检索结果-内蒙古大学图书馆

世界感染杂志 2002年第4期2卷 242-244,287页

作者：黄振球居中亮上海市浦东新区高东镇医院检验科，上海201208 上海市东方医院检验科，上海200120

目的：探讨双重聚合酶链反应(pcr)技术检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的临床价值。方法：临床分离得葡萄球菌，挑取单个菌落，用碱煮沸法制备DNA模板，进行双重pcr反应，即在同一反应管内同时扩增femA基因和mecA基因。结果：100株... 详细信息

目的：探讨双重聚合酶链反应(pcr)技术检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的临床价值。方法：临床分离得葡萄球菌，挑取单个菌落，用碱煮沸法制备DNA模板，进行双重pcr反应，即在同一反应管内同时扩增femA基因和mecA基因。结果：100株葡萄球菌中，38株凝固酶阳性的葡萄球菌，其femA基因均为阳性，而mecA基因阳性者为30株，占78．9％(30／38)，mecA基因阴性8株，占21．1％(8／38)。62株凝固酶阴性的葡萄球菌femA基因均为阴性，mecA基因阳性48株，占77．4％(48／62)，mecA基因阴性14株，占22．6％(14／62)。另外，药敏法中有4株临界水平MSSA经pcr法鉴定为MRSA。结论：应用双重pcr技术检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌是一种敏感、快速、特异的实验诊断方法，可防止药敏法临界水平MRSA漏检为MSSA。

关键词：双重pcr技术检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌抗生素医院内感染

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副溶血性弧菌和溶藻弧菌的双重pcr检测技术

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食品与发酵工业 2015年第10期41卷 130-134页

作者：桑燕娇张继伦陈浩铭宁喜斌上海海洋大学食品学院上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心上海201306 上海机场出入境检验检疫局上海200135

主要针对副溶血性弧菌（VpBJ1997）和溶藻弧菌（VaATCC17749）的gyrB基因的不同位点设计特异性引物，利用双重pcr技术同时检测Vp（BJ1997）和Va（ATCC17749），并对该反应体系的特异性以及灵敏度进行检测。结果显示Vp（BJ1997）灵敏度... 详细信息

主要针对副溶血性弧菌（VpBJ1997）和溶藻弧菌（VaATCC17749）的gyrB基因的不同位点设计特异性引物，利用双重pcr技术同时检测Vp（BJ1997）和Va（ATCC17749），并对该反应体系的特异性以及灵敏度进行检测。结果显示Vp（BJ1997）灵敏度的检测下限可达2×10^2CFU／mL，Va（ATCC17749）灵敏度的检测下限可达2．03×10^2CFU／mL，双重pcr与单一pcr检测的灵敏度的数量级是相同的；与沙门氏菌（ATCC27892）、金黄色葡萄球菌（ATCC13565）、大肠杆菌（35218）、河弧菌（H265）、鳗弧菌（M936）、创伤弧菌（ATCC27562）无交叉反应；在人工污染试验中，混合菌液的检测下限2．84×10^3CFU／mL，而进一步稀释至2．84×10^2CFU／mL时，Vp（BJ1997）已检测不出，Va（ATCC17749）仍可检出。研究表明，该方法特异性强，灵敏度高，操作简单，成本低，检测速度快，为基层单位同时检测副溶血性弧菌和溶藻弧菌提供了一种快速准确的方法，对控制水产品中这两种致病性弧菌具有重大的意义。

关键词：双重pcr技术副溶血性弧菌(Vp BJ1997) 溶藻弧菌(Va ATCC17749)

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肉品中两种致病菌的双重pcr快速检测技术的研究

肉品中两种致病菌的双重PCR快速检测技术的研究

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中国畜牧兽医学会兽医食品卫生学分会第十二届学术研讨会

作者： CHEN Xuelian 陈雪莲 Wang Zhiqin 王志琴 ZHANG Xiao-hong 张晓红 ZHAI Shaohua 翟少华 YUAN Haoxiang 袁浩翔 QIN Ju 秦菊 College of Animal Medicine Xinjiang Agricultural UniversityUrumqi 830052 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052

目的：建立一种同步检测肉品中金黄色葡萄球菌与沙门氏菌的双重聚合酶链式反应。方法：采用7.5％氯化钠肉汤和GN增菌剂分别对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌进行增菌，根据金黄色葡萄球菌的femA基因与沙门氏菌的invA基因设计引物，通过pcr反... 详细信息

目的：建立一种同步检测肉品中金黄色葡萄球菌与沙门氏菌的双重聚合酶链式反应。方法：采用7.5％氯化钠肉汤和GN增菌剂分别对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌进行增菌，根据金黄色葡萄球菌的femA基因与沙门氏菌的invA基因设计引物，通过pcr反应对目标基因进行扩增，并对反应体系进行优化.结果：特异性实验显示引物特异性良好，经双重体外扩增体系优化显示条带清晰，无非特异性的扩增条带.结论：双重pcr是一种灵敏度高的快捷检测方法，可为这两种致病菌的同时检出提供新途径.

