检索结果-内蒙古大学图书馆

嗜铬颗粒蛋白B(Chromograin B,CgB)存在于内分泌细胞、神经内分泌细胞和某些神经原的分泌囊泡中,是主要的基质蛋白.对调节分泌途径中分泌囊泡的形成有极重要作用.CgB可转位进入细胞核,调节某些基因表达;CgB是生物活性肽的前体分子;新近发现嗜铬颗粒蛋白B基因多态性与躁狂型精神病的发生有着密切联系.为深入研究CgB分子结构与功能关系,本研究运用分子生物学方法克隆了小鼠肾上腺组织中嗜铬颗粒蛋白B mRNA,构建可以表达完整蛋白的原核表达载体,最终表达具有抗原性的重组小鼠嗜铬颗粒蛋白B,为进一步研究奠定了基础.结论:本研究通过应用RT-PCR方法克隆分离大片段CgB mRNA;并克隆了编码小鼠CgB氨基酸全序列cDNA.成功构建重组原核表达质粒pGEX/CgB,诱导表达融合蛋白GST-CgB,方法行之有效,可直接应用于嗜铬颗粒蛋白B抗原的纯化制备.为构建此基因的真核表达模型奠定了基础.

关键词：嗜铬颗粒蛋白 RT-PCR 原核表达载体诱导表达

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新疆地区流产奶牛新孢子虫病流行病学研究及NcSRS2基因原核表达载体的构建

新疆地区流产奶牛新孢子虫病流行病学研究及NcSRS2基因原核表达载...

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作者：王常汉新疆农业大学

学位级别：硕士

新孢子虫病(Neosporosis)是由犬新孢子虫(***)寄生在宿主体内引起多种家畜共患的原虫病,此病对牛的危害尤为严重,主要造成母牛流产、产死胎以及新生犊牛的运动神经系统疾病,给畜牧业造成了巨大的经济损失。迄今为止,还没有防治新孢子虫... 详细信息

新孢子虫病(Neosporosis)是由犬新孢子虫(***)寄生在宿主体内引起多种家畜共患的原虫病,此病对牛的危害尤为严重,主要造成母牛流产、产死胎以及新生犊牛的运动神经系统疾病,给畜牧业造成了巨大的经济损失。迄今为止,还没有防治新孢子虫病的疫苗和有效药物,对新孢子虫病的早期确诊是目前控制该病发生和蔓延的重要手段。我国对该领域的研究起步较晚,但近年来逐渐系统和深入。为更好地了解新疆地区流产奶牛新孢子虫病的感染情况,从奶牛主要产区选定15个地区共20个较大规模牛场采集了419头流产史奶牛的血清,应用VMRD公司生产的进口ELISA试剂盒对其进行了抗体检测,并用chahan B建立的rELISA方法进行了复检。ELISA试剂盒检测结果表明,在419份被检血清中有43份为阳性,新孢子虫阳性率为10.26%,各个地区的牛场阳性率在0-50%之间,不同地区流产奶牛新孢子虫病阳性率差异显著(P<0.05);各个年龄段流产奶牛阳性率差异不显著(P>0.05);不同胎次的流产奶牛阳性率差异显著(P<0.05)。rELISA方法检测结果表明,419份血清中有47份阳性,阳性率为11.22%,说明新疆地区存在新孢子虫的感染。根据GenBank上发表的新孢子虫NcSRS2基因序列,设计合成一对引物,以新孢子虫标准虫株为模板,PCR方法扩增NcSRS2基因,与pMD18-T Simple载体连接并转化到DH5α宿主菌中,提取质粒,酶切后并测序验证,获得阳性重组质粒pMD18-T-NcSRS2t。阳性质粒pMD18-T-NcSRS2t和表达载体pGEX-4T-3质粒,经EcoRⅠ酶切后分别回收,连接,转化到表达菌*** BL21,提取质粒,酶切后并测序验证,将构建的重组载体命名为pGEX-4T-NcSRS2t。阳性菌株在IPTG诱导下表达,经SDS-PAGE电泳分析表明,表达产物与预期大小相符,约60.2kDa,为建立新孢子虫病免疫学诊断方法及研制低成本、高特异性的新孢子虫病诊断试剂盒奠定基础。

