检索结果-内蒙古大学图书馆

中华心血管病杂志 2001年第1期29卷 51-53,I001页

作者：吴晓霞智光吴加金北京市中西医结合医院心内科 100039 解放军总医院心内科军事医学科学院基础医学研究所

目的　研究反式作用因子与心力衰竭相关蛋白表达量变化的关系。方法　运用生物信息学方法对 4种心力衰竭相关蛋白质的基因序列 5′调控区进行反式作用因子定位分析 ,应用免疫组化法检测 40例尸检心肌标本中血清反应因子水平。结果　通... 详细信息

目的　研究反式作用因子与心力衰竭相关蛋白表达量变化的关系。方法　运用生物信息学方法对 4种心力衰竭相关蛋白质的基因序列 5′调控区进行反式作用因子定位分析 ,应用免疫组化法检测 40例尸检心肌标本中血清反应因子水平。结果　通过定位分析 ,预测出 9种反式作用因子可能在心力衰竭发生发展过程中对心力衰竭相关蛋白发挥转录调控作用 ,选择其中的血清反应因子(SRF)为例 ,经免疫组化分析得出 :正常成人心脏中SRF量处于高水平 ,SRF阳性细胞百分率为 (91.6± 10 .0 5 ) % ;在慢性心力衰竭患者中SRF表达水平明显降低 ,仅 (2 8.73± 12 .79) % ,且SRF水平与心功能分级呈负相关 ;在急性心肌梗死患者中 ,SRF表达水平较慢性心力衰竭者高 ,为 (4 5 .33±13 30 ) % ,较正常组仍明显降低。

关键词：心力衰竭蛋白质反式作用因子基因表达血清反应因子

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三核苷酸重复序列失稳定机制:重复序列形成non-B二级结构的必要性和细胞反式作用因子的作用(英文)

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Acta Genetica Sinica 2006年第1期33卷 1-11页

作者：潘学峰英国爱丁堡大学细胞与分子生物学研究所

与三核苷酸重复序列CAG·CTG、CGG·CCG和GAA·TTC扩增和缺失有关的分子机制尚不能得到清楚的阐释。体外研究表明,上述疾病相关的重复序列可以在体外形成non-B二级结构,并介导重复序列扩增。然而,迄今为止,类似的观察尚... 详细信息

与三核苷酸重复序列CAG·CTG、CGG·CCG和GAA·TTC扩增和缺失有关的分子机制尚不能得到清楚的阐释。体外研究表明,上述疾病相关的重复序列可以在体外形成non-B二级结构,并介导重复序列扩增。然而,迄今为止,类似的观察尚未在体内研究过程中得以实现。利用模型生物大肠杆菌和酵母等进行的有关研究并不能模拟三核苷酸重复序列的扩增,这暗示三核苷酸重复序列的体内扩增可能与重复序列形成non-B二级结构关联性并不大。尽管理论上较长的三核苷酸重复序列可以在复制和后复制过程中较易形成non-B DNA二级结构,但这样的二级结构倾向于导致重复序列出现“脆性”,而不是扩增。事实上,患者所具有的三核苷酸重复序列扩增并非一定需要通过non-B二级结构的介导,这些重复序列的扩增是可以通过一种RNA转录诱导的局部DNA重复序列的复制和其后的DNA重排得以发生。

关键词：三核苷酸重复序列扩增和缺失脆性DNA 神经-肌肉疾病反式作用因子

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棉花曲叶病毒反式作用因子AC2的功能初探

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Acta Botanica Sinica 2001年第5期43卷 517-521页

作者：谢迎秋孟蒙朱祯吴茜徐鸿林刘玉乐中国科学院遗传研究所北京100101 中国科学院微生物研究所北京100080

有关非洲木薯花叶病毒 (ACMV)、番茄金色花叶病毒 (TGMV)的研究表明 ,双生病毒编码的反式作用因子AC2反式激活病毒链基因启动子的瞬时表达。以棉花曲叶病毒 (CLCuV)侵染的烟草叶片组织总DNA为模板 ,通过聚合酶链反应扩增CLCuV的AC2基因... 详细信息