关键词：食品卫生病原菌污染致病菌检测双重pcr技术

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侵染三七的三七Y病毒和中国番茄黄化曲叶病毒pcr同步检测技术

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中草药 2022年第24期53卷 7864-7870页

作者：柳勤海杨馨李晓静兰平秀李凡谭冠林云南农业大学植物保护学院云南昆明650201 云南农业大学现代教育技术中心云南昆明650201

目的建立一种高效、快速、准确地同步检测侵染三七Panax notoginseng的2种病毒——三七Y病毒(Panax notoginseng virus Y,Pn VY)和中国番茄黄化曲叶病毒(tomato yellow leaf curl China virus,TYLCCNV)的双重pcr技术。方法分别以单一... 详细信息

目的建立一种高效、快速、准确地同步检测侵染三七Panax notoginseng的2种病毒——三七Y病毒(Panax notoginseng virus Y,Pn VY)和中国番茄黄化曲叶病毒(tomato yellow leaf curl China virus,TYLCCNV)的双重pcr技术。方法分别以单一感染Pn VY或TYLCCNV及复合侵染了这2种病毒的染病三七植株为样品,CTAB法提取叶片总核酸作为模板,根据Gen Bank上已登录的Pn VY和TYLCCNV这2种病毒核酸序列设计特异性检测引物。通过单一pcr技术明确染病三七样品Pn VY和TYLCCNV的发生情况,筛选出可用于一步法双重pcr检测Pn VY和TYLCCNV的引物组合及引物浓度,并对反应条件进行优化。对扩增产物进行克隆测序,验证一步法双重pcr检测的准确性和特异性。结果建立的一步法双重pcr检测技术能同步有效地检测三七病样中的Pn VY和TYLCCNV,检测灵敏度高,最低检测限点为核酸原液的0.01稀释倍数,特异性强。结论所建立的一步法双重pcr检测技术可以高效、快速、准确、特异地同步检测三七样品中的Pn VY、TYLCCNV 2种病毒。

关键词：三七病毒检测三七Y病毒中国番茄黄化曲叶病毒双重pcr技术

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水稻白叶枯病菌和细菌性条斑病菌的分子检测技术研究

水稻白叶枯病菌和细菌性条斑病菌的分子检测技术研究

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作者：张华南京农业大学

学位级别：硕士

水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae ***)和细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae ***)，是黄单胞菌属水稻黄单胞菌的不同致病变种。水稻白叶枯病是一个世界性病害，以亚洲稻区发生为重，水稻细菌性条斑病的危害仅次于水稻白叶枯病，主要... 详细信息

