检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：管青林山西医科大学

学位级别：硕士

目的：　　1建立生物检材中双酯型乌头生物碱(DDAs)及其代谢物的样品前处理和高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)检测方法。　　2探究DDAs及其代谢物的死后分布及分解动力学规律，为乌头生物碱相关案件的检材选取及保存提供实验基础，同... 详细信息

目的：　　1建立生物检材中双酯型乌头生物碱(DDAs)及其代谢物的样品前处理和高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)检测方法。　　2探究DDAs及其代谢物的死后分布及分解动力学规律，为乌头生物碱相关案件的检材选取及保存提供实验基础，同时为乌头生物碱中毒和死亡案件判别生前服毒和死后灌毒奠定理论依据。　　方法：　　1.受试动物：健康家兔(山西医科大学动物中心，SCXK(晋)2015-0003)，雄性。本研究方案通过伦理学审查(编号：2018LL350)。　　2.模型建立　　2.1死后分布动物模型：　　健康家兔9只，雄性，适应环境1周后禁食12h，灌胃。随机选取3只作为空白对照组;6只作为给药组，给药组以生川乌煎剂中AC(乌头碱)的LD50剂量灌胃，待呼吸心跳停止后立即取材，供仪器分析。　　2.2分解动力学动物模型　　(1)空白添加组　　空白兔血及肝(剪碎，研磨)平均分为三组，每组三等份，每组分别添加AC纯品、MA(新乌头碱)纯品、HA(次乌头碱)纯品(将所有添加后的检材超声混匀);每组的第一份、第二份、第三份分别置于20℃、4℃以及-20℃的保存条件下;取非常规毒物中毒尸体血，添加乌头碱纯品,三等份，分别放置于不同保存条件下。规定时间内，分别取样检测。　　(2)染毒动物检材组　　取健康家兔18只，雄性，适应环境1周后禁食12h，灌胃。随机选取6只为空白对照组;剩余家兔随机均分为2组，分别以生川乌煎剂中对应AC的LD50、10LD50剂量灌胃，常规取材，所取检材平均分为三组，分别置于20℃、4℃以及-20℃的保存条件下，检测时间同上。　　3.提取检测方法　　生物检材添加内标盐酸普罗地芬(SKF)后，液液萃取法提取，采用LC/MS/MS检测方法，以定性离子对保留时间和相对丰度比定性，内标法定量。　　4.数据处理方法：DAS3.0药代动力学软件;SPSS19.0统计学软件。　　结果：　　1.双酯型乌头生物碱及其代谢物的LC-MS/MS分析检测：　　经测定家兔血液中，DDAs及其代谢物的线性范围为0.08~133.33ng/mL，最低检出限(LOD)在0.05~0.22ng/mL范围内，最低定量限(LOQ)在0.17~0.73ng/mL范围内;家兔肝脏中，DDAs及其代谢物的线性范围为0.08~75.00ng/g，LOD在0.01~0.32ng/mL范围内，LOQ在0.03~1.07ng/mL范围内;在家兔血液和肝脏中DDAs及其代谢物的相关系数(r)均大于0.99，日内和日间精密度均小于20%，提取回收率均大于50%，基质效应均在80%~120%范围内。　　2.染毒生物检材中DDAs及其代谢物的死后分布研究：　　双酯型乌头生物碱及其代谢物在染毒动物体内含量变化依次为：　　(1)AC：外周血＞心血＞胃＞肺＞肾＞心＞肝＞肌＞脾　　(2)MA：外周血＞心血＞肺＞胃＞肾＞肝＞肌＞脾＞心　　(3)HA：外周血＞心血＞胃＞肺＞脾＞肾＞肌＞肝＞心　　(4)BAC：外周血＞心血＞胃＞脾＞肾＞肺＞肌＞心＞肝　　(5)BMA：外周血＞心血＞胃＞脾＞肾＞肌＞肝＞肺＞心　　(6)BHA：外周血＞心血＞胃＞肾＞脾＞肺＞肌＞肝＞心　　(7)Aconine：外周血＞心血＞肾＞胃＞心＞肝＞脾＞肌＞肺　　(8)Mesaconine：外周血＞心血＞肌＞脾＞肾＞肝＞胃＞心＞肺　　(9)Hypaconine：外周血＞心血＞肾＞胃＞肝＞心＞肺＞脾＞肌　　在乌头类生物碱中毒死亡案件中，可依次选择血液检材、含有胃内容的胃组织和肝、肺等含血量丰富的脏器作为送检检材。　　3.分解动力学：　　通过本论文得出：体内双酯型乌头生物碱分解快速，主要分解为单酯型乌头生物碱和醇胺型乌头生物碱。　　在不同保存条件(4℃、20℃和-20℃)下，双酯型乌头生物碱及其代谢物的分解动力学变化规律为：　　(1)温度越高，双酯型乌头生物碱及其代谢物的检出时限越短，建议在送检过程中低温冷冻保存。　　(2)同样保存温度下，灌胃药物浓度越高，检出时限越长;醇胺型乌头生物碱检出时间越早。　　(3)同样保存条件下，外周血检出时限最长，(因心血检材量有限，不能继续监测药物分解过程，需进一步实验完善)。　　(4)相同保存条件下，心脏中双酯型乌头生物碱及其代谢物的分解速率最快，不建议送检。　　(5)本论文研究表明，-20℃保存条件下，10LD50灌胃组的脏器在保存的3~7天和60~172天内检测出醇胺型乌头生物碱，而LD50灌胃组的脏器中未检出，提示在尸体新鲜检材(7天内)和较陈旧检材(大于60天)检出醇胺型乌头生物碱，可能为乌头碱中毒死亡。　　此外，本论文研究结果得到了DDAs及其代谢物在不同保存条件下不同检材中的分解动力学参数，根据DAS3.0给出的理论值与实测值符合关系良好，可同时运用本实验结果中成功拟合到的分解动