有关非洲木薯花叶病毒 (ACMV)、番茄金色花叶病毒 (TGMV)的研究表明 ,双生病毒编码的反式作用因子AC2反式激活病毒链基因启动子的瞬时表达。以棉花曲叶病毒 (CLCuV)侵染的烟草叶片组织总DNA为模板 ,通过聚合酶链反应扩增CLCuV的AC2基因片段并插入克隆载体。将AC2置于CaMV 35S启动子下构建了瞬时表达载体。通过基因枪法将质粒载体导入烟草 (NicotianatabacumL .)和棉花 (GossypiumhirsutumL .)叶片细胞中进行瞬时表达 ,结果表明 ,在反式作用因子AC2的激活下 ,病毒链基因启动子驱动的GUS活性明显增强 ,然而激活后的病毒链基因启动子的活性仍低于互补链基因方向启动子 ;其表达方式与互补链基因启动子相似 ,即在叶肉及叶脉维管组织均有较高的活性。还探讨了AC2在土壤杆菌介导的转基因植物中的表达行为。

关键词：双生病毒启动子反式作用因子棉花烟草基因枪

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心力衰竭相关反式作用因子的定位分析

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生物物理学报 2000年第3期16卷 602-608页

作者：吴晓霞吴加金北京市中西医结合医院北京100039 军事医学科学院基础医学研究所北京100850

利用核酸序列数据库 ,反式作用因子库及蛋白质序列数据库中的实验数据资源 ,运用Goldkey软件对4种心力衰竭时表达量变化的蛋白质基因序列的5’调控区进行反式作用因子定位分析 ,预测出9种反式作用因子可能在心力衰竭发生发展过程中对蛋... 详细信息

利用核酸序列数据库 ,反式作用因子库及蛋白质序列数据库中的实验数据资源 ,运用Goldkey软件对4种心力衰竭时表达量变化的蛋白质基因序列的5’调控区进行反式作用因子定位分析 ,预测出9种反式作用因子可能在心力衰竭发生发展过程中对蛋白质的转录起到调控作用。

关键词：心力衰竭蛋白质反式作用因子位点分析

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顺式作用元件(IHF结合序列)与反式作用因子(CRP)对δ54依赖型启动子的相关调控机理研究

顺式作用元件(IHF结合序列)与反式作用因子(CRP)对δ54依赖型启动...

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作者：张远涛北京大学

学位级别：博士

细菌的RNA聚合酶是由核心酶(E)和σ因子组成，其中σ因子决定了RNA聚合酶与启动子的特异性结合。σ54因子与传统的σ70家族无任何同源性，而其某些结构特征与真核生物转录因子比较相似。前期工作表明，某些顺式作用元件(如IHF结合序列)... 详细信息

