检索结果-内蒙古大学图书馆

口腔医学研究 2018年第8期34卷 815-817页

作者：赵新元崔力南方医科大学口腔医院牙体牙髓科广东广州510280 加州大学洛杉矶分校牙医学院加州90095

龋病是一种细菌感染性疾病,变异链球菌是主要致龋菌。变异链球菌的双组分信号传导系统由膜相关组氨酸蛋白激酶和胞内反式作用因子两个基本成分组成。双组分信号传导系统可以使变异链球菌感应外界环境变化和调节内部基因表达,这对于维持... 详细信息

龋病是一种细菌感染性疾病,变异链球菌是主要致龋菌。变异链球菌的双组分信号传导系统由膜相关组氨酸蛋白激酶和胞内反式作用因子两个基本成分组成。双组分信号传导系统可以使变异链球菌感应外界环境变化和调节内部基因表达,这对于维持细菌的生存和毒力调整有重要作用。本文就与变异链球菌应激应答密切相关的双组分信号传导系统研究现状作一综述。

关键词：双组分信号传导系统应激应答 VicRK LiaRS CiaRH ComDE

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根癌农杆菌趋化响应调节蛋白编码基因atu0516和atu0520的功能研究

根癌农杆菌趋化响应调节蛋白编码基因atu0516和atu0520的功能研究

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作者：高大伟扬州大学

学位级别：博士

趋化性是指具有鞭毛结构的细菌能够敏锐地感知周围环境中存在的化学信号浓度梯度,并自主地做出有效的反应,如向着有利的物质迁移或者逃离有害物。趋化性对于细菌在恶劣的、营养贫瘠的环境中生存至关重要,同时趋化过程也是病原微生物侵... 详细信息