关键词：法医学双酯型乌头生物碱代谢物死后分布分解动力学

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超高效二维液相色谱法测定复方南星止痛膏中双酯型乌头生物碱的含量

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药物分析杂志 2019年第2期39卷 249-256页

作者：李郭帅马阳耿婷王伟黄文哲肖伟曹亮王振中南京中医药大学药学院南京210023 江苏康缘药业股份有限公司连云港222001 中药制药过程新技术国家重点实验室连云港222001

目的:采用在线中心切割超高效二维液相色谱(2D-UPLC)法,建立同时测定复方南星止痛膏中3个双酯型乌头生物碱(新乌头碱、乌头碱和次乌头碱)的含量测定方法。方法:一维UPLC采用Waters XBridgeBEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×50 mm 1.7μm),... 详细信息

目的:采用在线中心切割超高效二维液相色谱(2D-UPLC)法,建立同时测定复方南星止痛膏中3个双酯型乌头生物碱(新乌头碱、乌头碱和次乌头碱)的含量测定方法。方法:一维UPLC采用Waters XBridgeBEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×50 mm 1.7μm),以甲醇-0.008%二乙胺为流动相,梯度洗脱,流速0.1 mL·min^(-1),柱温18℃;二维UPLC采用Waters XBridge BEH C_(18)色谱柱(3.0 mm×100 mm 1.7μm),以乙腈-0.01%磷酸为流动相,梯度洗脱,流速0.7 mL·min^(-1),柱温40℃。进样量1μL,检测波长235 nm。结果:新乌头碱、乌头碱和次乌头碱的线性范围分别为0.66～9.90、0.55～8.20和0.91～13.72μg·mL^(-1),R2分别为0.999 5、0.999 9和0.999 6,线性关系良好;3个成分的平均加样回收率在82.5%～88.8%之间,方法的准确度和稳定性均较好;复方南星止痛膏中新乌头碱、乌头碱和次乌头碱含量分别在3.2～5.0、0.9～1.3、8.5～10.4μg·g^(-1)范围内。结论:该方法有效改善了复方南星止痛膏中待测组分的分离度,极大提高了检测灵敏度,对制剂中的3个双酯型乌头生物碱进行准确定量分析,提高产品的质量控制水平,并为临床用药提供理论支持。

