检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：金琳琳山东省医学科学院

学位级别：硕士

本实验室发现一株真菌菌丝的代谢产物具有抗病毒活性，用硅胶柱层析和制备型高效液相色谱得到了具有抗病毒活性的纯品，命名为JN219。JN219极性较强，在220nm有最大的紫外吸收峰，质谱(ESI)测得该化合物分子量为519道尔顿。体外抗病毒... 详细信息

本实验室发现一株真菌菌丝的代谢产物具有抗病毒活性，用硅胶柱层析和制备型高效液相色谱得到了具有抗病毒活性的纯品，命名为JN219。JN219极性较强，在220nm有最大的紫外吸收峰，质谱(ESI)测得该化合物分子量为519道尔顿。体外抗病毒活性跟踪发现JN219具有抗轮状病毒(RV)活性，在μg-ng/ml水平可使1000个TCID50/ml的HCMV、VSV、RV完全丧失感染活力；体内疗效模型研究发现，JN219可以缓解RV(SA11株)感染引起的乳鼠腹泻。初步表明JN219不仅仅在体外有显著抑毒效果，而且体内效果显著。明确抗病毒机制是药物应用临床的先决条件之一。为研究JN219的抗RV机制，本研究小组进行了初步的探索，发现JN219可能是作用于病毒复制周期最初黏附.融合.穿入阶段，通过阻止病毒进入宿主细胞实现抗病毒作用，那么JN219在RV穿入细胞过程中，如何阻断病毒穿入发挥抗病毒效果的?本研究采用原核载体克隆表达轮状病毒外壳蛋白VP4及其亚单位VP5*、VP8*，用体外细胞培养病毒感染模型竞争抑制试验建立抗RV机理研究模型，为探讨JN219抑制RV穿入宿主细胞的分子靶位、明确JN219抑制病毒穿入宿主细胞机理奠定基础。目的：建立研究JN219阻止RV穿入细胞的研究模型，为探讨JN219抑制RV穿入机理奠定基础。方法： ***膜蛋白VP4、VP5*、VP8*的克隆表达和纯化 (1)构建pET30a(+)VP4、pET30a(+)VP5*、pET30a(+)VP8*表达载体在GeneBank查得RVVP4全基因序列，以RV之细胞培养物作为模板用RT-PCR方法扩增目的基因，与pET30a载体连接后转化BL21(plysS)，用PCR、酶切方法鉴定后挑选阳性菌落委托测序。 (2)诱导表达、纯化目的蛋白将阳性菌落扩增、提取质粒转化BL21(plysS)菌株，用IPTG诱导、SDS-PAGE方法检追踪研究表达条件、用镍柱层析纯化目的蛋白(6×his标签)。用标签抗体-Westernblot方法进行鉴定。 ***219抑制RV穿入过程研究模型的建立 (1)纯化蛋白毒性研究将VP4、VP5*、VP8*梯度稀释后接种MA104细胞，与细胞对照比较，通过细胞病变观察重组蛋白的细胞毒性。 (2)JN219抑制RV细胞穿入现象的确定 a)病毒接种细胞1h，病毒完成穿入过程后接种JN219到多孔板细胞上，根据细胞病变判断JN219作用效果。若不出现病毒病变，可表明JN219具有抑制病毒基因转录复制的作用。 b)将JN219与病毒作用1h后接种于细胞，根据细胞病变判断JN219抗病毒活性；若不出现病毒病变，说明JN219在病毒穿入细胞前发挥抗病毒作用，抑制了病毒的穿入过程。 c)将紫外线灭活的病毒与JN219作用后，将混合液与病毒作用1h接种细胞，观察灭活的病毒是否竞争了JN219的抗病毒穿入位点，来探讨JN219是否通过作用于病毒外壳融合蛋白而实现抑制病毒的机制。 (3)JN219阻止RV穿入过程分子机制研究模型的建立(竞争结合试验) 上述试验发现，JN219作用于病毒复制周期最初黏附-融合-穿入阶段，通过阻止病毒进入宿主细胞实现抗病毒作用。如果将JN219与VP4、VP5*、VP8*作用(与JN219的抗病毒穿入位点结合)，则JN219在后续的抗病毒试验过程中可能丧失抗病毒活性，通过该模型，可明确JN219抑制RV穿入过程的分子靶位。结果： ***膜蛋白VP4、VP5*、VP8*的克隆表达和纯化 (1)构建pET30a(+)VP4、pET30a(+)VP5*、pET30a(+)VP8*表达载体经PCR和酶切鉴定证实构建的pET30a(+)VP4、pET30a(+)VP5*、pET30a(+)VP8*质粒目的基因分子量与预测分子量均一致，通过GeneBank序列比对，pET30a(+)VP4质粒前780bp处有5个碱基发生突变，后870bp处有2个碱基发生突变，经蛋白分析软件分析认为不影响其功能。 (2)诱导表达、纯化目的蛋白 pET30a(+)VP4、pET30a(+)VP5*、pET30a(+)VP8*的BL21(plysS)菌株用IPTG诱导、经His-镍柱层析纯化了目的蛋白，VP4、VP5*、VP8*三个蛋白的纯度均达到90％，VP4为0.24μg/ml、VP5*为0.8μg/ml、VP8*为0.5μg/ml。它们均与标签抗体发生反应(Westernblot)。 ***219抑制RV穿入过程研究模型的建立 (1)纯化蛋

