检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理进展 2002年第4期29卷 631-634页

作者：聂新民张必成向娟娟朱诗国周鸣董利余鹰李小玲李桂源中南大学湘雅医学院肿瘤研究所长沙410078

BRD7基因是一个鼻咽癌侯选抑瘤基因 ,为了构建BRD7基因的原核表达载体并使其在大肠杆菌得到表达 ,设计了带有SalⅠ ,NotⅠ酶切位点的引物 ,以已构建好的质粒 pGEM TEasy/BRD7为模板 ,用PCR扩增出BRD7基因的完整阅读框架 ,并用SalⅠ ,No... 详细信息

BRD7基因是一个鼻咽癌侯选抑瘤基因 ,为了构建BRD7基因的原核表达载体并使其在大肠杆菌得到表达 ,设计了带有SalⅠ ,NotⅠ酶切位点的引物 ,以已构建好的质粒 pGEM TEasy/BRD7为模板 ,用PCR扩增出BRD7基因的完整阅读框架 ,并用SalⅠ ,NotⅠ酶切PCR产物和原核表达载体PGEX 4T 2 ,然后用T4DNA连接酶将其连接 ,得到重组表达质粒PGEX 4T 2 /BRD7,经双酶切鉴定和测序验证 ,表达载体构建正确 .重组表达质粒转化感受态大肠杆菌Jm10 5后用IPTG诱导 ,成功表达了一分子质量约为 90ku的融合蛋白 ;37℃诱导 4h后 ,SDS 聚丙烯酰胺凝胶 (PAGE)电泳后 ,经扫描分析该融合蛋白产量占菌体蛋白总量 2 8 4 8% ,蛋白质印迹 (Western blot)证实了该融合蛋白的表达获得成功 .这为BRD7基因的蛋白纯化及抗体制备 ,进一步开展其功能研究奠定了基础 .

关键词：鼻咽癌侯选抑瘤基因 BRD7 构建表达原核表达载体

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北柴胡糖基转移酶基因BcUGT8的克隆、序列分析及其原核表达载体构建

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中草药 2013年第17期44卷 2453-2459页

作者：徐洁森魏建和陶韵文孙晶隋春中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所北京100193 中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室北京100193 佳木斯大学药学院黑龙江佳木斯154007 东北林业大学生命科学院黑龙江哈尔滨150040

目的克隆北柴胡Bupleurum chinense中可能参与柴胡皂苷生物合成的糖基转移酶基因BcUGT8,构建其原核表达载体,为通过体外表达和纯化蛋白的催化活性,分析验证其功能奠定基础。方法在Roche(454)GS FLX系统高通量测序已获得部分cDNA序列基础... 详细信息

目的克隆北柴胡Bupleurum chinense中可能参与柴胡皂苷生物合成的糖基转移酶基因BcUGT8,构建其原核表达载体,为通过体外表达和纯化蛋白的催化活性,分析验证其功能奠定基础。方法在Roche(454)GS FLX系统高通量测序已获得部分cDNA序列基础上,通过cDNA末端快速扩增技术(RACE)和长距离PCR扩增方法(LD-PCR)克隆全长cDNA。设计含有酶切位点的PCR引物,PCR扩增其开放阅读框(ORF),酶切后,插入到pET-28a(+)载体中,构建出原核表达载体。结果扩增到北柴胡1个糖基转移酶(UGT)基因全长cDNA,构建了这一基因的原核表达载体。结论通过BcUGT8基因的全长cDNA克隆、序列分析和原核表达载体的构建,为后续开展体外酶蛋白表达、纯化和催化活性分析实验,验证其生物功能奠定了基础。

关键词：北柴胡糖基转移酶基因序列分析原核表达载体 PCR

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串联亲和纯化原核表达载体的构建

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微生物学报 2012年第3期52卷 374-380页

作者：魏波廖翔周围高原王羽冉金宝梁龙岳俊杰呼和巴特尔内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 军事医学科学院生物工程研究所北京100071

【目的】构建串联亲和纯化原核表达载体,用于研究细菌中(生理状态或接近生理条件下的)蛋白-蛋白相互作用。【方法】设计并合成两条串联亲和标签序列,分别可以在靶蛋白N端和C端融合Protein G和链亲和素结合肽(Streptavidin binding pepti... 详细信息