细菌的RNA聚合酶是由核心酶(E)和σ因子组成，其中σ因子决定了RNA聚合酶与启动子的特异性结合。σ54因子与传统的σ70家族无任何同源性，而其某些结构特征与真核生物转录因子比较相似。前期工作表明，某些顺式作用元件(如IHF结合序列)和反式作用因子(如cAMP受体蛋白，即CRP)参与了σ54依赖型启动子的转录调控。本论文就以上调控机制进行了比较深入的研究。　　首先，研究了顺式作用元件IHF结合序列对σ54依赖型启动子的调控机理，首次发现IHF结合序列是一段僵硬、弯曲差的DNA，其通过阻碍σ.54依赖型启动子激活转录所需的DNA环状结构的形成抑制它们的转录。具体表现在：1)以一般DNA为对照，用DNA环化实验检测八个野生的σ54依赖型启动子的弯曲性发现，与不含有IHF结合序列的启动子相比，含有IHF结合序列的启动子的弯曲性低5倍左右。2)把其中一个IHF依赖型启动子上游的IHF结合序列突变为随机序列后发现，其弯曲性升高但并没有恢复到一般DNA的水平，表明了IHF结合序列或两边的一些序列使整个启动子比较僵硬。3)在其中一个IHF非依赖型启动子上引入一个IHF保守结合位点后发现：其弯曲性降低了约5倍左右，并且不依赖于IHF结合位点所引入的位置，还与DNA螺旋系数的改变无关;在有IHF存在时，其弯曲性可以恢复到野生型启动子的水平。此外，当引入第二个IHF保守结合位点后，其弯曲性进一步降低。　　其次，考察了反式作用因子CRP-cAMP对σ54依赖型Pu启动子的抑制机理，证明CRP-cAMP通过阻碍Eσ54 RNA聚合酶与Pu启动子稳定结合直接抑制了Pu转录。具体表现在：1)由于CRP-cAMP同时调控其它许多基因的转录活性，其有可能依赖其它调控因子的参与间接地抑制Pu转录，而氯霉素阻断蛋白合成实验发现此抑制作用并不需要其它因子的参与。2)CRP-cAMP可能通过阻碍Eσ54结合启动子，也可能通过干扰随后的开放复合体形成来抑制Pu转录。体内DMS(dimethy1 sulfate，硫酸二甲酯)印迹分析被用来辨别这两种可能性。结果表明CRP-cAMP阻碍了Eσ54与Pu启动了的稳定结合，且此阻碍作用依赖于CRP的.ARI(激活区域Ⅰ)。3)由于Eσ54与Pu的稳定结合需要RNA聚合酶的αCTD(α亚基C末端)与Pu上游的UP类似元件相互作用，而当把UP类似元件突变为随机序列后，体内测活和DMS印迹实验发现CRP-cAMP对Pu转录的抑制明显增强，并且更容易阻碍Eσs4与Pu结合。　　综上所述，本论文阐明了顺式作用元件IHF结合序列对σ54依赖型启动子的调控作用，揭示了反式作用因子CRP-cAMP抑制Pu启动子转录的分子机制。这些研究成果为揭示基因表达调控机理和存在于生命体内的“基因调控网络”提供了有益的探索。

关键词：顺式作用元件反式作用因子 δ54依赖型启动子调控机理

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黑曲霉糖化酶启动子区CCAAT框与反式作用因子AngCP结合的分析

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自然科学进展 2003年第12期13卷 1253-1258页

作者：朱兴国仇润祥刘丽唐国敏中国科学院微生物研究所北京100080

依次通过20％～40％饱和硫酸铵、凝胶过滤、肝素柱层析及DNA亲和层析纯化了黑曲霉糖化酶启动子区CCAAT框DC(-489 bp～-414 bp)结合蛋白(AngCP1)及CCAAT框PC(-390 bp～-345 bp)结合蛋白(AngCP2).凝胶过滤分析和SDS-PAGE结果表明AngCP1和A... 详细信息

依次通过20％～40％饱和硫酸铵、凝胶过滤、肝素柱层析及DNA亲和层析纯化了黑曲霉糖化酶启动子区CCAAT框DC(-489 bp～-414 bp)结合蛋白(AngCP1)及CCAAT框PC(-390 bp～-345 bp)结合蛋白(AngCP2).凝胶过滤分析和SDS-PAGE结果表明AngCP1和AngCP2的分子质量均约为120 ku,由分子质量为34 ku和50 ku的亚基组成.Western blot显示两者的34 ku亚基均能特异性地与鼠抗AngHapC抗体产生反应,进一步的电泳迁移率实验证实AngCP1和AngCP2为同一蛋白质,称为*** blot显示34 ku亚基结合于DC,而50 ku亚基结合于PC,并且34ku亚基与DC的结合能力强于50 ku亚基与PC的结合.上述AngCP具有与DC,PC不等结合强度的特点暗示三者在糖化酶表达调控中有着重要作用.