关键词：流产奶牛新孢子虫病流行病学研究 NcSRS2基因原核表达载体

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牛INF-τ基因原核表达载体的构建及表达

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黑龙江畜牧兽医 2012年第12期 37-38页

作者：朱耀才刘宝山曲擘李红星牟敦歧徐凤兰王洪欣赵玉军沈阳农业大学畜牧兽医学院沈阳110866 沈阳市兽药饲料监察所沈阳110031 吉林市桦甸市畜牧业管理局吉林桦甸132400

干扰素-τ（INF-τ）最初被称为滋养层蛋白-1（TP-1），是反刍动物滋养层细胞分泌的一类低分子质量酸性蛋白质，分子质量一般为17-24ku。干扰素-τ具有I型干扰素的共同特性，即抗病毒、抗细胞增生、免疫调节等。但IFN—τ在生物学功能... 详细信息

干扰素-τ（INF-τ）最初被称为滋养层蛋白-1（TP-1），是反刍动物滋养层细胞分泌的一类低分子质量酸性蛋白质，分子质量一般为17-24ku。干扰素-τ具有I型干扰素的共同特性，即抗病毒、抗细胞增生、免疫调节等。但IFN—τ在生物学功能方面有其自身特点，它仅在胚胎滋养层细胞中表达，无需病毒诱导；

关键词：原核表达载体干扰素-τ 滋养层细胞基因分子质量生物学功能细胞分泌反刍动物

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猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因原核表达载体的构建及序列分析

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中国动物检疫 2008年第12期25卷 25-27,30页

作者：张永富马国文刘月焕刘永宏李明刚张秋雨刘锋内蒙古民族大学动物科技学院内蒙古通辽028000 北京市农林科学院畜牧兽医研究所北京100089 北京庄笛浩禾生物医学科技有限公司北京100043 内蒙古农业大学动物科学与医学学院呼和浩特010018

根据GenBank中美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因序列,设计合成一对引物,应用RT-PCR方法扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF7基因(N基因)。将所扩增片段克隆入原核表达载体pET-32a(+),pET-ORF7重组质粒转化DH5a宿主菌... 详细信息

根据GenBank中美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因序列,设计合成一对引物,应用RT-PCR方法扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF7基因(N基因)。将所扩增片段克隆入原核表达载体pET-32a(+),pET-ORF7重组质粒转化DH5a宿主菌后,经双酶切、PCR鉴定后挑选阳性克隆测序鉴定并对插入的ORF7基因序列进行分析。结果表明,ORF7基因的原核表达载体构建成功。ORF7基因序列与美洲型的ORF7基因核苷酸同源性为92.8%～99.7%,与LV株的相应基因核苷酸同源性为65.3%;推导的氨基酸与美洲型相应基因的同源性为92.0%～99.2%,与LV株的同源性为65.3%,系统进化树表明该PRRSV属于美洲型。本研究为N蛋白的进一步研究和制备诊断性抗原奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF7基N 原核表达载体

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水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E原核表达载体的表达及产物纯化

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临床皮肤科杂志 2005年第3期34卷 151-153页

作者：李福民冉玉平吴琦李明段德鉴赵秀红周光平四川大学华西医院皮肤科四川大学基础与法医学院感染免疫研究室四川成都610041

目的:构建水痘-带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白E(gE)原核表达系统的纯化方法,并鉴定目的蛋白。方法:将VZVgE基因片段克隆到原核表达载体pGEX-1λT,构建重组原核融合蛋白表达载体pGEX-VZVgE;用IPTG(异丙基-硫代-β-D-半乳糖苷)诱导融合蛋白在... 详细信息

目的:构建水痘-带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白E(gE)原核表达系统的纯化方法,并鉴定目的蛋白。方法:将VZVgE基因片段克隆到原核表达载体pGEX-1λT,构建重组原核融合蛋白表达载体pGEX-VZVgE;用IPTG(异丙基-硫代-β-D-半乳糖苷)诱导融合蛋白在大肠杆菌中表达;利用蛋白回收试剂盒对表达产物进行纯化。并用免疫印迹法检测纯化产物的抗原性。结果:经双酶切及测序鉴定所得到的重组质粒即为含有目的片段的重组载体pGEX-VZVgE;在IPTG诱导下pGEX-VZVgE表达分子质量为98ku的融合蛋白;纯化后的融合蛋白经凝血酶酶切后,得到分子质量约为72ku的VZVgE,并用免疫印迹证明其具有良好的抗原性。结论:构建的VZVgE重组原核表达载体能表达重组蛋白,并建立了一套纯化VZVgE的方法;从而为VZVgE的应用研究打下基础。

关键词：水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E 原核表达载体融合蛋白免疫印迹

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抗人膀胱癌单克隆抗体轻链可变区基因的克隆、序列分析及其原核表达载体的构建

抗人膀胱癌单克隆抗体轻链可变区基因的克隆、序列分析及其原核表...

