检索结果-内蒙古大学图书馆

海洋通报 2006年第4期25卷 78-84页

作者：魏炜孟春晓秦松中国科学院海洋研究所山东理工大学生命科学院山东淄博255049

转录调控是基因表达调控的重要方式。转录调控的研究主要集中在启动子的克隆与分析、反式作用因子(即DNA结合蛋白)的检测及转录量的检测三方面。介绍了基因组步移、凝胶阻滞、酵母双杂交系统、cDNA微阵列等基因转录调控的常用研究方法,... 详细信息

转录调控是基因表达调控的重要方式。转录调控的研究主要集中在启动子的克隆与分析、反式作用因子(即DNA结合蛋白)的检测及转录量的检测三方面。介绍了基因组步移、凝胶阻滞、酵母双杂交系统、cDNA微阵列等基因转录调控的常用研究方法,并对藻类基因转录调控的最新研究进展进行了评述。

关键词：转录调控顺式作用元件反式作用因子启动子 DNA结合蛋白藻类

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

激发子诱导植物基因表达研究进展

引用

高技术通讯 2002年第11期12卷 101-106页

作者：王建设萨其拉王义琴孙勇如中国科学院遗传与发育生物学研究所北京100101

介绍了基因诱导表达调控的研究方法 ,并概述了与ABA、乙烯、真菌激发子诱导表达相关的顺式作用元件 (G box、GT 1结合位点、GCC box、W box) ,以及与这些顺式作用元件相互作用的转录因子 (GBFS、GT 1、EREBPS、WRKY)。

关键词：基因表达研究进展激发子诱导表达顺式作用元件反式作用因子分子机制植物基因工程

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

肿瘤相关基因转录调控蛋白的识别与研究进展

引用

中国实验诊断学 2010年第4期14卷 608-611页

作者：张荣娟于颖彦上海交通大学医学院附属瑞金医院上海消化外科研究所上海200025

癌相关基因主要包括两大类,即原癌基因与抑癌基因。在自然或实验条件下原癌基因的活化或者抑癌基因的失活具有诱导细胞恶性转化功能。癌相关基因的表达调控异常是细胞癌变中的重要事件。在癌相关基因转录调控中,转录调控蛋白作为反式作... 详细信息

癌相关基因主要包括两大类,即原癌基因与抑癌基因。在自然或实验条件下原癌基因的活化或者抑癌基因的失活具有诱导细胞恶性转化功能。癌相关基因的表达调控异常是细胞癌变中的重要事件。在癌相关基因转录调控中,转录调控蛋白作为反式作用因子(trans acting factors)与基因自身的顺势作用元件(cis acting elements)相互作用,[第一段]

关键词：相关基因转录调控蛋白癌相关基因识别肿瘤细胞恶性转化基因转录调控反式作用因子

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

大鼠和小鼠基因转录调控的顺式反式作用机制研究

大鼠和小鼠基因转录调控的顺式反式作用机制研究

引用

作者：梁卫政哈尔滨工业大学

学位级别：博士

基因转录在生物进化历程中起着十分关键的作用。早在四十多年前,美国的进化论生物学家King和Wilson就认为人与黑猩猩之间在生物大分子结构上的差别微乎其微,并不能说明二者之间在外表形态、生物特征和行为等各方面所产生的重大区别,从... 详细信息

基因转录在生物进化历程中起着十分关键的作用。早在四十多年前,美国的进化论生物学家King和Wilson就认为人与黑猩猩之间在生物大分子结构上的差别微乎其微,并不能说明二者之间在外表形态、生物特征和行为等各方面所产生的重大区别,从而提出可能是基因转录调控的改变造成人和黑猩猩的不同。然而有关基因转录调控进化的直接实验证据明显不足。近年来,随着实验手段和生物信息工具的发展,使得国内外研究学者可以开展这方面的研究,其中,杂交模型是一种经典的可用于区分基因转录调控因素中顺式调控元件(cis elements)和反式作用因子(trans factors)作用大小的研究模型。因此,通过杂交模型研究基因转录调控的顺式作用和反式作用对理解物种分子表型层面的进化有重要意义。结合上述研究背景,本论文以大鼠和小鼠融合细胞以及杂交小鼠为研究模型,以转录组测序技术RNA-seq、染色质开放性测序技术ATAC-seq和蛋白与DNA互作技术Ch IP-seq等高通量测序技术作为研究手段,开展了三个层面的研究:顺式反式调控相互作用的研究、单独顺式调控的研究以及单独反式调控的研究。在顺式反式调控相互作用的研究层面,通过分析大鼠和小鼠在基因表达层面和染色质开放性层面顺式反式调控的区别以及遗传模式的变化,发现在基因表达调控层面,更多的基因受到了顺式和反式的共同调控,而在染色质开放性调控层面,更多基因的调控模式是保守的。此外,在遗传模式方面,发现基因表达的遗传呈现出更多不兼容的现象,相反,染色质开放性的遗传则主要表现出保守型的现象。在单独顺式调控元件的研究层面,通过分析单等位基因在不同组织中的分布变化规律,发现单等位基因在基因表达层面和染色质开放性层面都受到明显的组织细胞特异性调控,进一步发现基因启动子区域的染色质开放性不是形成单等位基因表达的充分条件。在单独反式作用因子研究层面,通过多物种全基因组转录因子氨基酸序列的比对分析,发现小鼠CDX2蛋白在DNA结合区域有3个特异的氨基酸突变,进一步通过功能性实验分析研究了CDX2蛋白在大鼠和小鼠中介导的转录调控差异以及小鼠CDX2蛋白三个特异氨基酸突变引起的功能变化,结果发现小鼠CDX2和大鼠CDX2之间没有明显的功能差异,但是三个氨基酸单独和组合突变会造成功能的部分缺失。综上所述,本论文系统地探讨了大鼠和小鼠基因转录调控的进化模式,详细地研究了顺式调控元件和反式作用因子在大鼠和小鼠进化过程中发挥的作用,同时探究了多组学相互结合的应用范畴,发现了哺乳动物物种间即大鼠和小鼠之间不同于低等动物的进化调控模式,即顺式调控的影响并没有显著增多;同时,也发现了单等位基因是受到明显的组织特异性调控;此外,进化上特别保守的转录因子如CDX2也会存在氨基酸的突变,而受到如此强烈正向选择的氨基酸突变并没有在物种中引起功能性的差异。总之,本论文为顺式反式进化调控的研究打下了良好的基础并提供了可借鉴的思路和方法,其中,大鼠和小鼠融合细胞的研究为哺乳动物物种间顺式反式进化调控的研究开辟了新的思路,后续可以通过类似的研究手段克服生殖隔离的缺陷,进而为探索人类和其他物种进化调控的差异提供可能;杂交小鼠单等位基因的研究为寻求新的常染色体单等位基因提供了有效的研究手段,也为寻求新的印记基因提供了可能;CDX2转录因子的研究为反式作用因子中蛋白氨基酸序列突变导致的进化差异的研究提供了方法参考和借鉴。