关键词：黑曲霉糖化酶 CCAAT结合蛋白 DNA-蛋白相互作用蛋白纯化反式作用因子丝状真菌基因表达

来源：评论

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植物反式作用因子研究进展

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高技术通讯 2000年第2期10卷 97-102页

作者：谢迎秋孟蒙朱祯中国科学院遗传研究所北京100101

植物基因表达转录水平的调控是一个严格有序的选择性过程。反式作用因子在该过程中起关键性作用,它通过与顺式调控元件相互作用,以激活或抑制基因的表达。近年来,植物反式作用因子研究取得了显著进展,本文对不同类别的反式作用因子结构... 详细信息

植物基因表达转录水平的调控是一个严格有序的选择性过程。反式作用因子在该过程中起关键性作用,它通过与顺式调控元件相互作用,以激活或抑制基因的表达。近年来,植物反式作用因子研究取得了显著进展,本文对不同类别的反式作用因子结构特点及其在基因表达调控中的作用机理进行了介绍。

关键词：植物基因表达反式作用因子遗传学

来源：评论

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烟草sm-Nvas启动子反式作用因子的鉴定及其同源基因的功能研究

烟草sm-Nvas启动子反式作用因子的鉴定及其同源基因的功能研究

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作者：邵敏敏中南民族大学

学位级别：硕士

植物维管组织在植物体中的营养运输和机械支持等方面起着至关重要的作用。本实验室已克隆了一个维管束发育相关的新的基因sm-Nvas,它的表达受水杨酸(SA)和甲基茉莉酸(Me JA)特异性诱导。用Ca MV35S为启动子构建了带有该基因的双元表达载... 详细信息

植物维管组织在植物体中的营养运输和机械支持等方面起着至关重要的作用。本实验室已克隆了一个维管束发育相关的新的基因sm-Nvas,它的表达受水杨酸(SA)和甲基茉莉酸(Me JA)特异性诱导。用Ca MV35S为启动子构建了带有该基因的双元表达载体,并进行了遗传转化,转基因植株出现矮化、叶脉增多、茎和叶脉增粗等一系列表型变化。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对该基因进行了敲除实验,观察转基因植株发现不管是在维管列数还是排列密集程度都发生了变化,这就进一步确认了sm-Nvas基因与维管束发育有关。本研究进一步研究sm-Nvas及其同源基因的基因功能,所取得的研究结果如下:(1)酵母单杂交技术从cDNA文库钓取与sm-Nvas基因启动子顺式作用元件存在相互作用的反式作用因子。本实验共筛选出15个与启动子序列存在相互作用的候选c DNA序列,经过生物信息学分析发现这些候选的反式作用因子都与抗病性及损伤响应相关,主要包括损伤响应相关因子、MAPK相关因子以及常见的与启动子互作调节基因表达的转录因子,说明sm-Nvas基因在植物体的防御反应中扮演着重要角色。(2)原核表达方法获取目的蛋白sm-Nvas。采用pMAL-p5X载体构建了sm-Nvas基因的原核表达系统,诱导表达带有麦芽糖结合蛋白(MBP)标签的融合蛋白,再用特异性蛋白酶Factor Xa切割、亲和柱层析纯化得到目标蛋白sm-Nvas。该纯化蛋白可用作后续的酶学分析及蛋白质表达分析。(3)实时荧光定量PCR技术分析sm-Nvas同源基因在外源激素SA、MJA及伤的诱导下的表达情况。SA和MJA处理林烟草Nicotiana sylvestris与渐狭叶烟草Nicotiana attenuata,16h后同源基因的表达量达到峰值,其体内sm-Nvas同源基因的表达发生了改变。基因表达分析表明同源基因与sm-Nvas基因相似,都在植物体防御途径中扮演了重要的角色。同时,分别构建了同源基因的超表达载体并完成遗传转化,为研究它们在抗病方面的生物学功能提供实验材料。

关键词：烟草维管束 sm-Nvas 反式作用因子原核表达同源基因

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利用蛋白质组学发现机械力传导过程中的反式作用因子和细丝蛋白A结合伴侣的研究

利用蛋白质组学发现机械力传导过程中的反式作用因子和细丝蛋白A...