关键词： JN219抗轮状病毒 RV细胞原核细胞表达系统病毒感染模型

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人乳头瘤病毒（HPV）18型主要结构基因L1的表达与DNA疫苗的初步研究

人乳头瘤病毒（HPV）18型主要结构基因L1的表达与DNA疫苗的初步研...

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作者：李娟中国药品生物制品检定所

学位级别：硕士

宫颈癌是引起世界范围内妇女死亡的第二大原因.大量的分子流行病学证据表明,人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)与人类多种癌症,特别是与宫颈癌有着密切的关系.高危型HPV(HPV16,18,31,45等)与宫颈上皮内瘤的发生和恶变以及其他上... 详细信息

宫颈癌是引起世界范围内妇女死亡的第二大原因.大量的分子流行病学证据表明,人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)与人类多种癌症,特别是与宫颈癌有着密切的关系.高危型HPV(HPV16,18,31,45等)与宫颈上皮内瘤的发生和恶变以及其他上皮性肿瘤的发生相关,在98﹪的宫颈癌中可检测出HPV基因,其中HPV16、HPV18型与宫颈癌的发生发展密切相关.HPV18在腺癌中占主要比例,而腺癌的检出率远远低于鳞癌(主要由HPV16引起)的检出率,且病程发展快,预后差,因此研制开发HPV 18型疫苗成为控制腺癌的重要策略.该研究成功构建了HPV18 L1的原核表达载体和DNA疫苗,对原核表达蛋白和DNA疫苗的免疫原性进行的初步研究,并对DNA疫苗的安全性问题进行了评价,为进一步研制开发HPV疫苗和DNA疫苗的应用打下了基础.

关键词：人乳头瘤病毒18型宫颈癌原核细胞表达系统 DNA疫苗

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一种融合蛋白、融合蛋白疫苗及其制备方法、应用

一种融合蛋白、融合蛋白疫苗及其制备方法、应用

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作者：董彦鹏李玉峰张健淞肖澄周琳车巧林胡静雅 214400 江苏省无锡市江阴市南闸镇锡澄路890号

本发明公开了一种融合蛋白、融合蛋白疫苗及其制备方法、应用，将TbpB蛋白的氨基酸残基序列中的至少一部分抗原表位区序列替换为TbpA蛋白的氨基酸残基序列的至少一部分抗原表位区序列，所得的序列为所述融合蛋白的氨基酸残基序列。本发... 详细信息

标准号: CN113896799B

本发明公开了一种融合蛋白、融合蛋白疫苗及其制备方法、应用，将TbpB蛋白的氨基酸残基序列中的至少一部分抗原表位区序列替换为TbpA蛋白的氨基酸残基序列的至少一部分抗原表位区序列，所得的序列为所述融合蛋白的氨基酸残基序列。本发明为了使TbpA的抗原性得到稳定形式的表达，利用TbpA和TbpB所共有的β‑桶结构特征，设计了以TbpB为支架，将TbpA的若干个表面区域的抗原决定簇替换TbpB的若干个较大的可变环区抗原决定簇，得到了TbpA+B融合蛋白，这种融合蛋白同时具有两种蛋白的抗原性，并且可以通过原核细胞表达系统得到大量的可溶形式的表达，适合于疫苗的商业化生产。

关键词：融合蛋白氨基酸残基序列抗原表位区抗原决定簇蛋白抗原性原核细胞表达系统融合蛋白疫苗商业化生产可溶形式稳定形式序列替换可变环桶结构支架制备替换疫苗应用

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抗EPHA2单链抗体、抗CD3E单链抗体及融合蛋白及其应用

抗EPHA2单链抗体、抗CD3E单链抗体及融合蛋白及其应用

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作者：李峥郝中禾 101111 北京市大兴区北京经济技术开发区经海六路3号院1号楼B座1层107室