【目的】构建串联亲和纯化原核表达载体,用于研究细菌中(生理状态或接近生理条件下的)蛋白-蛋白相互作用。【方法】设计并合成两条串联亲和标签序列,分别可以在靶蛋白N端和C端融合Protein G和链亲和素结合肽(Streptavidin binding peptide,SBP)标签;以pUC18载体为骨架,去除原有的阻遏蛋白基因,构建组成型表达载体pNTAP和pCTAP。【结果】成功构建N端和C端标签表达载体pNTAP和pCTAP,它们在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)、肠出血性大肠杆菌O157:H7和痢疾杆菌福氏5型M90T菌株中都可以实现表达。【结论】本实验构建的两个串联亲和纯化表达载体可以在部分革兰氏阴性细菌中表达,为研究细菌内蛋白-蛋白相互作用及致病菌毒力蛋白的作用机制奠定了基础。

关键词：原核表达载体串联亲和纯化蛋白相互作用

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融合基因IFN-α1b/CSPⅡ原核表达载体的构建及在大肠埃希菌中的表达

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2005年第1期23卷 43-47页

作者：陈慧红余新炳高兴政北京大学医学部寄生虫学教研室北京100083 中山大学中山医学院寄生虫学教研室广州510089

目的　构建融合基因IFN α1b/CSPⅡ的原核表达载体并予以表达。　方法　采用聚合酶链反应 (PCR)从人基因组DNA中扩增出IFN α1b基因 ,克隆入原核表达载体 pGEX 4T 1,构建原核表达载体 pGEX 4T 1/IFN α1b。利用PCR法从恶性疟原虫基因组... 详细信息

目的　构建融合基因IFN α1b/CSPⅡ的原核表达载体并予以表达。　方法　采用聚合酶链反应 (PCR)从人基因组DNA中扩增出IFN α1b基因 ,克隆入原核表达载体 pGEX 4T 1,构建原核表达载体 pGEX 4T 1/IFN α1b。利用PCR法从恶性疟原虫基因组DNA中扩增出环子孢子蛋白Ⅱ区 (CSPⅡ )基因 ,克隆入原核表达载体 pGEX 4T 1,构建原核表达载体pGEX 4T 1/CSPⅡ 。用限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ将IFN α1b从原核重组质粒 pGEX 4T 1/IFN α1b中切下 ,克隆入经相同酶切的原核重组质粒pGEX 4T 1/CSPⅡ 中 ,构建融合基因的原核表达载体 pGEX 4T 1/IFN α1b/CSPⅡ。融合基因IFN α1b/CSPⅡ经异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG )诱导 ,在大肠埃希菌中进行初步表达。　结果　构建的原核表达载体 pGEX 4T 1/IFN α1b、pGEX 4T 1/CSPⅡ和 pGEX 4T 1/IFN α1b/CSPⅡ经PCR和酶切鉴定与预期结果一致。证实融合基因IFN α1b/CSPⅡ拼接成功并正确地克隆入原核表达载体。在大肠埃希菌中表达出融合蛋白IFN α1b/CSPⅡ ,该融合蛋白经十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)分析与理论预测值相符。经蛋白质印迹法 (Westernblotting)鉴定具有免疫原性。　结论　构建了融合基因IFN α1b/CSPⅡ的原核表达载体。

关键词： IFN-α 原核表达载体融合基因大肠埃希菌 b/C 融合蛋白重组质粒克隆酶切 IPTG

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半定量RT-PCR检测肺癌组织S100C的表达及其原核表达载体的构建和鉴定

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卫生研究 2008年第2期37卷 79-81页

作者：赵向锋张慧珍金蕾杨继要刘桂芝陈景涛吴逸明郑州大学公共卫生学院职业卫生与职业医学教研室郑州450001

目的分析S100C基因在肺癌组织中的表达情况,并构建S100C蛋白的原核表达载体。方法以β-actin为内参,运用半定量RT-PCR技术检测26例肺癌组织和配对癌旁组织S100C基因mRNA的表达水平;运用RT-PCR技术克隆S100C基因的cDNA全长片段,与PET30a... 详细信息

目的分析S100C基因在肺癌组织中的表达情况,并构建S100C蛋白的原核表达载体。方法以β-actin为内参,运用半定量RT-PCR技术检测26例肺癌组织和配对癌旁组织S100C基因mRNA的表达水平;运用RT-PCR技术克隆S100C基因的cDNA全长片段,与PET30a连接构建原核表达载体,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,进行阳性克隆筛选鉴定。结果肺癌组织中S100C mRNA表达水平低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。成功构建了S100C原核表达载体,序列同源性达100%。结论S100C基因表达下调在肺癌的发生中可能起重要作用;成功构建了S100C原核表达载体。