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作者：王家乐天津大学

学位级别：硕士

细胞接受机械力（包括摩擦力、压力、牵引力、重力和剪切力等）信号并对机械力做出反应的生物学过程称为机械力信号传导。不管是真核生物还是原核生物,细胞都会受到机械力的影响并对机械力产生一定的应答。生物体内部保持着静态或动态... 详细信息

细胞接受机械力（包括摩擦力、压力、牵引力、重力和剪切力等）信号并对机械力做出反应的生物学过程称为机械力信号传导。不管是真核生物还是原核生物,细胞都会受到机械力的影响并对机械力产生一定的应答。生物体内部保持着静态或动态的力学相互作用,例如在血液流动时会产生剪切力,肌肉伸缩时会产生拉伸力。同时外在力学环境也对生命状态造成影响,例如宇航员进入太空后在失重的状态下会发生骨损失的现象。此外,机械力也可以引发人体产生一系列物理变化甚至疾病。例如,二尖瓣疾病与多种力敏感性活性分子相关,如细胞外成分、机械力传导原件、细胞质和核转录因子。骨疾病（强直性脊柱炎,腕管综合征,慢性背痛,椎间盘退变）通常由于破骨细胞和成骨细胞对骨的分解和形成出现了平衡偏差,这种平衡偏差主要由遗传异常或者机械力传导异常所致。再如,血管细胞产生形态变化会对血管的生理状态产生深远影响,引发血管疾病,如动脉粥样硬化和血栓形成。因此,机械力信号传导机制的研究对于人类健康具有重要意义。从细胞生物学角度,机械力信号传导对机械力敏感的细胞的生长、分化和存活有重要影响。例如,幼稚间充质干细胞会在软硬不同的基质上分化成不同类型的组织。当前,细胞如何感受和传递机械力并调控基因表达的分子机制仍不清楚。目前研究进展表明,机械及化学机制均参与了信息由胞外向染色体的传递过程,机械信号途径由细胞外基质、细胞骨架、核骨架构成。该结构体系支配着细胞和细胞核的形态,在细胞外周与核内染色质之间建立了结构与功能的联系,在细胞周期及基因表达中起到了一定的作用。化学信号机制,利如MAPK/Ras途径能够激活多种激酶,调节转录因子、组蛋白、非组蛋白活性;同时也能改变染色体结构和基因表达。因此,机械和化学调节机制并非独立,二者相互影响。为了对细胞机械力信号传导的分子机制进行深入研究,这篇论文在两部分中分别用自顶向下和自底向上两种方法筛选和鉴定新型力敏感性分子。在第一部分中,本论文尝试利用SILAC技术（细胞培养中的同位素标记技术）结合质谱分析开发一种新型的自底向上的鉴定转录相关因子的方法。通常作用于细胞膜的物理或生化信号可以激活转录因子,转录因子可以聚集在其作用位点并激活细胞特异性的基因表达过程。该过程必不可少的一步就是转录因子由细胞质到细胞核的运输以及反式作用因子在DNA的结合。当前,已经有一些蛋白分子作为核质穿梭分子被相继报导。YAP/TAZ已被鉴定为非常保守的机械传导器。YAP/TAZ可接收外界如剪切力和细胞外基质硬度等多种机械应力信号,并将机械力信号翻译到细胞特异性转录程序。研究表明,当细胞在较硬的基质上生长以及没有受到接触抑制时,YAP/TAZ在细胞核中。而当细胞在较软的基质上生长或受到接触抑制时,YAP/TAZ在细胞质中。但就YAP/TAZ的穿梭机制,科学家们还未完全研究清楚。有观点认为YAP/TAZ受Hippo信号通路调控:当细胞受力时,Hippo通路处于未激活状态,此时未磷酸化的YAP/TAZ在细胞核内并参与细胞生长的基因调控;当细胞处于失力状态时,Hippo通路激活,此时被磷酸化的YAP/TAZ出核进入细胞质中,并被蛋白酶体消化。还有观点认为,机械应力的施加会使细胞核孔变大从而引发YAP的进核。不同于核质穿梭的转录因子如YAP在调控基因表达时有明显的定位区别（细胞核或细胞质）。反式作用因子可以一直存在与细胞核中并直接或间接地识别或者结合顺式作用元件的核心序列,从而参与调控基因转录效率,对基因表达产生激活或阻遏的作用。之前研究还表明,染色质上存在有脱氧核糖核酸酶的超敏位点,大量转录调控元件附着在脱氧核糖核酸酶的超敏位点,因此利用脱氧核糖核酸酶对染色质进行消化可实现对结合于转录调控元件上的反式作用因子的提取。由于当前细胞机械力信号传导的机制仍不清楚,新型参与基因调控的相关因子的发现有助于细胞机械力信号传导机制的研究。SILAC技术结合质谱分析可以实现定量的蛋白质组学研究,从而发现参与基因调控的核质穿梭分子以及反式作用因子。SILAC技术是指在细胞培养过程中,用含有同位素标记的氨基酸(如L-Arginine,L-Lysine和13C6-L-Lysine,13C615N4-L-Arginine)的完全培养基进对细胞行连续不断的传代培养,使细胞内所有蛋白中的该氨基酸充分得到交换。随后对其中一组细胞进行机械力刺激作为实验组,与对照组混合后进行质谱分析,通过比较蛋白样品中轻重氨基酸的比率筛选核质穿梭的转录因子或存在于细胞核中的反式作用因子。近年来,SILAC技术被广泛应用于蛋白质组学。与传统蛋白质组学相比,细胞培养中的同位素标记技术具有适用范围更广,检测结果更准,样品制备更为简便和稳定等优点。本课题组首先尝试利用SILAC技术结合质谱分析发现新型具有力敏感性的转录相关因子。首先,我们先后对小鼠胚胎成纤维细胞、小鼠