关键词：在线中心切割二维液相色谱复方南星止痛膏双酯型乌头生物碱新乌头碱乌头碱次乌头碱

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双酯型乌头生物碱中毒大鼠代谢组学研究

双酯型乌头生物碱中毒大鼠代谢组学研究

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作者：解文凯山西医科大学

学位级别：硕士

目的：　　1.基于非靶标代谢组学技术研究双酯型乌头生物碱在中毒大鼠体内代谢情况，利用筛选出的差异代谢物来探究双酯型乌头生物碱在大鼠体内中毒生物标志物。　　2.利用靶标代谢组学技术研究双酯型乌头生物碱在中毒大鼠血浆中生物标... 详细信息

目的：　　1.基于非靶标代谢组学技术研究双酯型乌头生物碱在中毒大鼠体内代谢情况，利用筛选出的差异代谢物来探究双酯型乌头生物碱在大鼠体内中毒生物标志物。　　2.利用靶标代谢组学技术研究双酯型乌头生物碱在中毒大鼠血浆中生物标志物的含量变化，为相关的乌头中毒案件提供理论依据和实际参考。　　方法：　　1.双酯型乌头生物碱在中毒大鼠体内的非靶标代谢组学研究　　通过对乌头碱、新乌头碱和次乌头碱给药组中毒大鼠与空白组大鼠血浆和尿液中代谢物检测信息进行数据预处理，利用多元统计分析包括主成分分析（PCA）和偏最小二乘法分析（PLS-DA）等方法得到乌头碱组vs空白组、新乌头碱组vs空白组、次乌头碱组vs空白组、乌头碱组vs新乌头碱组、乌头碱组vs次乌头碱组以及次乌头碱组vs新乌头碱组六组间的差异代谢物。其中血浆组筛选出32种差异代谢物，尿液组筛选出36种差异代谢物。根据impact＞0、通路p值＜0.05以及差异代谢物在代谢通路中重复出现的频率等因素综合考虑，挑选出9种差异代谢物作为代谢通路组;因为双酯型乌头生物碱以乌头碱的毒性最为强烈，所以挑选出仅出现在乌头碱组vs空白组、乌头碱组vs新乌头碱组、乌头碱组vs次乌头碱组三组的9种差异代谢物作为比较组。查阅相关文献，有15种差异代谢物与我们研究结果相一致，最终选择15种差异代谢物作为中毒生物标志物，这就为后续靶标代谢组学研究提供了方向。　　2.双酯型乌头生物碱在中毒大鼠血浆的靶标代谢组学研究　　建立同时测定甜菜碱、精氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、异亮氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、马尿酸、DL-哌啶甲酸、犬尿酸、酪氨酸、5-羟基吲哚-3乙酸（5-HIAA）、脯氨酸、维生素B2和葵二酸的LC-MS/MS方法。对方法的专属性、线性范围、精密度、准确度以及回收率进行考察;并进一步对筛选出的中毒生物标志物在中毒大鼠血浆中的含量差异进行定量分析。　　结果：　　1.双酯型乌头生物碱在中毒大鼠体内的非靶标代谢组学研究　　血浆组筛选出32种，尿液组筛选出36种。通过有关文献研究、代谢通路分析以及组间对比分析后，进一步筛选出15种差异代谢物作为中毒生物标志物，包括甜菜碱、精氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、异亮氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、马尿酸、DL-哌啶甲酸、犬尿酸、酪氨酸、5-羟基吲哚-3乙酸、脯氨酸、维生素B2和葵二酸。代谢通路分析可知，impact值＞0，通路p值＜0.05的代谢通路有苯丙氨酸代谢、精氨酸代谢以及苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成。从中毒标志物的生物学意义上来讲，参与苯丙氨酸代谢通路的物质有苯丙氨酸、苯乙酰甘氨酸、酪氨酸和马尿酸，参与色氨酸代谢通路的5-HIAA以及又参与苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成通路的苯丙氨酸和酪氨酸均会对色氨酸代谢产生影响，而色氨酸代谢紊乱常出现在神经疾病中。苯丙氨酸和酪氨酸变化也会对神经系统造成损害。这提示这15种中毒标志物可能主要与双酯型乌头碱生物碱的神经毒性有关。　　2.双酯型乌头生物碱在中毒大鼠血浆的靶标代谢组学研究　　建立了同时检测血浆中15种中毒生物标志物的LC-MS/MS方法，其方法的线性范围在0.02~30μg/mL内，线性的相关系数（R2）均大于0.99，检出限（LOD）在0.15~8.73ng/mL范围内，定量限（LOQ）在0.78~29.10ng/mL范围内。日内和日间精密度均小于20%，日内和日间准确度在85.11~108.47%内，提取回收率在39.22~137.50%内。利用建立的LC-MS/MS方法，对双酯型乌头生物碱中毒大鼠血浆中15种生物标志物进一步进行了定量测定。结果表明，乌头碱组、新乌头碱组、次乌头碱组相对于空白组，DL-哌啶甲酸、葵二酸、异亮氨酸和苯丙氨酸均显著性降低,维生素B2均显著性升高;仅有乌头碱组vs空白组的犬尿酸显著性增加，蛋氨酸显著性降低;只有次乌头碱组vs空白组的5-HIAA显著性增加。这就提示DL-哌啶甲酸、葵二酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、维生素B2可能成为三种双酯型乌头生物碱的共有的特异性中毒生物标志物;犬尿酸和蛋氨酸有可能成为乌头碱中毒的特异性中毒标志物;5-HIAA有可能成为次乌头碱中毒的特异性中毒标志物。　　结论：　　本研究建立了双酯型乌头生物碱中毒大鼠模型，利用非靶标代谢组学技术从大鼠的血浆中筛选出32种，尿液中筛选出36种。结合有关文献研究，将代谢通路分析以及组间对比分析后，挑选出15种差异代谢物作为双酯型乌头生物碱中毒生物标志物。从中毒生物标志物的生物学意义可知，这15种中毒标志物所在的通路分析主要与乌头碱的神经毒性有关。靶标代谢组学定量发现提示DL-哌啶甲酸、葵二酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、维生素B2可能成为三种双酯型乌头生物碱的共有的特异性中毒生物标志物;犬尿酸和蛋氨酸有可能成为乌头碱中毒的特异性中毒标志物;5-HIAA有可能成