关键词： S100C 肺癌 RT-PCR 原核表达载体融合抗体

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原核表达载体pET30a／ATRX-C2193-2492的构建与诱导表达

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生物技术 2016年第6期26卷 516-520页

作者：唐双阳刘志敏李冉辉申海艳赵兰华蔡恒玲万艳平南华大学病原生物学研究所特殊病原体防控湖南省重点实验室湖南衡阳421001

[目的]构建大鼠ATRX抗原端氨基酸序列的原核表达载体,为进一步制备ATRX多克隆抗体以及探讨ATRX蛋白在HPV16致宫颈癌中的作用奠定基础。[方法]以IF-GFP-ATRX质粒为模板,PCR扩增获得ATRX-C_(2193-2492)基因片段,并克隆至p ET30a(+)空载体... 详细信息

[目的]构建大鼠ATRX抗原端氨基酸序列的原核表达载体,为进一步制备ATRX多克隆抗体以及探讨ATRX蛋白在HPV16致宫颈癌中的作用奠定基础。[方法]以IF-GFP-ATRX质粒为模板,PCR扩增获得ATRX-C_(2193-2492)基因片段,并克隆至p ET30a(+)空载体上,转化*** BL21感受态细胞,构建原核表达载体p ET30a/ATRX-C_(2193-2492),经PCR、双酶切以及测序鉴定。将构建好的质粒p ET30a/ATRX-C_(2193-2492)转化,经IPTG诱导表达,利用镍离子亲和层析法纯化6His-ATRX-C_(2193-2492)蛋白。[结果]成功获得900 bp的ATRX-C_(2193-2492)基因片段并构建了原核表达载体p ET30a/ATRX-C_(2193-2492),且该载体能在***中诱导表达分子量约34 k Da蛋白产物。[结论]原核表达载体p ET30a/ATRX-C_(2193-2492)能成功诱导表达分子量约34 k Da的ATRX-C_(2193-2492)蛋白,该蛋白纯化产物能为后续ATRX多克隆抗体的制备提供实验基础。

关键词： ATRX 原核表达载体诱导表达蛋白

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人乳头瘤病毒16型E7基因原核表达载体的构建及表达

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吉林大学学报（医学版） 2011年第4期37卷 661-664页

作者：徐丽娟温剑平史红艳孙延波吉林大学白求恩医学院病原生物学系吉林长春130021 吉林大学白求恩医学院分子生物学系吉林长春130021

目的:构建人乳头瘤病毒16型(HPV-16)E7基因原核表达载体,观察目的基因的蛋白表达。方法:人工合成HPV16E7基因核苷酸序列,利用特异性引物通过聚合酶链反应扩增HPV16E7基因,并克隆至pGEX-4T1原核表达载体,构建重组表达载体pGEX-4T1-HPV16... 详细信息

目的:构建人乳头瘤病毒16型(HPV-16)E7基因原核表达载体,观察目的基因的蛋白表达。方法:人工合成HPV16E7基因核苷酸序列,利用特异性引物通过聚合酶链反应扩增HPV16E7基因,并克隆至pGEX-4T1原核表达载体,构建重组表达载体pGEX-4T1-HPV16-E7。将其转化到工程菌Rosetta后,经IPTG诱导表达,进行E7-GST融合蛋白的SDS-PAGE分析和Ni 2+-NTA亲和层析纯化。结果:E7基因PCR扩增产物和重组表达质粒的双酶切产物经琼脂糖凝胶电泳,均可见300bp的目的基因条带。表达的重组蛋白经SDS-PAGE电泳和纯化后,在相对分子质量约36 000处有特异性表达带,与预期相符。结论:在原核系统中含E7基因的重组质粒可有效表达E7-GST融合蛋白。

关键词：人乳头瘤病毒16型聚合酶链式反应原核表达载体

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人血管生成素2原核表达载体的构建及鉴定

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中华实验外科杂志 2012年第6期29卷 1089-1091页

作者：张中林张吉发艾勇彪袁玉蜂何跃明刘志苏武汉大学中南医院普通外科 430071 上海市奉贤区中心医院普外科

目的构建人血管生成素2（Angiopoietin2）原核表达载体。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs），通过逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）扩增获取Angiopoietin2基因片段，然后将其克隆人pET32a质粒载体表达系统，实现Angiopoietin2在大... 详细信息

