检索结果-内蒙古大学图书馆

基因组学与应用生物学 2016年第2期35卷 259-264页

作者：王宁宁王会岩许会静张茹叶陈秋池李光宇吉林医药学院检验学院吉林132013

TAZ基因在心磷脂代谢异常导致线粒体功能障碍中起重要作用。本研究旨在构建人TAZ-5(h TAZ-5,Δ5)的基因工程菌,用乳糖诱导TAZ-5蛋白的表达,为后续h TAZ-5纯化、抗血清的制备及生理功能检测奠定基础。以h TAZ全长为材料,通过PCR方法扩增... 详细信息

TAZ基因在心磷脂代谢异常导致线粒体功能障碍中起重要作用。本研究旨在构建人TAZ-5(h TAZ-5,Δ5)的基因工程菌,用乳糖诱导TAZ-5蛋白的表达,为后续h TAZ-5纯化、抗血清的制备及生理功能检测奠定基础。以h TAZ全长为材料,通过PCR方法扩增人h TAZ-5基因,将其插入到原核表达载体p EASY中。经菌落PCR筛选阳性克隆,并通过DNA测序确定原核表达载体p EASY-TAZ-5构建成功。将p EASY-TAZ-5转入大肠杆菌(***)感受态细胞Transetta(DE3)中,用乳糖诱导蛋白表达,分别对诱导剂浓度、时间、时机及温度等条件进行优化,确定最优的乳糖诱导条件,并对表达产物进行可溶性分析。结果表明PCR扩增出约786 bp的目的产物,与预期的片段长度一致;h TAZ-5蛋白最优表达条件为终浓度2.0 g/L乳糖、A600=0.8、37℃下诱导4 h,可以达到良好的诱导效果;收集菌体中的上清和沉淀,进行可溶性分析,目的蛋白以包涵体的形式存在。Western Blot分析表明重组蛋白TAZ表达成功。成功构建p EASY-TAZ-5原核表达载体,乳糖可诱导h TAZ-5(Δ5)基因表达,且效果很好。

关键词： hTAZ-5 TAZ 原核表达载体重组蛋白表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

人白介素-38原核表达载体的构建及其蛋白表达、纯化

引用

生物技术 2016年第2期26卷 140-145页

作者：周密袁仙丽潘秀和李燕李明才宁波大学医学院免疫学研究室浙江宁波315211

$目的%构建人白介素(interleukin,IL)-38原核表达载体,原核表达IL-38重组蛋白、纯化及活性分析。[方法]PCR扩增IL-38成熟蛋白编码区,构建IL-38原核表达载体p ET-44-h IL-38,转化BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导,表达IL-38重组蛋白,并利用其C... 详细信息

$目的%构建人白介素(interleukin,IL)-38原核表达载体,原核表达IL-38重组蛋白、纯化及活性分析。[方法]PCR扩增IL-38成熟蛋白编码区,构建IL-38原核表达载体p ET-44-h IL-38,转化BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导,表达IL-38重组蛋白,并利用其C末端的组氨酸标签进行镍离子亲和层析纯化,将纯化的重组IL-38作用于脂多糖(LPS)诱导的THP-1细胞,研究纯化IL-38蛋白的生物学活性。[结果]构建的IL-38原核表达载体测序结果与Gen Bank中基因序列一致;IPTG诱导产生的IL-38蛋白主要以可溶性形式存在,纯化的目的蛋白经SDS-PAGE凝胶电泳分析和Western Blot鉴定发现,蛋白纯度可达98%,细胞实验证明纯化的目的蛋白具有较高的生物学活性。[结论]成功构建了IL-38的原核表达载体,制备了具有生物活性的IL-38重组蛋白。

关键词： IL-38 原核表达载体重组蛋白纯化

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

大约克猪SLA-1原核表达载体的构建及表达

引用

中国畜牧兽医 2016年第12期43卷 3121-3126页

作者：张秀娟杨杰孙永强高凤山大连大学生命科学与技术学院大连116622

为构建大约克猪 SLA-1胞外区的原核表达载体及表达目的蛋白,试验设计1对引物,经 PCR 扩增获得大约克猪 SLA-1胞外区基因（命名为 SLA-1-DYKe）,将此片段克隆至 pMD 19-T Simple Vector,转化大肠杆菌TOP10感受态细胞,经 Nde Ⅰ和 Xho Ⅰ... 详细信息