关键词：法医毒物分析非靶标代谢组学双酯型乌头生物碱中毒生物标志物

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川乌和制川乌中多种生物碱成分的含量测定

川乌和制川乌中多种生物碱成分的含量测定

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色谱分析在药物分析中的应用专题学术研讨会

作者：张聿梅鲁静蒋渝杨鲲李亚荣程显隆何轶林瑞超中国药品生物制品检定所永州市药品检验所淮安市药品检验所吉林市药品检验所

目的:建立川乌和制川乌中单酯及双酯型生物碱成分的高效液相色谱含量测定方法。采用 Diamonsil C（5μm,4.6mm×250mm）色谱柱,乙腈与四氢呋喃（流动相 A）-醋酸铵（含冰醋酸）(流动相 B)梯度洗脱,流速:0.8mL·min,检测波长:235... 详细信息

目的:建立川乌和制川乌中单酯及双酯型生物碱成分的高效液相色谱含量测定方法。采用 Diamonsil C（5μm,4.6mm×250mm）色谱柱,乙腈与四氢呋喃（流动相 A）-醋酸铵（含冰醋酸）(流动相 B)梯度洗脱,流速:0.8mL·min,检测波长:235nm;结果乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰新乌头碱和苯甲酰次乌头碱分离良好,各成分浓度与峰面积呈良好的线性关系,线性范围分别是:0.014～0.36μg（r=0.9996）,0.32～5.16μg （r=0.9999）,0.0106～1.06μg（r=0.9999）,0.053～1.32μg（r=0.9999）,1.29～ 20.6μg（r=0.9999）,0.22～3.59μg（r=0.9999）,0.02～0.10ng（r=0.9997）,0.13～ 2.04μg（r=0.9998）,0.02～0.12μg（r=0.9996）,0.15～2.41μg（r=0.9999）,平均回收率分别为104.9%（RSD=1.81%）,104.2%（RSD=1.53%）,106.3%（RSD=1.45%）, 104.1%（RSD=2.20%）,100.8%（RSD=2.88%）。采用本法测定了23批不同产地及不同炮制方法得到的川乌和制川乌药材中新乌头碱、次乌头碱、乌头碱、苯甲酰新乌头碱和苯甲酰次乌头碱含量,表明本法准确、简便、快速,选择性强,流动相 pH 温和,稳定;为川乌及饮片质量标准的建立提供了依据。

关键词：川乌制川乌双酯型乌头生物碱苯甲酰乌头生物碱高效液相色谱高效液相色谱-质谱

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