关键词：机械力信号传导核质穿梭分子反式作用因子 WBP2 SILAC 细丝蛋白A fimbacin 肌动蛋白交联蛋白

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HeLa细胞的反式作用因子CTF／NF－1与其顺式作用元件的特异性作用

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Acta Genetica Sinica 1994年第4期21卷 321-329页

作者：谷春刘连瑞王恢鹏冯尚杨涛兰中国科学院遗传研究所

本文运用凝胶延迟反应（ＧｅｌＲｅｔａｒｄａｔｉｏｎＡｓｓａｙ）和足迹法（Ｆｏｏｔｐｒｉｎｔｉｎｇ）研究了ＨｅＬａ细胞核蛋白中的反式作用因子ＣＴＦ／ＮＦ－１与其对应的顺式作用元件的特异性作用。研究结果表明ＨｅＬａ细胞的... 详细信息

本文运用凝胶延迟反应（ＧｅｌＲｅｔａｒｄａｔｉｏｎＡｓｓａｙ）和足迹法（Ｆｏｏｔｐｒｉｎｔｉｎｇ）研究了ＨｅＬａ细胞核蛋白中的反式作用因子ＣＴＦ／ＮＦ－１与其对应的顺式作用元件的特异性作用。研究结果表明ＨｅＬａ细胞的ＣＴＦ／ＮＦ－１包含有不同分子量的组分，它们均能特异性结合于特异位点ＡＴＡＴＴＧＧＣＴＴＣＡＡＧＣＣＡＡＡＡＴＧＧＡ序列，形成至少５种不同分子量形式的因子－元件复合物。这一结果对阐明ＣＴＦ／ＮＦ－１复杂多样的调控机制及其组成种类有重要意义。此外，本文还建立了一种制备核蛋白提取物的新方法，有效地解决了因反式作用因子含量极低带来的研究上的困难。

关键词：反式作用因子顺式作用 HeLa细胞

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