为构建大约克猪 SLA-1胞外区的原核表达载体及表达目的蛋白,试验设计1对引物,经 PCR 扩增获得大约克猪 SLA-1胞外区基因（命名为 SLA-1-DYKe）,将此片段克隆至 pMD 19-T Simple Vector,转化大肠杆菌TOP10感受态细胞,经 Nde Ⅰ和 Xho Ⅰ双酶切筛选阳性克隆菌并测序,将目的基因插入到原核表达载体 pET-28a （＋）中,转化至宿主菌 BL21（DE3）进行诱导表达,用 SDS-PAGE 检测目的蛋白的表达情况,大量诱导提取包涵体并检测。结果显示,PCR 成功扩增 SLA-1-DYKe 的胞外区,得到大小为837 bp 的目的基因,目的基因成功克隆至pMD 19-T Simple Vector,并获得序列正确的重组质粒。以得到的重组质粒成功构建了 SLA-1-DYKe/pET-28a （＋）表达载体,目的蛋白大小约为34 ku。本研究成功构建了大约克猪 SLA-1原核表达载体,获得了表达蛋白,为今后研究大约克猪 SLA-1的空间结构和基因功能奠定了基础。

关键词：大约克猪 SLA-1 基因原核表达载体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鹅细小病毒主要结构蛋白基因的扩增、克隆与原核表达载体的构建

引用

中国兽医学报 2000年第6期20卷 554-557页

作者：马君章金钢李雪梅向华马凤龙赵玉军殷震解放军军需大学动物科技系吉林长春130062 沈阳农业大学畜牧兽医学院辽宁沈阳110161

根据已发表的鹅细小病毒 ( GPV)核苷酸序列设计并合成了 1对引物 ,对 GPV主要结构蛋白 VP2和VP3基因进行扩增。所获得的 PCR产物与预期片段大小相符 ,约 1 .8kb。将该片段直接与真核表达 p CR3.1T载体连接 ,转化入感受态大肠杆菌 TOP1 ... 详细信息

根据已发表的鹅细小病毒 ( GPV)核苷酸序列设计并合成了 1对引物 ,对 GPV主要结构蛋白 VP2和VP3基因进行扩增。所获得的 PCR产物与预期片段大小相符 ,约 1 .8kb。将该片段直接与真核表达 p CR3.1T载体连接 ,转化入感受态大肠杆菌 TOP1 0 F′中增殖。在对所提质粒进行快速鉴定、PCR扩增以及 Bam H 酶切线性化初步鉴定的基础上 ,经限制性内切酶 Sca 和 Eco R 分别酶切进行正反向鉴定 ,获得了 3个正向插入的克隆 ( PVPA)和 2个反向插入的克隆 ( PVPB)。将正向插入的克隆 PVPA1与原核表达载体 p ET-2 8b( + )分别用 Bam H 和 Xho 双酶切后 ,回收目的片段进行定向连接 ,并转化入感受态大肠杆菌 DH5α中。对所获得的重组质粒分别经 Sca 、Eco R 、Bam H / Xho 酶切 ,证实含有目的基因 ,且基因插入方向正确 ,成功地构建了含有 GPV主要结构蛋白基因的原核表达载体。

关键词：鹅细小病毒结构蛋白基因原核表达载体扩增

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

一种新型原核表达载体的构建及应用

引用

华中科技大学学报（医学版） 2004年第5期33卷 522-525页

作者：姚海兰聂凯韩俊肖新莉陈岚王小凡周伟姜慧英蔡昌学董小平华中科技大学同济医学院基础医学院病原生物学系武汉430030 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京100052 西安交通大学医学院解剖学教研室西安710061 中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　利用基因重组技术构建一种新型原核表达载体 ,使之表达带有His和GST标签的融合蛋白。方法以质粒 pGEX为模板 ,将PCR扩增出的GST基因插入到载体 pQE 30中构建pQE 30 GST ,经IPTG诱导GST蛋白表达并用Westernblot鉴定。分别将huNSE1... 详细信息

目的　利用基因重组技术构建一种新型原核表达载体 ,使之表达带有His和GST标签的融合蛋白。方法以质粒 pGEX为模板 ,将PCR扩增出的GST基因插入到载体 pQE 30中构建pQE 30 GST ,经IPTG诱导GST蛋白表达并用Westernblot鉴定。分别将huNSE188 35 4、huPrP2 3 91和huDoppel2 4 15 2基因插入 pQE 30 GST ,转化 E coliM15并诱导表达融合蛋白。采用NiSepharose 4B和 (或 )GlutathioneSepharose 4B纯化融合蛋白 ,并用羟胺裂解。结果　重组表达载体 pQE 30 GST可有效地表达各种His GST融合蛋白 ,并可用两种方法纯化不同大小的融合蛋白 ;利用羟胺可将目的蛋白肽段与His GST蛋白有效裂解。结论　新型原核表达载体pQE 30 GST可进行多种蛋白质的表达 ,表达的蛋白质可经两种方法纯化以提高蛋白质的纯度 ,融合蛋白可经羟胺裂解获得目的蛋白质单体。

