toll-like receptor3，TLR3)及其下游蛋白在TLR3激动剂poly(I：C)-LMW预处理后缺糖缺氧诱导的原代皮质神经元的表达情况，探讨TLR3信号通路在缺血性脑血管病发生后皮质神经元损伤中的作用机制。 　　方法：取体外培养7天的SD大鼠胎鼠原代皮质神经元细胞，建立体外缺糖缺氧细胞模型。分组如下：1)空白对照组：皮质神经元正常条件培养组；2)缺糖缺氧组(Oxygen-glucose deprivation，OGD组)：缺糖缺氧2小时，复糖复氧24小时；3)TLR3激动剂poly(I：C)预处理组(激动剂组)：TLR3激动剂预处理8小时；4)TRL3激动剂+OGD组：TLR3激动剂预处理8小时后缺糖缺氧2小时，复糖复氧24小时。应用免疫荧光技术观察各组神经元数目及形态变化。以Westernblot法测定TLR3、IRF-3、IFN-β蛋白表达情况，以RT-PCR法测定TLR3 mRNA、IRF-3 mRNA、IFN-β mRNA的表达情况，应用SPSS16.0统计软件包进行数据分析。 　　结果：1.细胞免疫荧光结果显示：与空白对照组相比，OGD组、激动剂+OGD组神经元细胞状态较差，数目较少(P<0.05)，激动剂组与空白对照组相比，细胞状态相似，数目无明显差异(P>0.05)；与激动剂组相比，OGD组、激动剂+OGD组细胞状态较差，数目较少(P<0.05)；与激动剂+OGD组相比，OGD组细胞状态较差，数目较少(P<0.05)。 　　*** blot结果显示：与空白对照组相比，OGD组、激动剂组、及激动剂+OGD组TLR3表达增强(P<0.05)；与激动剂组相比，OGD组、激动剂+OGD组TLR3表达增强(P<0.05)；与激动剂+OGD组相比，OGD组TLR3表达无明显差异(P>0.05)。与空白对照组相比，OGD组、激动剂组、及激动剂+OGD组IRF-3、IFN-β表达增强(P<0.05)；与激动剂组相比，OGD组、激动剂+OGD组IRF-3、IFN-β表达增强(P<0.05)；与激动剂+OGD组相比，OGD组IRF-3、IFN-β表达增强(P<0.05)。 　　***-PCR结果显示：与空白对照组相比，OGD组、激动剂组、及激动剂+OGD组TLR3 mRNA表达增强(P<0.05)；与激动剂组相比，OGD组、激动剂+OGD组TLR3 mRNA表达增强(P<0.05)；与激动剂+OGD组相比，OGD组TLR3 mRNA表达无明显差异(P>0.05)。与空白对照组相比，OGD组、激动剂组、及激动剂+OGD组IRF-3 mRNA、IFN-β mRNA表达增强(P<0.05)；与激动剂组相比，OGD组、激动剂+OGD组IRF-3 mRNA、IFN-β mRNA表达增强(P<0.05)；与激动剂+OGD组相比，OGD组IRF-3 mRNA、IFN-β mRNA表达增强(P<0.05)。 　　结论：1.神经元缺糖缺氧后TLR3及其下游IRF-3、IFN-β表达升高。提示TLR3可能通过MyD88非依赖通路，介导神经元缺血/再灌注的炎性损伤。 　　2.在神经元缺糖缺氧前给予TLR3激动剂Poly(I：C)，可改善缺糖缺氧后神经元的损伤情况。

关键词：脑缺血/再灌注损伤缺糖氧诱导原代皮质神经元 Toll样受体3 作用机制

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大鼠原代皮质神经元中P53与GAP-43的相关性研究

大鼠原代皮质神经元中P53与GAP-43的相关性研究

引用

作者：李天霞内蒙古医科大学

学位级别：硕士

目的：本文通过对大鼠原代皮质神经元的体外培养，探讨GAP-43在P53作用下的表达变化。\n 方法：1.取新生24小时内的Wistar大鼠，在细胞间超净台内无菌条件下通过分离其双侧皮质,进行原代皮质神经元的培养。2.提取大鼠原代皮质神经元... 详细信息

目的：本文通过对大鼠原代皮质神经元的体外培养，探讨GAP-43在P53作用下的表达变化。\n 方法：1.取新生24小时内的Wistar大鼠，在细胞间超净台内无菌条件下通过分离其双侧皮质,进行原代皮质神经元的培养。2.提取大鼠原代皮质神经元，对皮质神经元细胞进行免疫荧光染色并置于倒置荧光显微镜下观察，对观察到的细胞进行拍照。3.通过对大鼠原代皮质神经元的体外培养，应用Real-time PCR技术检测GAP-43mRNA在P53作用下表达含量的变化。\n 结果：1.体外成功建立大鼠原代皮质神经元培养体系。***-43在大鼠皮质神经元中的表达：大鼠原代皮质神经元中，免疫荧光可以观察到细胞核、细胞质、细胞膜中GAP-43的表达。3.通过P53的慢病毒转染使P53高表达，大鼠原代皮质神经元中GAP-43mRNA的表达含量增高。4.加入P53抑制剂可以诱导大鼠原代皮质神经元中GAP-43mRNA的表达含量下降。\n 结论：1.成功建立体外大鼠原代皮质神经元的培养体系。2.大鼠原代皮质神经元细胞中的细胞膜、轴突表达GAP-43。3.大鼠原代皮质神经元中在转录水平上P53与GAP-43具有相关性。

关键词： P53抑制剂药理机制原代皮质神经元 GAP-43基因基因表达

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TLR3在poly(I:C)-LMW预处理后缺糖缺氧诱导的原代皮质神经元的表达意义

引用

中国实用神经疾病杂志 2012年第8期15卷 1-5页

作者：宋璞崔桂云陈伟赵秋宸花放沈霞徐州医学院神经病学教研室(徐州医学院附属医院神经科) 徐州221000 徐州医学院临床医学系徐州221000

目的观察TRL3激动剂poly(I:C)-LMW预处理对原代皮质神经元Toll样受体3(TLR3)表达的影响,探讨TLR3在缺糖缺氧诱导的原代皮质神经元损伤中的作用。方法取体外培养7d的大鼠原代皮质神经元细胞,对细胞分别予以正常条件下培养(空白对照组);... 详细信息

目的观察TRL3激动剂poly(I:C)-LMW预处理对原代皮质神经元Toll样受体3(TLR3)表达的影响,探讨TLR3在缺糖缺氧诱导的原代皮质神经元损伤中的作用。方法取体外培养7d的大鼠原代皮质神经元细胞,对细胞分别予以正常条件下培养(空白对照组);缺糖缺氧2h,复糖复氧24h(OGD组);TRL3激动剂预处理12h(激动剂组);TRL3激动剂预处理12h后缺糖缺氧2h,复糖复氧24h(激动剂+OGD组)。免疫荧光法观察各组细胞生长状态,分别以Western blot法、RT-PCR法测定TLR3蛋白及TLR3mRNA的表达情况。结果与空白对照组相比,激动剂及缺氧复氧处理方法均诱导原代皮质神经元TLR3、TLR3mRNA表达增强(P<0.05);激动剂预处理后,与OGD组相比,激动剂+OGD组神经元细胞状态较好,数目较多(P<0.05)。结论 TLR3参与缺糖缺氧诱导的原代皮质神经元的损伤过程,激动剂可减轻神经元缺糖缺氧后损伤。

关键词： Toll样受体3(TRL3) poly(I:C)-LMW 激动剂原代皮质神经元缺糖缺氧

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