水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae ***)和细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae ***)，是黄单胞菌属水稻黄单胞菌的不同致病变种。水稻白叶枯病是一个世界性病害，以亚洲稻区发生为重，水稻细菌性条斑病的危害仅次于水稻白叶枯病，主要发生于我国南部地区，是国内重要的检疫性病害。这两种病害同时也被许多国家列为检疫性有害生物，限制从这两种病害的疫区进口水稻种子及稻米。因此，发展一种灵敏专化、准确便捷的同时可从水稻上检测这两种细菌的检疫技术无论对国内植物检疫还是对保证我国水稻种子及稻米的出口均有重要意义。本研究分别选用16S rDNA、ITS、23S rDNA序列的三对通用引物Srl(5’-AGAGTTTGATCATGGCTCAG-3’)和Sr2(5’-ACGGTTACCTTGTTACGACTT-3’)、L1(5’-AGTCGTAACAAGGTAGCCGT-3’)和L2(5’-GTGCCAAGGCATCCACC-3’)、C1(5’-ATTTCCGAATGGGGIAACCC-3’)和C3(5’-TGTCTCACGACGTTITAAACCCAGCTC-3’)对水稻白叶枯病菌、条斑病菌和野油菜黄单胞菌的三个菌株进行扩增，所有菌株均分别得到了一条分子量约为1.6kb、600bp、2.3kb的扩增产物。对参试的3个菌株的扩增产物进行克隆和测序，将这些序列与数据库中已经报道的其它16S rDNA、ITS、23S rDNA序列进行同源性比较，结合已经发表的这两种病原细菌的基因序列，在此基础上分别设计并合成了白叶枯病菌的专化性引物OSF1-OSR1和条斑病菌的专化性引物XoocF-XoocR。并且用这两对专化性引物分别对67个白叶枯病菌菌株、31个条斑病菌菌株、20个其它参试菌株进行pcr扩增，证明这两对专化性引物都具有很强的专化性。同时研制了免疫吸附pcr技术可以使检测纯菌的灵敏度比标准pcr技术提高约10倍。本研究通过将这两对专化性引物配对以及不断优化pcr反应条件，成功建立了双重pcr技术，同时对水稻白叶枯病菌和细菌性条斑病菌实施快速精确的检测。该双重pcr对单一的白叶枯病菌能够扩增出一条特异性条带，大小约1500bp；对单一的细菌性条斑病菌能够扩增出一条特异性条带，大小约338bp；对白叶枯和条斑的混合菌能够扩增出两条大小显著区别的特异性条带，分别为1500bp和338bp；而对其它参试菌不能扩增出任何条带。由于该双重pcr是直接对菌液进行扩增，所以只需常规pcr操作即可，简便快速;并且所用材料普通，只需一般pcr的试剂即可，成本低;而且不需要特别的技术。因此该双重pcr技术非常适合应用于日常的植物检疫工作。关键词:水稻白叶枯病菌;水稻细菌性条斑病菌;序列分析;专化性引物;双重 pcr技术;检测

关键词：水稻白叶枯病菌水稻细菌性条斑病菌序列分析专化性引物双重pcr技术检测

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利用SSR标记鉴定西瓜杂交种纯度的研究

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热带作物学报 2016年第9期37卷 1714-1718页

作者：刘子记詹园凤朱婕贺滉党选民中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所农业部华南作物基因资源与种质创制重点开放实验室海南儋州571737 海南大学园艺园林学院海南海口570228

建立快速、准确、稳定的种子纯度检测技术是保证西瓜杂交种质量的有效措施。利用分子标记技术对小型西瓜‘美月’杂交种纯度进行鉴定。从均匀分布于不同西瓜染色体上的88对SSR引物中筛选出8对引物在‘美月’亲本间表现明显的多态性,分... 详细信息

建立快速、准确、稳定的种子纯度检测技术是保证西瓜杂交种质量的有效措施。利用分子标记技术对小型西瓜‘美月’杂交种纯度进行鉴定。从均匀分布于不同西瓜染色体上的88对SSR引物中筛选出8对引物在‘美月’亲本间表现明显的多态性,分别位于第1、2、3、6、8、9、10染色体上,多态性比率为9.09%,多态性标记均为共显性标记。为了提高检测效率,结合多态性片段大小,同时对标记SSR48和SSR62进行扩增,可成功获得221 bp和131 bp的两组特异性条带,成功建立了双重pcr体系。为了提高鉴定结果的准确性,选用位于西瓜不同染色体上的4对共显性标记对‘美月’进行纯度检测,4对标记的检测结果高度一致,‘美月’杂交种纯度为99.44%。标记鉴定结果与田间表型鉴定结果比较分析表明,2种鉴定结果高度一致。研究结果可为西瓜杂交品种纯度快速检测和品种权保护提供理论依据与技术支撑。

关键词：小型西瓜杂交种双重pcr技术纯度鉴定

来源：评论

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双重pcr诊断棘阿米巴角膜炎研究

双重PCR诊断棘阿米巴角膜炎研究

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作者：秦茜温州医学院

学位级别：硕士

目的：棘阿米巴角膜炎(AK)是一种致盲率极高的慢性进行性角膜炎。由于发病早期常缺乏特异性临床表现、诊断方法欠敏感、特异性低，故常导致误诊、漏诊、误治。本研究采用分子生物技术双重pcr(multiplexpcr)，同时扩增棘阿米巴18srDNA和2... 详细信息