关键词： GST 融合蛋白原核表达载体基因插入纯化 NSE 蛋白表达 IPTG 诱导表达蛋白质

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

幽门螺杆菌vac A基因毒性相关片段原核表达载体的构建和表达

引用

细胞与分子免疫学杂志 2001年第3期17卷 237-240页

作者：江红阎小君韩锋产冯永强侯瑜苏成芝第四军医大学基因诊断技术研究所陕西西安710032

目的构建幽门螺杆菌(Hp)vacA基因片段原核表达载体并进行表达。方法采用PCR技术,扩增HpvacA基因的1个片段B,并克隆入pGEM-3Zf(-)质粒。测序正确后,再克隆入质粒pRSETA中,构建重组表达载体pRSE-TA-B。结果经过转化***21DE3(plysS)后,诱... 详细信息

目的构建幽门螺杆菌(Hp)vacA基因片段原核表达载体并进行表达。方法采用PCR技术,扩增HpvacA基因的1个片段B,并克隆入pGEM-3Zf(-)质粒。测序正确后,再克隆入质粒pRSETA中,构建重组表达载体pRSE-TA-B。结果经过转化***21DE3(plysS)后,诱导表达出相对分子质量(Mr)为33000的蛋白。SDS-PAGE分析显示,表达量占全菌总蛋白质的47.8%,上清中目的蛋白占全菌总蛋白的10.9%。ELISA和Westernblot分析表明,表达蛋白能与兔抗VacA多抗结合。结论成功地构建原核表达载体pRSETA-B,为进一步探讨该片段的生物学活性,以及临床上通过检测患者血清预测Hp的感染提供了实验依据。

关键词：幽门螺杆菌 vac A基因原核表达载体活性测定构建表达胃疾病

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

人髓样细胞触发受体-1原核表达载体的构建和表达及多克隆抗体的制备

引用

中华实验外科杂志 2011年第9期28卷 1438-1440页

作者：卢燕郑淑华刘伟李明意徐军发张良清广东医学院附属医院麻醉科湛江524001 广东医学院附属医院肝胆外科湛江524001 广东医学院临床免疫学教研室

目的构建人髓样细胞触发受体-1（TREM-1）原核表达载体使其表达并制备多克隆抗体。方法采用特异性引物扩增人TREM-1胞外段cDNA，经酶切、连接、构建到原核表达载体pET28a（＋），将构建的重组表达质粒转化入***121（DE3）菌株，采用IPT... 详细信息

目的构建人髓样细胞触发受体-1（TREM-1）原核表达载体使其表达并制备多克隆抗体。方法采用特异性引物扩增人TREM-1胞外段cDNA，经酶切、连接、构建到原核表达载体pET28a（＋），将构建的重组表达质粒转化入***121（DE3）菌株，采用IPTG诱导表达、***柱亲和层析纯化目的蛋白、SDS—PAGE分析蛋白纯度，将纯化的目的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体，并对其进行纯化及鉴定。结果序列测定证实构建的重组表达载体pET28a（＋）-TREM-1含有人TREM-1编码序列，其序列分析与Genbank中公布序列对比一致，质粒在***中诱导表达相对分子质量（Mr）为21．80kDa的目的蛋白，SDS—PAGE分析表明纯化后的目的蛋白达到电泳纯，双向琼脂扩散法检测抗体效价为1：16，ELISA法检测抗体效价为1：25600，Westernblot分析显示抗体能特异性结合人TREM一1重组蛋白。结论成功构建高表达重组人TREM-1蛋白的原核表达载体及制备高效价兔抗人TREM-1多克隆抗体。

关键词：人髓样细胞触发受体-1 原核表达载体脓毒症多克隆抗体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

关岭牛PPARγ基因原核表达载体的构建及生物信息学分析

引用

基因组学与应用生物学 2018年第5期37卷 1915-1919页

作者：吴国文陈伟张青青许厚强周迪赵焕平王圆圆高原山地动物遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室贵阳550025 贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵阳550025 贵州大学动物科学学院贵阳550025 贵州大学生命科学学院贵阳550025