趋化性是指具有鞭毛结构的细菌能够敏锐地感知周围环境中存在的化学信号浓度梯度,并自主地做出有效的反应,如向着有利的物质迁移或者逃离有害物。趋化性对于细菌在恶劣的、营养贫瘠的环境中生存至关重要,同时趋化过程也是病原微生物侵染宿主过程中重要的环节之一。细菌的趋化性广泛存在于绝大多数已完成测序的细菌中,其中研究最为透彻的是大肠杆菌。模式细菌大肠杆菌具有一套完整的趋化系统,包括7个重要的组分蛋白:甲基趋化受体蛋白MCP、甲基转移酶CheR、偶联蛋白CheW、蛋白激酶CheA、甲基酯酶CheB、趋化响应调节蛋白CheY和磷酸酶CheZ。当甲基趋化受体蛋白MCP识别到环境中的趋化信号后,这些受体蛋白与偶联蛋白CheW、蛋白激酶CheA形成的三元核心复合体发生结构上的微妙变化,即能控制磷酸信号输出,直接影响反应调节蛋白CheY的磷酸化程度,从而减少结合到鞭毛根部马达开关复合物的两个组分(FliM和FliN)上的磷酸化的CheY(CheY-P)的量,继而调整马达旋转方式使细菌做出相应的运动反应。根癌农杆菌是一类在植物根系表面及周边土壤处分布的革兰氏阴性细菌,因其能够自主转移自身一段T-DNA基因并将其整合进宿主基因组,成为当下植物转基因工程中重要的工具菌。与大肠杆菌一样,根癌农杆菌也具有鞭毛结构和趋化能力,但是也有很多不同之处。根癌农杆菌趋化系统编码有20个甲基趋化受体蛋白MCP、两个偶联蛋白CheW以及两个趋化响应调节蛋白CheY(分别被atu0516和atu0520基因编码)。目前,关于根癌农杆菌趋化系统为什么只有一个蛋白激酶CheA却需要编码两个调节蛋白CheY以及两个CheY具体的生物学功能尚不清晰。生物信息学分析结果显示根癌农杆菌的两个CheY在大体结构上与大肠杆菌的CheY(EcCheY)较为相似,但是根癌农杆菌两个CheY蛋白的同源建模结构之间的骨架原子位移均方根偏差仅为2.507 (?),暗示两者在趋化信号传导中可能发挥不同的调节效率,甚至不同的作用。基于此,本研究通过三章内容深入解析根癌农杆菌的两个CheY的生物学功能,分析两个CheY在调节趋化信号方面的差异以及造成这种差异的分子机制,同时也拓展研究了两个CheY在调节趋化性以外如粘附、胞外多糖合成、生物被膜形成和致病性等方面的影响,为拓展认知趋化响应调节蛋白的生物学功能提供参考。主要研究结果总结如下:1、atu0516(cheY1)和atu0520(cheY2)基因受同一个趋化启动子调控,cheY基因的缺失不影响根癌农杆菌的正常生长和鞭毛的合成。首先通过无标记反向筛选同源重组法精准构建了两个cheY基因阅读框内删除的单基因缺失突变体和双基因缺失突变体,然后测定了构建成功的突变体的生长曲线,结果表明在实验室摇瓶培养条件下cheY1和cheY2基因的缺失不影响根癌农杆菌细胞的正常生长。接着通过透射电镜观察突变体的鞭毛结构,结果表明两个cheY基因缺失不影响鞭毛的合成与组装。敲除趋化基因簇的启动子后发现,根癌农杆菌的趋化性完全被消除。进一步地,荧光定量PCR分析显示缺失趋化启动子的根癌农杆菌突变体的cheY1和cheY2的转录水平明显下降,表明cheY1和cheY2基因受同一个趋化启动子转录调控。通过对液体培养和平板固体培养的细菌提取总RNA进行分析,结果显示平板固体培养的细菌的趋化操纵子转录水平与液体培养情况下的转录水平基本一致,这说明短期的不同生长状态不会影响趋化基因簇的表达。2、cheY1和cheY2基因共同参与趋化性的调节,其中CheY2是主要的趋化信号调节蛋白,CheY1辅助CheY2传导趋化信号,两者调节效率的差异主要来源于与下游FliM亲和力的不同,且马达结合面上关键氨基酸残基的差异是导致两个CheY功能分化的重要分子机制。首先通过游动平板法探究了两个cheY基因缺失突变体对营养物质的综合趋化响应,结果表明cheY2基因的缺失彻底中断了细菌的趋化信号传导,而cheY1缺失轻微地影响了趋化性,并且在cheY2基因缺失的情况下,cheY1不能单独调节趋化性。进一步地,cheY突变体单一细胞运动行为的观测结果证明,cheY2主要负责调控根癌农杆菌鞭毛马达的旋转速率和方式,cheY1基因的回补不能对根癌农杆菌的运动行为造成显著影响。分裂荧光法进一步表明CheY1和CheY2均能与CheA在根癌农杆菌细胞内结合形成复合物,并定位在细胞的一端。无论CheS是否存在,和CheY2相比,CheY1都能与CheA形成更多的细胞内荧光极点定位。接着,通过细菌双杂交和Western Blot法对CheY1、CheY2与CheA的相互作用进行探究,结果都显示CheY1和CheY2与CheA的亲和力在同一数量级,这也表明CheY1和CheY2的功能差异不是来源于与CheA的亲和力差异。而Ch

关键词：根癌农杆菌趋化性趋化响应调节蛋白双组分信号传导系统生物被膜形成

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vicK基因ATP结合位点对变异链球菌生物学功能的影响

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中国人兽共患病学报 2021年第5期37卷 435-443页

作者：黄珊珊宋秀宇徐巧丽饶慧华张加勤福建医科大学附属第一医院病理科福州350005 厦门市中心血站厦门361003 福建医科大学附属漳州市医院检验科漳州363000 江西省妇幼保健院南昌330006 厦门大学附属第一医院检验科厦门361003 厦门市基因检测重点实验室厦门361003

目的构建变异链球菌UA159 vicK ATP缺失突变株,研究vicK基因ATP结合位点对变异链球菌生长、产酸耐酸、细胞外多糖(exopolysaccharides,EPS)和生物膜形成等生物学功能的影响。方法quick change法构建vicK ATP缺失突变质粒,同时引入Sma lI... 详细信息