抗EPHA2单链抗体、抗CD3E单链抗体及融合蛋白及其应用。本发明公开了一种抗跨膜酪氨酸激酶受体的单链抗体、一种抗CD3E的单链抗体及其融合蛋白及其应用，所述融合蛋白具有高度特异性的抗原识别能力，既具有抗体的特异性识别作用，同时... 详细信息

标准号: CN109879965B

抗EPHA2单链抗体、抗CD3E单链抗体及融合蛋白及其应用。本发明公开了一种抗跨膜酪氨酸激酶受体的单链抗体、一种抗CD3E的单链抗体及其融合蛋白及其应用，所述融合蛋白具有高度特异性的抗原识别能力，既具有抗体的特异性识别作用，同时又具有优异的抗肿瘤效果，其对三种不同类型的肿瘤细胞系，均有明显的生长抑制作用，而且该抗体融合蛋白的分子量小，可以在原核细胞表达系统中表达，大大降低了抗体药物的生产成本，具有良好的临床应用前景。

关键词：单链抗体融合蛋白原核细胞表达系统酪氨酸激酶受体抗体融合蛋白生长抑制作用抗肿瘤效果特异性识别肿瘤细胞系抗体药物抗原识别临床应用抗体生产成本应用

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防治猪鼻霉浆菌感染的组合物及生产该组合物的方法

防治猪鼻霉浆菌感染的组合物及生产该组合物的方法

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作者：林俊宏陈正文王志鹏许琼文黄文正谢明伟彭子庭宣诗玲中国台湾新竹市

公开了一种防治猪霉浆菌感染的组合物，其以XylF、DnaK、P72、或其组合作为活性成分。并公开了以原核细胞表达系统生产前述组合物的活性成分的表达载体及方法。

标准号: CN109476711B

关键词：原核细胞表达系统表达载体前述组合霉浆菌感染防治生产

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基因重组表达戊型肝炎病毒的研究进展

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肝脏 2001年第2期6卷 132-133页

作者：王淑颖阮冰杭州浙江大学医学院附属第一医院 310003

戊型肝炎是一种经粪-口途径传播的急性传染病,主要流行于亚洲、非洲和拉丁美洲等发展中国家和地区.其病毒成球形,直径27～34nm,基因组是单股正链RNA,长约7.5kb,由5'非编码区、编码区和3'非编码区组成,编码区包括3个开放读码框架... 详细信息

戊型肝炎是一种经粪-口途径传播的急性传染病,主要流行于亚洲、非洲和拉丁美洲等发展中国家和地区.其病毒成球形,直径27～34nm,基因组是单股正链RNA,长约7.5kb,由5'非编码区、编码区和3'非编码区组成,编码区包括3个开放读码框架(ORF).ORF1位于基因组的5'端,长 5 079bp,为非结构区基因,编码病毒复制所需要的RNA聚合酶、蛋白酶和解旋酶等;ORF2及ORF3位于基因组的3'端,ORF2长1 980bp,编码病毒的结构蛋白;ORF3长369bp,含有可被中和抗体所识别的抗原表位[1].随着戊型肝炎病毒(HEV)分子克隆技术的成功建立,以重组蛋白作为抗原来检测HEV抗体的技术正在逐步完善,同时HEV的生物学性状也在进一步了解中.本文就原核细胞、昆虫杆状病毒和哺乳动物等表达系统应用于HEV结构蛋白表达的研究情况作一综述.

关键词：戊型肝炎病毒基因重组表达昆虫肝状病毒表达系统原核细胞表达系统哺乳动物表达系统

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一种抗VEGF及EGFR的双特异抗体融合蛋白及其应用

一种抗VEGF及EGFR的双特异抗体融合蛋白及其应用

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作者：谢珞琨满来李峥许春萍 100176 北京市大兴区北京经济技术开发区科创六街88号院2号楼2层2217室

本发明公开了一种抗VEGF及EGFR的双特异抗体融合蛋白，所述融合蛋白由抗VEGF单链抗体和抗EGFR单链抗体组成，其具有能够分别识别VEGF和EGFR的两组独特的CDR区序列，对VEGF和EGFR具有高度特异的的识别能力，且具有优异的肿瘤结合效果和... 详细信息