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作者：张俊杰徐州医学院

学位级别：硕士

目的:克隆抗人膀胱癌单克隆抗体轻链可变区基因,并构建其原核表达载体.方法:用含有20﹪胎牛血清及双抗(青+链)的RPMI-1640培养基在37℃ 5﹪CO<,2>培养箱中培养能分泌抗人膀胱癌单克隆抗体的杂交瘤细胞BDI-1,在细胞生长至1... 详细信息

目的:克隆抗人膀胱癌单克隆抗体轻链可变区基因,并构建其原核表达载体.方法:用含有20﹪胎牛血清及双抗(青+链)的RPMI-1640培养基在37℃ 5﹪CO<,2>培养箱中培养能分泌抗人膀胱癌单克隆抗体的杂交瘤细胞BDI-1,在细胞生长至10<'6>/ml密度时进行1,000rpm离心5分钟,收集细胞.按照总RNA提取试剂盒说明从3×10<'7>杂交瘤细胞中提取总RNA,用总RNA作为摸板利用特异性引物通过RT-PCR扩增出V<,L>cDNA.上游引物为5'-GGCAAGCTTATGGAAATTGTTCTCACCCAG-3'(含HindⅢ),下游引物为5'-GGCCTCGAGTTATTTTAGTTCCAACTTTGT-3'(含Xho Ⅰ).RT-PCR循环按以下程序进行:45min,48℃,2min,94℃各一循环,1min,94℃,1min,63℃,1.5min,68℃共35次循环,7min,68℃延伸,反应体系共100μl.取7μ lRT-PCR产物在1﹪琼脂糖凝胶上电泳,借助紫外手提式分析仪通过溴乙锭观察.利用Direct Purification System kit(Promega)纯化并提取RT-PCR产物.用HindⅢ和Xho Ⅰ限制性内切酶双酶切纯化的RT-PCR产物并从琼脂糖凝胶上回收,同样用HindⅢH和Xho Ⅰ双酶切纯化的原核表达载体pET28a(+),在T4 DNA连接酶作用下室温连接48小时.连接产物通过CaCl<,2>转化法转入大肠杆菌BL21(DE3)中.转化后的大肠杆菌BL21(DE3)在37℃卡那霉素抗性的脂糖平板上生长,随机挑取3-4个细胞克隆.重组质粒通过HindⅢ和XhoⅠ双酶切鉴定,阳性克隆被基康公司测序,根据Kabat等发表的鼠单抗VL基因序列,辅以计算机对VL基因测序结果进行序列分析.结论:抗人膀胱癌单克隆抗体轻链可变区基因被成功克隆,并成功构建其原核表达载体,为构建抗人膀胱癌单链抗体、单域抗体,重组免疫毒素等的研究奠定了基础.

关键词：膀胱肿瘤癌基因抗体单克隆可变区原核表达载体

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玉米邻甲基转移酶基因的克隆、原核表达载体构建及其生物信息学分析

玉米邻甲基转移酶基因的克隆、原核表达载体构建及其生物信息学分...

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作者：艾哈迈德（Omer A.M. Ahmed）延边大学

学位级别：硕士

玉米的抗虫性与次生代谢物苯并噁嗪(benzoxazinoids)关系密切;玉米中存在的苯并噁嗪类化合物包括DIBOA、DIMBOA、HDMBOA、DIM2BOA和HMBOA等;其中,DIMBOA和HDMBOA因昆虫取食而转化为对昆虫有毒性的MBOA,相对而言HDMBOA转化为MBOA的速度比... 详细信息