目的构建变异链球菌UA159 vicK ATP缺失突变株,研究vicK基因ATP结合位点对变异链球菌生长、产酸耐酸、细胞外多糖(exopolysaccharides,EPS)和生物膜形成等生物学功能的影响。方法quick change法构建vicK ATP缺失突变质粒,同时引入Sma lI,Sma lI插入kan基因盒(lox71-kan-lox66),建立vicK ATP缺失同源重组载体。所获载体转化变异链球菌,卡那霉素筛选阳性菌。pCrePA质粒转化阳性菌,30℃移除kan基因,37℃去除pCrePA,同源重组法获得无标记基因组vicK ATP缺失突变株。表达纯化VicK ATP缺失蛋白,并验证其ATP激酶活性。结果成功构建UA159 vicK ATP缺失突变株和补偿株。vicK ATP突变株生长速率和pH值下降均较野生株缓慢;实验株随致死性酸处理时间延长,生存率呈下降趋势,但突变株生存率较野生株高,即耐酸性增强;突变株EPS和生物膜形成较野生株明显减少。结论vicK基因ATP结合位点对变异链球菌的生长、产酸、酸耐受、EPS和生物膜形成起着重要调控作用。

关键词：变异链球菌 vicK基因 ATP结合位点 Cre/lox P系统双组分信号传导系统

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革兰氏阳性菌VicRK双组份信号转导系统调控功能的研究进展

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川北医学院学报 2022年第3期37卷 406-410页

作者：龙莉王一然陈文川王诗达四川大学华西口腔医学院·口腔疾病研究国家重点实验室·国家口腔疾病临床医学研究中心四川成都610041

VicRK是革兰氏阳性菌中高度保守的双组份信号系统之一。组氨酸激酶VicK定位于细胞膜上,可感受细胞内外环境刺激,将信号传递给胞内应答因子VicR,从而调控下游靶基因,维持细胞的生存及调整细菌致病性。本文综述了VicRK在枯草芽孢杆菌(***... 详细信息

VicRK是革兰氏阳性菌中高度保守的双组份信号系统之一。组氨酸激酶VicK定位于细胞膜上,可感受细胞内外环境刺激,将信号传递给胞内应答因子VicR,从而调控下游靶基因,维持细胞的生存及调整细菌致病性。本文综述了VicRK在枯草芽孢杆菌(***)、金黄色葡萄球菌(***)、肺炎链球菌(***)、表皮葡萄球菌(***)及变异链球菌(***)等革兰阳性菌中的功能调控研究现状,发现VicRK可参与细胞分裂、细胞自溶、环境应激、生物膜形成及毒力因子表达、免疫调控等过程。

关键词：革兰氏阳性菌双组分信号传导系统 VicRK 功能调控

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变异链球菌的VicRK双组分信号传导系统

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国际口腔医学杂志 2012年第1期39卷 89-92页

作者：田媛媛胡涛口腔疾病研究国家重点实验室四川大学成都610041

变异链球菌是人类龋病的主要病原菌,它通过蔗糖依赖性黏附形成生物膜并在其中产酸耐酸,最终导致龋病。VicRK是变异链球菌13种双组分信号传导系统之一,可调节变异链球菌致龋性毒力相关因子的表达。本文就VicRK的作用机制、结构组成、生... 详细信息

变异链球菌是人类龋病的主要病原菌,它通过蔗糖依赖性黏附形成生物膜并在其中产酸耐酸,最终导致龋病。VicRK是变异链球菌13种双组分信号传导系统之一,可调节变异链球菌致龋性毒力相关因子的表达。本文就VicRK的作用机制、结构组成、生理特性,及其对变异链球菌致龋性的影响,VicRK和VicX间的关系等研究进展作一综述。

关键词：变异链球菌双组分信号传导系统基因表达 VicRK

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双组分信号传导系统与变异链球菌的致病相关特性

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国际口腔医学杂志 2011年第3期38卷 297-300页