目的构建人血管生成素2（Angiopoietin2）原核表达载体。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs），通过逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）扩增获取Angiopoietin2基因片段，然后将其克隆人pET32a质粒载体表达系统，实现Angiopoietin2在大肠杆菌BL21中的稳定表达，并通过凝胶电泳、***及基因测序等对表达蛋白进行鉴定。结果从HUVEC中克隆出约1．5kb的Angiopoietin2基因，通过pET32a载体系统实现了Angiopoietin2蛋白的表达，SDS—PAGE、电泳及测序分析证实表达成功，融合蛋白相对分子质量为70×10^3。结论应用基因重组技术成功构建了人Angiopoietin2原核表达载体。

关键词：血管生成素原核表达载体

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小鼠分泌型内皮抑素原核表达载体pNZ44-ssEndostatin的构建及表达

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中国肿瘤临床 2008年第8期35卷 459-462页

作者：刘林林孙宝胜李艳博郭彩霞龚守良邵国光许传杰吉林大学第二医院放疗科长春市130021 吉林省肿瘤医院吉林大学公共卫生学院吉林大学第二医院胸外科

目的:构建带有小鼠分泌型内皮抑素(ssEndostatin)的原核表达载体pNZ44-ssEndostatin并在双歧杆菌中表达Endostatin蛋白。方法:利用引物设计软件oligo6.0设计引物,从pcDNA3.1-Egr1-ssEndostatin质粒上PCR扩增得到ssEndostatin基因。经测序证实获得的ssEndostatin基因序列正确后,进行粘端连接,将ssEndostatin基因链接到pNZ44原核表达载体上,构建成pNZ44-ssEndostatin重组载体,PCR、酶切鉴定正确后电转化到双歧杆菌中。然后利用ELISA法检测Endostatin表达。结果:测序结果证实ssEndostatin基因序列与Genebank中所公布的一致,说明ssEndostatin基因扩增正确。而且构建的质粒pNZ44-ssEndostatin的PCR、酶切鉴定结果与预测的一致,说明重组质粒pNZ44-ssEndostatin构建成功。转化后挑取阳性克隆进行菌落PCR证实重组质粒pNZ44-ssEndostatin已成功转入双歧杆菌中。ELISA法检测到转化有重组质粒pNZ44-ssEndostatin的双歧杆菌的菌体内有较高水平的Endostatin表达,且培养48h的表达量较20h的高,有氧条件下表达较缺氧条件下高,但上清中未检测到。结论:成功地构建了带有分泌信号的小鼠内皮抑素表达载体pNZ44-ssEndostatin,成功转入双歧杆菌中并在菌体中表达,为后续利用双歧杆菌作为工具进行Endostatin基因治疗奠定了实验基础。

关键词：内皮抑素原核表达载体分泌型双歧杆菌

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NT4-ADNF-9融合基因原核表达载体的构建

引用

西安交通大学学报（医学版） 2003年第5期24卷 427-430页

作者：郑国玺杨宇朱宏亮王全颖杨广笑西安交通大学第二医院耳鼻喉科陕西西安710004 吉林大学第一医院神经内科吉林长春130021 西安华广生物工程有限公司陕西西安710025

目的　构建神经营养素 (NT4 )与活性依赖性神经营养因子 9(ADNF 9)融合基因的原核表达载体pBV2 2 0 /NT4 ADNF 9,为进一步对神经系统退行性疾病基因治疗的研究奠定基础。方法　采用非对称互补引物 /模板法 ,制备两端含有酶切位点的ADN... 详细信息

目的　构建神经营养素 (NT4 )与活性依赖性神经营养因子 9(ADNF 9)融合基因的原核表达载体pBV2 2 0 /NT4 ADNF 9,为进一步对神经系统退行性疾病基因治疗的研究奠定基础。方法　采用非对称互补引物 /模板法 ,制备两端含有酶切位点的ADNF 9的cDNA ,将其连接到NT的信号肽和前导序列的 3′端 ,组成融合基因NT4 ADNF 9,再将该融合基因亚克隆于原核表达载体pBV2 2 0 ,构建为pBV2 2 0 /NT4 ADNF 9。结果　经DNA测序 ,限制性内切酶酶切等方法证实已成功地将ADNF 9重组到NT4信号肽和前导序列的 3′端 ,并将融合基因亚克隆于pBV2 2 0内。结论　成功构建了NT4与ADNF 9融合基因的原核表达载体pBV2 2 0 /NT4 ADNF 9。

关键词：神经退行性疾病基因治疗神经营养素活性依赖性神经营养因子-9 原核表达载体

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