目的：棘阿米巴角膜炎(AK)是一种致盲率极高的慢性进行性角膜炎。由于发病早期常缺乏特异性临床表现、诊断方法欠敏感、特异性低，故常导致误诊、漏诊、误治。本研究采用分子生物技术双重pcr(multiplexpcr)，同时扩增棘阿米巴18srDNA和26srDNA基因片段，旨在探索一种快捷，方便，特异性、敏感性均高的早期诊断棘阿米巴角膜炎的方法。方法： 1.棘阿米巴的培养和形态学研究：对延边医学院提供的三种己知基因序列的棘阿米巴(***/s基因型、CJY/s2基因型和Neff基因型)用PYG培养液培养、保种，并用革兰氏染色进行滋养体和包囊的形态学观察。 ***及双重pcr扩增棘阿米巴18SrDNA和(或)26SrDNA基因方法学的建立。 3.棘阿米巴的动物(兔子)模型建立及双重pcr应用：用CYL/S2基因型棘阿米巴PYG悬浊液注射兔子左眼角膜基质层，使兔子感染棘阿米巴引起角膜炎；右眼做为对照，建立棘阿米巴角膜炎动物模型。观察兔子左、右眼变化。用双重pcr检测兔子两眼分泌物、眼冲洗液、眼角膜刮片及眼角膜活检组织。兔子两眼角膜病理切片并HE染色观察棘阿米巴滋养体及包囊的形态。 4.双重pcr法和无营养琼脂培养法检测：83例在校大学生无症状隐形眼镜配戴者保存盒内镜片放置过夜的液体、40例未曾使用过的隐形眼镜护理液、42例疑似棘阿米巴角膜炎患者眼分泌物及58例正常人眼分泌物。结果： 1.三种不同基因型棘阿米巴肉眼观察，形态上没有多大差异。但据延边医学院提供的基因序列，可知Acanthamoeba，***/s株和CJY/s2株同属T4基因型，***属于Neff型。***/s和Neff株具有99％相同碱基。Gram染色后，镜下清晰可见包囊双层囊壁结构，亮圈状。滋养体形态较难形容，但可以清楚看见其内含的食物泡和细胞核。 ***反映体系共30μl。其中含模板DNA5μl，引物(5μmol/L)2μl，Taq酶(1.5U/μl)0.3μl。反应参数如下：94℃5min，94℃40s，复性温度40s，72℃45s。共35个循环，最后72℃5min。由于引物不同，复性温度值也不同。引物Q-1、JDP和FT对应的复性温度值分别为50℃、55℃和61℃，双重pcr的复性温度值为60℃。单一pcr扩增三种棘阿米巴虫株18SrDNA，JDP和Q-1引物均扩增出分子量大小为463bp和188bp的特定扩增带。单一pcr扩增三种棘阿米巴虫株26SrDNA，***/s2株和***株的26S核糖体DNA基因片段扩增出分子量大小为126bp的特定扩增带，而***/s株未得到预期的扩增带。双重pcr同时扩增三种不同基因型棘阿米巴、大肠杆菌、流感病毒的18SrDNA和26SrDNA基因。***/s2株和***株中分别扩增出分子量大小为463bp和126bp的特定扩增带。而***/s株仅扩增出分子量大小为463bp的特定扩增带。大肠杆菌和流感病毒未有扩增出任何条带，说明该检测方法具有高特异性。pcr检测棘阿米巴灵敏度为8个病原。 3.双重pcr检测兔子左眼分泌物、眼冲洗液、眼角膜刮片和眼活检角膜组织提取的核酸中均扩增出分子量大小为463bp和126bp的特定扩增带；右眼四种物质均未扩增出任何条带。兔子角膜病理切片HE染色后镜下可见：兔子右眼(对照组)角膜组织结构清楚，兔子左眼(实验组)上皮细胞层、前弹力层溃破，大量炎性细胞浸润。上皮细胞层中看见棘阿米巴包囊，基质层内看见棘阿米巴滋养体。 4.双重pcr检测结果：83例隐形眼镜保存盒内液体，阳性1例，经核实该病人曾经患有棘阿米巴角膜炎，药物治疗后好转；40例未曾使用过的隐形眼镜护理液均为阴性；42例疑似病人眼分泌物，阳性2例，其中1人为隐形眼镜配戴者，1人曾有角膜外伤史；58例正常人眼分泌物均为阴性。琼脂培养结果：123例隐形眼镜保存盒内液体均阴性；42例疑似病人眼分泌物，阳性2例，即为双重pcr检测阳性患者；58例正常人眼分泌物均为阴性。检测是否感染棘阿米巴的“金标准”到目前为止是培养病原阳性。但结合病史，双重pcr的阳性检测率优于金标准。结论： 1.双重pcr具有高特异性，敏感性，能够有效的防止误诊。与单一的pcr扩增相比，双重pcr技术更好地防止了由于棘阿米巴属的基因分型过多造成的漏诊。 2.双重pcr技术应用于检测早期棘阿米巴角膜炎病，在感

关键词：棘阿米巴角膜炎角膜炎琼脂培养法双重pcr技术

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