作者：陈娇周智蒋丹重庆医科大学附属口腔医院牙体牙髓病科重庆400015

双组分信号传导系统(TCSTS)在变异链球菌感受态形成、生物膜形成、结构稳定、菌素产生、产酸耐酸特性等毒力因子表达方面起着重要的作用,为其在菌斑生物膜中的竞争和生存提供了诸多生态性优势。本文就变异链球菌TCSTS的组成、TCSTS对变... 详细信息

双组分信号传导系统(TCSTS)在变异链球菌感受态形成、生物膜形成、结构稳定、菌素产生、产酸耐酸特性等毒力因子表达方面起着重要的作用,为其在菌斑生物膜中的竞争和生存提供了诸多生态性优势。本文就变异链球菌TCSTS的组成、TCSTS对变异链球菌致病相关特性的影响、TCSTS的应用意义等作一综述。

关键词：变异链球菌密度感应信号系统双组分信号传导系统

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VicK激酶活性对变异链球菌的生物学影响

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四川大学学报（医学版） 2013年第6期44卷 911-915页

作者：张琼王诗达周学东程磊李雨庆 Dilani B.Senadheera Dennis G.Cvitkovitch 口腔疾病研究国家重点实验室四川大学华西口腔医院牙体牙髓病科成都610041 多伦多大学牙学院牙学研究所

目的研究VicK蛋白的激酶活性对变异链球菌(***)生理及毒力因子的调控作用。方法使用PCR连接突变技术构建vicK基因敲出株,利用质粒搭载、表达VicK激酶活性废除蛋白。研究实验株菌落形态、隔夜培养菌液的变化、生物膜形成以及生物膜形成... 详细信息

目的研究VicK蛋白的激酶活性对变异链球菌(***)生理及毒力因子的调控作用。方法使用PCR连接突变技术构建vicK基因敲出株,利用质粒搭载、表达VicK激酶活性废除蛋白。研究实验株菌落形态、隔夜培养菌液的变化、生物膜形成以及生物膜形成相关重要基因转录水平的改变。结果 VicKH217A的菌落表面较野生株UA159及互补株SMCVicK平滑,且菌落也较之高耸;VicKH217A隔夜培养的菌液中细胞共聚堆积在玻璃管底部;VicKH217A形成的生物膜未发生明显改变;gbpB、ftf、gtfD的表达受抑制而gtfB/C基因的表达上调(P<0.05)。结论 VicK的激酶活性对变异链球菌正常生长、生物膜形成及与编码生物膜形成相关蛋白基因的表达起着重要的调节作用。

关键词：变异链球菌双组分信号传导系统 VicK 生物学作用

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野油菜黄单胞菌双组分信号系统基因的敲除及一个多糖合成相关基因的分析

野油菜黄单胞菌双组分信号系统基因的敲除及一个多糖合成相关基因...

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作者：韩仲吉华南热带农业大学

学位级别：硕士

野油菜黄单胞菌野油菜致病型(Xanthomonas campestris pv. campestris Xcc)是一种化能异养、单鞭毛,能产生胞外多糖的革兰氏阴性细菌。该细菌可在世界范围内引起十字花科植物的黑腐病(black rot disease),造成重大经济损失。目前,对其... 详细信息

