检索结果-内蒙古大学图书馆

福建农业学报 2020年第8期35卷 857-862页

作者：王锦祥孙世坤陈岩锋陈冬金桑雷谢喜平福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013

【目的】建立检测兔源强毒力金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的双重pcr检测方法,为兔葡萄球菌病的诊断提供技术支持。【方法】根据兔源金黄色葡萄球菌的nuc和pvl两种毒力基因的保守序列分别设计了两对特异性引物进行双重pcr扩增... 详细信息

【目的】建立检测兔源强毒力金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的双重pcr检测方法,为兔葡萄球菌病的诊断提供技术支持。【方法】根据兔源金黄色葡萄球菌的nuc和pvl两种毒力基因的保守序列分别设计了两对特异性引物进行双重pcr扩增,对双重pcr反应体系的混合引物浓度和退火温度进行优化,对双重pcr检测方法的特异性、敏感性和准确性进行验证。【结果】当双重pcr反应体系混合引物的浓度为0.6μmol·L^-1、退火温度为59.6℃时,双重pcr的扩增效果最优。该双重pcr检测方法特异性好,能扩增出兔源强毒力金黄色葡萄球菌的nuc(320 bp)和pvl(585 bp)基因片段以及低毒力菌株的nuc(320 bp)基因片段,对兔源多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌、肺炎克雷伯菌和大肠杆菌等4种常见兔源细菌性病原菌以及阴性对照均无交叉反应。该方法敏感性高,能分别检出10 pg和100 fg的强毒力和低毒力兔源金黄色葡萄球菌基因组DNA。该方法重复性好,批内和批间重复性试验的变异系数均为0;该方法准确性好,对119份临床样品的检测结果与已报道的检测金黄色葡萄球菌nuc和pvl基因的单重pcr检测方法的符合率为100%。【结论】针对nuc和pvl两种毒力基因建立的双重pcr检测方法具有良好的特异性、敏感性、重复性和准确性,为兔源强毒力金黄色葡萄球菌的检测提供了有效的技术支持。

关键词：兔金黄色葡萄球菌强毒力菌株低毒力菌株双重pcr检测方法

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兔源F型多杀性巴氏杆菌双重pcr检测方法的建立

引用

福建农业学报 2021年第5期36卷 501-505页

作者：王锦祥孙世坤陈岩峰陈冬金桑雷谢喜平福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013

【目的】建立检测兔源F型多杀性巴氏杆菌的双重pcr检测方法,为兔巴氏杆菌病的诊断提供技术支持。【方法】根据多杀性巴氏杆菌kmt1基因和F型多杀性巴氏杆菌fcbD基因的保守序列分别设计了2对引物进行双重pcr扩增,对双重pcr检测方法的退火... 详细信息

【目的】建立检测兔源F型多杀性巴氏杆菌的双重pcr检测方法,为兔巴氏杆菌病的诊断提供技术支持。【方法】根据多杀性巴氏杆菌kmt1基因和F型多杀性巴氏杆菌fcbD基因的保守序列分别设计了2对引物进行双重pcr扩增,对双重pcr检测方法的退火温度和混合引物浓度进行优化,并对方法的特异性、敏感性、重复性和准确性进行验证。【结果】该双重pcr方法最优反应条件为:退火温度60℃、混合引物浓度0.8μmol·L^(−1)。该双重pcr方法能扩增出兔源F型多杀性巴氏杆菌的kmt1基因片段(260 bp)和fcbD基因片段(490 bp)、兔源A和D型多杀性巴氏杆菌的kmt1基因片段(260 bp),对兔源支气管败血波氏杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和阴性对照均为阴性,无交叉反应,特异性较强。该方法对兔源F型多杀性巴氏杆菌的最低检出限为1×10^(3)拷贝·μL^(−1),敏感性高。应用该方法对90份病死兔肺脏样品进行批内和批间重复性试验,结果均一致,重复性好。应用该双重pcr方法和已报道的多重pcr方法同时检测87份已知结果的呼吸道病死兔肺脏样品,结果显示双重pcr方法检测结果和已报道的多重pcr方法检测结果与已知结果的符合率分别为97.70%和94.25%,双重pcr方法检测结果与已报道的多重pcr方法检测结果的符合率为93.10%,双重pcr方法的准确性更高。【结论】针对多杀性巴氏杆菌kmt1基因和F型多杀性巴氏杆菌fcbD基因建立的双重pcr检测方法具有良好的特异性、敏感性、重复性和准确性,为兔源F型多杀性巴氏杆菌的快速检测提供了技术支撑。

关键词：兔 F型多杀性巴氏杆菌 kmt1基因 fcbD基因双重pcr检测方法

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猪伪狂犬病病毒野毒和猪圆环病毒3型双重pcr检测方法的建立

引用

中国兽医学报 2020年第1期40卷 9-13页

作者：赵宇崔建涛田润博韩昊莹郑慧华刘芳陈红英河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 郑州市猪重大疫病防控重点实验室河南郑州450002

为了能够同时检测和鉴别猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)和猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)。本研究参考GenBank中公布的PRV gE基因和PCV3基因组序列,且基于PRV gE和PCV3 Rep基因的保守区域,利用Primer 5.0引物设计软件设计了2对特异性引物,随后对其扩增条件进行优化,建立了能够同时检测PRV和PCV3的双重pcr检测方法。该方法可以同时扩增PRV的429 bp和PCV3的344 bp特异性片段,而对猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪瘟病毒、猪繁殖障碍与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒基因组扩增结果均为阴性。PRV和PCV3的最低检测值分别为502.0和91.2 copies/μL。结果表明该方法具有良好的特异性和灵敏性。本试验建立了能够同时快速检测PRV和PCV3,且具有高度特异性和灵敏性的双重pcr检测方法,为PRV和PCV3的检测提供技术支持。

关键词：猪伪狂犬病病毒猪圆环病毒3型双重pcr检测方法

来源：评论

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鸡传染性喉气管炎和新城疫病毒双重pcr检测方法的建立

引用

中国畜禽种业 2020年第12期16卷 190-191页

作者：戴娜桑福建省南安市动物疫病预防控制中心 362300

为了构建鸡传染性喉气管炎病毒(Avian Infectious Laryngotracheitis, AILT)和鸡新城疫病毒(Newcastle disease, ND)双重检测方法,本文以鸡传染性喉气管炎病毒和鸡新城疫病毒的基因保守序列为基础,进行2对特异性引物及2条非一致荧光基... 详细信息

为了构建鸡传染性喉气管炎病毒(Avian Infectious Laryngotracheitis, AILT)和鸡新城疫病毒(Newcastle disease, ND)双重检测方法,本文以鸡传染性喉气管炎病毒和鸡新城疫病毒的基因保守序列为基础,进行2对特异性引物及2条非一致荧光基团标记的TaqMan探针设计与试验。优化、调整反应条件后,建立鸡传染性喉气管炎病毒和鸡新城疫病毒双重pcr检测方法。这种双重pcr检测方法对传染性喉气管炎病毒和鸡新城疫病毒监测灵敏度为10拷贝/L,相对于常规OCR检测方法灵敏度提高100倍,并且该pcr检测方法对禽流感病毒、鸡白血病病毒等检测结果均为阴性,具备良好的特异性,此外该检测方法批内和批间的重复变异系数都<2%。使用鸡传染性喉气管炎病毒和鸡新城疫病毒双重pcr检测方法对比常规的检验方法测试150份组织样品,达到100%的正确率,该方法可以作为鸡传染性喉气管炎病毒和鸡新城疫病毒的快速检测手段。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒鸡新城疫病毒双重pcr检测方法建立试验

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