标准号: CN108059681B

本发明公开了一种抗VEGF及EGFR的双特异抗体融合蛋白，所述融合蛋白由抗VEGF单链抗体和抗EGFR单链抗体组成，其具有能够分别识别VEGF和EGFR的两组独特的CDR区序列，对VEGF和EGFR具有高度特异的的识别能力，且具有优异的肿瘤结合效果和肿瘤定位效应。本发明还公开了偶联了指示剂的所述双特异抗体融合蛋白在制备体外肿瘤诊断试剂和体内生物成像剂中的应用。偶联上核磁和荧光显像剂的双特异抗体融合蛋白，可以在体内进行肿瘤成像。而且该抗体融合蛋白的分子量小，可以在原核细胞表达系统中表达，大大降低了抗体药物的生产成本。

关键词：融合蛋白特异抗体单链抗体偶联原核细胞表达系统抗体融合蛋白肿瘤诊断试剂抗体药物体内生物肿瘤成像肿瘤定位成像剂显像剂指示剂荧光核磁两组体外制备生产成本肿瘤体内应用

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抗EGFR单链抗体、抗PD1单链抗体及融合蛋白

抗EGFR单链抗体、抗PD1单链抗体及融合蛋白

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作者：李峥郝中禾 101111 北京市大兴区北京经济技术开发区经海六路3号院1号楼B座1层107室

本发明公开了一种抗表皮生长因子受体单链抗体、抗PD1单链抗体及融合蛋白及其应用，所述双特异单链抗体具有高度特异性的抗原识别能力，既具有抗体的特异性识别作用，同时又具有优异的抗肿瘤效果，而且该抗体融合蛋白的分子量小，可以... 详细信息

标准号: CN109879964B

本发明公开了一种抗表皮生长因子受体单链抗体、抗PD1单链抗体及融合蛋白及其应用，所述双特异单链抗体具有高度特异性的抗原识别能力，既具有抗体的特异性识别作用，同时又具有优异的抗肿瘤效果，而且该抗体融合蛋白的分子量小，可以在原核细胞表达系统中表达，大大降低了抗体药物的生产成本，具有良好的临床应用前景。

关键词：单链抗体抗体抗表皮生长因子受体原核细胞表达系统抗体融合蛋白抗肿瘤效果特异性识别抗体药物抗原识别临床应用融合蛋白特异单链生产成本应用

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一种抗血管内皮生长因子抗体及与铁调素的融合蛋白

一种抗血管内皮生长因子抗体及与铁调素的融合蛋白

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作者：满来谢珞琨李峥 100176 北京市大兴区北京经济技术开发区科创六街88号院2号楼2层2217室

本发明公开了一种抗血管内皮生长因子的单链抗体及其与铁调素蛋白相融合的蛋白质，所述单链抗体具有高度特异性的抗原识别能力，所述融合蛋白既具有抗体的特异性识别作用，同时又具有优异的抗肿瘤效果，其对三种不同类型的肺癌细胞系均... 详细信息

标准号: CN107540746B

本发明公开了一种抗血管内皮生长因子的单链抗体及其与铁调素蛋白相融合的蛋白质，所述单链抗体具有高度特异性的抗原识别能力，所述融合蛋白既具有抗体的特异性识别作用，同时又具有优异的抗肿瘤效果，其对三种不同类型的肺癌细胞系均有明显的生长抑制作用，在动物实验中均可以使小鼠肺肿瘤组织较对照组有明显减小，而且该抗体融合蛋白的分子量小，可以在原核细胞表达系统中表达，大大降低了抗体药物的生产成本。

关键词：单链抗体抗血管内皮生长因子原核细胞表达系统抗体融合蛋白生长抑制作用肺癌细胞系抗肿瘤效果特异性识别动物实验抗体药物抗原识别融合蛋白肺肿瘤素蛋白减小抗体小鼠生产成本蛋白质融合

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一种抗白介素6的人ScFv单链抗体

一种抗白介素6的人ScFv单链抗体

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作者：吕新军 225312 江苏省泰州市中国医药城口泰路西侧、陆家路东侧G52幢58号3层东侧

本发明公开了一种抗白介素6的单链抗体的蛋白质，所述单链抗体具有高度特异性的抗原识别能力，所述单链抗体蛋白既具有抗体的特异性识别作用，同时这种识别性又可以被特异性受体阻断，而且该抗体融合蛋白的分子量小，可以在原核细胞表... 详细信息

标准号: CN110283249A

本发明公开了一种抗白介素6的单链抗体的蛋白质，所述单链抗体具有高度特异性的抗原识别能力，所述单链抗体蛋白既具有抗体的特异性识别作用，同时这种识别性又可以被特异性受体阻断，而且该抗体融合蛋白的分子量小，可以在原核细胞表达系统中表达，大大降低了抗体药物的生产成本。

关键词：单链抗体原核细胞表达系统抗体融合蛋白特异性识别特异性受体抗体药物抗原识别白介素抗体生产成本蛋白质蛋白

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