野油菜黄单胞菌野油菜致病型(Xanthomonas campestris pv. campestris Xcc)是一种化能异养、单鞭毛,能产生胞外多糖的革兰氏阴性细菌。该细菌可在世界范围内引起十字花科植物的黑腐病(black rot disease),造成重大经济损失。目前,对其防治还缺乏有效的方法。因此,了解该细菌致病过程当中的信号转导过程将有利于发展新型的抗病或防病策略与手段。在原核生物中,双组分信号传导系统(two-component signal transduction system)是调控生理代谢的主要调控系统,对病原菌的致病性也有重要作用。该系统由组氨酸激酶和效应调节蛋白两部分组成。为了系统地研究Xcc的双组分信号系统,我们利用基于同源重组的单交换方法来构建双组分信号系统基因的突变体,从遗传学角度对其进行深入研究。通过生物信息学方法,根据双组分信号系统效应调节蛋白(response regulator,RR)的保守序列(D1, D2和K-boxes)预测出了Xcc ATCC 33913的全部RR基因。本研究从中挑选rr01-rr10共10个基因,根据基因内部序列设计引物,PCR扩增基因片断。回收的基因片断与不能在Xcc中复制的pKnockout-?或pK18mob自杀质粒载体相连,重组质粒经测序验证后电转化Xcc ATCC 33913。质粒上的基因片断与细菌染色体上的相应基因发生一次同源交换,产生被质粒序列打断的两个不完整基因拷贝,从而获得基因插入突变体。每个基因随机挑选6个克隆通过Southern blotting实验验证,结果表明以上10个基因都不是细菌的必须基因,均可被本研究所采用的突变方法失活。这些突变体被用于植物抗病、渗透性、温敏性等表型筛选实验,为从生物化学和生理学角度分析这些信号转导基因的功能提供遗传学研究基础。在以前的Xcc致病比较与功能基因组学研究工作中,通过EZ::TN Tnp转座子诱变Xcc 8004获得一个插入位点在XC3814 CDS (protein coding sequence)内的突变体。该基因在Xcc 8004的基因组研究中被认为具有脂多糖核心合成的相关功能,蛋白结构中包含一个糖基转移酶功能域。Southern blotting证明转座子为单拷贝插入。为了进一步探索该基因与致病性的关系,本研究对该突变体进行致病性检测、过量表达和互补分析、细菌多糖分析等研究。实验表明与Xcc 8004相比,突变体致病性明显下降,在NYGB琼脂平板上生长时,菌落形态变小而且干燥,其胞外多糖的产量仅为Xcc 8004的26%,而过量表达和互补菌株均能使以上表型恢复到Xcc 8004的水平,这些结果表明XC3814基因的功能可能是通过影响胞外多糖的合成,最终影响该细菌的致病过程。在寄主植物体上的生长与繁殖实验表明该突变体和Xcc 8004相差不大,推测XC3814基因有可能是在致病早期的侵染过程中起

关键词：野油菜黄单胞菌野油菜致病型双组分信号传导系统基因敲除致病性胞外多糖脂多糖

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在ipt-GUS转基因拟南芥中双组分信号传导基因应答体内细胞分裂素的增加(英文)

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植物生理与分子生物学学报 2005年第6期31卷 599-606页

作者：郭建春胡新文段瑞军符少萍中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室海口571101 中国热带农业科学院热带生物技术研究所海口571101

ipt-GUS转录融合基因在拟南芥植物中表达,其体内细胞分裂素的含量可达到野生型的20～30倍.从拟南芥种子萌发后的6、12、20和30 d四个时间分析了植物体内细胞分裂素含量的提高对其双组分信号传导系统中基因的影响.研究发现:细胞分裂素受... 详细信息

ipt-GUS转录融合基因在拟南芥植物中表达,其体内细胞分裂素的含量可达到野生型的20～30倍.从拟南芥种子萌发后的6、12、20和30 d四个时间分析了植物体内细胞分裂素含量的提高对其双组分信号传导系统中基因的影响.研究发现:细胞分裂素受体基因CREl比CKll基因更容易被增加的植物细胞分裂素诱导表达.拟南芥植物细胞分裂素反应调节基因ARR4和ARR5在植物发育的不同时期应答植物体内增加的植物细胞分裂素,ARR4的应答反应比ARR5早,种子萌发后的第6天幼苗真叶形成初期,ARR4基因被明显诱导;而ARR5的应答反应在幼苗真叶形成后的几个时间段均能检测到,并且在种子萌发后的第20天,花枝形成开始时特别明显.在双组分信号传导途径中,从受体到反应调节基因传导磷酸基团的传导基因AHP4在幼苗发育的后期种子萌发后的第20和30天,应答植物体内增加的植物细胞分裂素,并且在花枝形成初期比较明显.

关键词： ipt—GUS转基因拟南芥细胞分裂素基因转录双组分信号传导系统

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