玉米的抗虫性与次生代谢物苯并噁嗪(benzoxazinoids)关系密切;玉米中存在的苯并噁嗪类化合物包括DIBOA、DIMBOA、HDMBOA、DIM2BOA和HMBOA等;其中,DIMBOA和HDMBOA因昆虫取食而转化为对昆虫有毒性的MBOA,相对而言HDMBOA转化为MBOA的速度比DIMBOA更快。在玉米中,DIMBOA 和 HDMBOA 是以 DIMBOA-Glc 和 HDMBOA-Glc 形式存在,而HDMBOA-Glc是由DIMBOA-Glc在邻甲基转移酶的作用下合成而来。玉米中,邻甲基转移酶是由bx12(又名bx10c)基因编码;该基因的突变,导致DIMBOA-Glc无法转化为HDMBOA-Glc,最终造成不同玉米抗虫性的差异。然而,至今为止,关于bx12基因的表达与调控机理还不清楚。为深入研究bx12基因的表达与调控机理,本研究从中国玉米自交系ZaC546中克隆出了含有目的基因bx12的目标DNA片段Zm3325-ZaC546,并构建出该基因的原核表达载体pGEX4T1-Zm3325(bx12)。测序结果证明目标DNA片段正确插入到pGEX-4T-1中;Zm3325-ZaC546的5'-末端与载体中的GST标签基因的3'-末端连接正确,目的基因与载体中的GST标签基因构成一个完全能够连续阅读的GST-Zm3325(bx12)融合基因。本研究中,从ZaC546基因组中分离的目标DNA序列长度为1010bp,含有完整的开放阅读框(ORF)。与玉米基因组数据库上的参考序列GRMZM2G023325相比,目标DNA序列在其ORF的内部,从起始密码子的第1个碱基开始,下游第204个碱基位置上存在一个碱基突变,由G突变为A,遗传密码由AAG变为AAA,但氨基酸不变,都编码赖氨酸(Lysine,K)。虽然,目标DNA序列在其ORF的下游,第883个碱基G发生缺失,第905个碱基由T突变为C,但因这两个突变位于ORF的下游,并不影响目的基因的编码活性。目标DNA序列Zm3325-ZaC546与参考序列的一致性(Identity)为99.70%,阅读框序列的一致性为99.87%;而由目的基因编码的蛋白质氨基酸序列与参考序列的一致性为100%。生物信息学分析结果表明,本研究中克隆的基因所编码的邻甲基转移酶蛋白属于邻甲基转移酶基因超级家族2。该酶是一种多功能酶,它具有两个大的结构域,一个位于N-末端一侧,具有甲基转移酶二聚化功能;另一个位于C-末端一侧,具有甲基转移酶功能和邻甲基转移酶功能;该酶蛋白没有信号肽,这意味着该酶蛋白是在细胞质内合成后,并不涉及翻译后的转运,而是存在于细胞液中。

关键词：玉米抗虫性邻甲基转移酶基因原核表达载体生物信息分析

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重组人糖皮质激素受体原核表达载体的构建和表达

重组人糖皮质激素受体原核表达载体的构建和表达

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作者：王喜第二军医大学

学位级别：硕士

目的:构建hGRα重组原核表达质粒并进行诱导表达,为下一步研制hGRα ELISA检测试剂盒和进一步研究GR与中医学阴阳虚证的关系服务。方法:以含有hGRα cDNA的重组克隆质粒pRShGRα为模板,通过PCR扩增得到hGRα的两种基因片段,将这两... 详细信息

目的:构建hGRα重组原核表达质粒并进行诱导表达,为下一步研制hGRα ELISA检测试剂盒和进一步研究GR与中医学阴阳虚证的关系服务。方法:以含有hGRα cDNA的重组克隆质粒pRShGRα为模板,通过PCR扩增得到hGRα的两种基因片段,将这两种基因片段分别克隆到pGEM-T载体上,进而亚克隆到pGEX-4T-3表达载体上。将这两种重组表达质粒进行酶切、测序鉴定后,分别转化大肠杆菌DH5α和BL21(DE3),并在一定的条件下进行重组蛋白的诱导表达,诱导表达产物行SDS-PAGE和Western blotting分析。结果:酶切和测序结果证明hGRα的两种基因片段均成功地重组入pGEX-4T-3载体。诱导表达产物的SDS-PAGE和Western blotting分析均提示有hGRα目的蛋白特异表达。结论:本实验成功构建了hGRα的两种重组原核表达质粒,并成功诱导了它们的原核表达,为下一阶段的研究奠定了基础。

关键词：阴阳虚证糖皮质激素受体 DNA重组技术原核表达载体蛋白表达

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