本研究旨在通过克隆关岭牛PPARγ基因CDS区及构建p ET32a（＋）-PPARγ真核表达载体。本研究通过RT-PCR技术克隆关岭牛PPARγ基因的CDS区,采用DNAStar和Ex PASy等软件对该基因CDS区进行序列分析;利用双酶切的方法构建原核表达载体p ET32... 详细信息

本研究旨在通过克隆关岭牛PPARγ基因CDS区及构建p ET32a（＋）-PPARγ真核表达载体。本研究通过RT-PCR技术克隆关岭牛PPARγ基因的CDS区,采用DNAStar和Ex PASy等软件对该基因CDS区进行序列分析;利用双酶切的方法构建原核表达载体p ET32a（＋）-PPARγ,结果显示,关岭牛PPARγ基因的CDS区全长1 428 bp,编码475个氨基酸。本研究成功克隆了关岭牛PPARγ基因的CDS区,并构建了其原核表达载体p ET32a（＋）-PPARγ,为进一步研究PPARγ基因调控机制提供了理论基础。

关键词：关岭牛 PPARγ基因原核表达载体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

人可溶性TRAILcDNA的克隆及新型原核表达载体的构建

引用

第三军医大学学报 2002年第4期24卷 442-443页

作者：李蓉芬何凤田高会广陈姗江渝叶治家彭家和陈敏第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的　克隆人可溶性TRAIL (sTRAIL)cDNA并构建其原核表达载体 ,为制备新型抗癌分子创造条件。方法　提取HL 60细胞总RNA ,经RT PCR扩增编码人TRAIL 114～ 2 81氨基酸残基的cDNA序列 ,将其克隆至载体pUC19进行序列测定 ,然后构建于新型... 详细信息

目的　克隆人可溶性TRAIL (sTRAIL)cDNA并构建其原核表达载体 ,为制备新型抗癌分子创造条件。方法　提取HL 60细胞总RNA ,经RT PCR扩增编码人TRAIL 114～ 2 81氨基酸残基的cDNA序列 ,将其克隆至载体pUC19进行序列测定 ,然后构建于新型原核表达载体pQE 80L中。结果　RT PCR扩增得到了 5 0 4bp的DNA片段 ,序列分析表明与GeneBank中报道的编码人TRAIL 114～ 2 81氨基酸残基的cDNA序列完全一致。结论　sTRAILcDNA的克隆及其原核表达载体的构建 ,为进一步制备具有抗肿瘤活性的sTRAIL奠定了基础。

关键词： sTRAIL RT-PCR 克隆序列分析 cDNA 原核表达载体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

藏猪β-防御素2基因克隆及原核表达载体的构建

引用

江苏农业学报 2017年第4期33卷 848-853页

作者：谷笑笑王振华潘康成张立平周尧四川农业大学动物医学院动物微生态研究中心四川成都611130 成都农业科技职业学院四川成都611130 绵阳泰科生物技术有限公司四川绵阳621000

为了构建藏猪β-防御素2(pBD-2)成熟肽原核表达载体,从藏猪肝组织中提取总RNA,通过RT-PCR获取pBD-2目的基因,并与pMD19-T载体连接构建重组质粒,命名为pMD19T-pBD-2;以pMD19T-pBD-2质粒为模板,克隆pBD-2成熟肽c DNA序列并构建成熟肽p ET-... 详细信息

为了构建藏猪β-防御素2(pBD-2)成熟肽原核表达载体,从藏猪肝组织中提取总RNA,通过RT-PCR获取pBD-2目的基因,并与pMD19-T载体连接构建重组质粒,命名为pMD19T-pBD-2;以pMD19T-pBD-2质粒为模板,克隆pBD-2成熟肽c DNA序列并构建成熟肽p ET-32a-pBD-2表达质粒。结果显示,藏猪pBD-2基因全长为298bp,与野猪和家猪的pBD-2基因同源性分别达100.0%和98.9%;藏猪pBD-2基因具有1个完整的开放阅读框,编码69个氨基酸组成的多肽,包含21个氨基酸残基的信号肽、11个氨基酸残基的前导肽和37个氨基酸残基的成熟肽;编码的pBD-2成熟肽稳定性较好,分子量4 085.78,等电点8.89,具有6个半胱氨酸(Cys)残基,7个带正电荷和2个带负电荷的氨基酸残基,为亲脂性和亲水性多肽;从pMD19T-pBD-2质粒中亚克隆得到长度为114 bp藏猪pBD-2成熟肽c DNA序列,菌落PCR、酶切和测序鉴定证明成功构建了成熟肽pET-32a-pBD-2原核表达质粒。

关键词：藏猪 β-防御素2 克隆原核表达载体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：