关键词：进化调控顺式调控元件反式作用因子单等位基因 CDX2

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

大鼠谷胱甘肽S-转移酶P基因转录调控的研究

大鼠谷胱甘肽S-转移酶P基因转录调控的研究

引用

作者：廖名湘中国协和医科大学

学位级别：博士

研究背景谷胱甘肽S-转移酶Pi与细胞转化，化学致癌变过程中，肿瘤的发生、发展以及多重耐药性密切相关。对大鼠谷胱甘肽S-转移酶Pi（简称GST-P）的研究发现，大鼠GST-P在大鼠正常肝细胞和正常再生肝细胞中只有痕量表达，而在化学致肝... 详细信息

研究背景谷胱甘肽S-转移酶Pi与细胞转化，化学致癌变过程中，肿瘤的发生、发展以及多重耐药性密切相关。对大鼠谷胱甘肽S-转移酶Pi（简称GST-P）的研究发现，大鼠GST-P在大鼠正常肝细胞和正常再生肝细胞中只有痕量表达，而在化学致肝癌变的早期被特异性诱导表达，在大鼠肝癌前损伤和肝细胞癌中可以检测到GST-P高水平的表达，因此认为大鼠GST-P是肿瘤最可靠最准确的标志物。了解大鼠GST-P在癌变过程中的变化情况，关键是要弄清此过程中编码GST-P的基因表达水平的改变。许多实验证明大鼠GST-P基因表达调控的关键部位是在转录水平上。因此搞清大鼠GST-P基因转录调控机制对于了解癌变过程中GST-P基因表达的增强方式，了解化学致癌的机理，为进一步寻找对癌症的综合治疗和预防方法提供理论依据。研究目的研究不同化学物对大鼠GST-P基因表达的作用机理，筛选与大鼠GST-P基因强增强子元件GPEI相互作用的调控因子，探讨GST-P基因表达的调控机制及其与化学致癌的关系，为化学致癌机理的多样性、复杂性及其综合治疗和预防提供理论依据。方法和结果 1、化学物对大鼠GST-P基因表达的影响及机理的研究采用基因诱导实验、共转染报告质粒瞬时表达实验、电泳迁移率变更分析实验（EMSA）和分子杂交实验探讨3种化学物诱导GST-P基因表达的机理。结果表明，TPA（佛波酯）、GMA（甲基丙烯酸环氧丙酯）使GST-P mRNA增加，并通过GPEI增强子促进GST-P基因的表达；而H2O2通过GPEII增强子介导的诱导

关键词：增强子元件化学物阳性克隆基因转录调控酵母单杂交体系 GST 博士生 TPA 核心序列插入片段癌变过程共转染反式作用因子半位点

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

采用智能方法的可变剪接调控机制与相关疾病研究

采用智能方法的可变剪接调控机制与相关疾病研究

引用

作者：吕俊杰哈尔滨工程大学

学位级别：博士

可变剪接是调控基因表达的关键机制，它使得一种编码蛋白质的基因可以产生多种转录变体，丰富了遗传信息的应用，可变剪接的异常会导致遗传疾病甚至癌症的发生。本论文在分析可变剪接调控机制与相关疾病研究现状以及存在的问题的基础上... 详细信息

可变剪接是调控基因表达的关键机制，它使得一种编码蛋白质的基因可以产生多种转录变体，丰富了遗传信息的应用，可变剪接的异常会导致遗传疾病甚至癌症的发生。本论文在分析可变剪接调控机制与相关疾病研究现状以及存在的问题的基础上，基于不同的数据源，设计不同的生物信息学方法对可变剪接调控机制与疾病的相关性进行分析和研究。研究主要从以下几个方面进行：组织特异性可变剪接与疾病的研究。不同组织中特有的可变剪接模式称为组织特异性可变剪接。论文以睾丸及睾丸癌组织为研究对象，基于EST序列数据，设计了一种识别模型，在全转录组范围内预测睾丸及睾丸癌组织特异性可变剪接事件，并进一步对这些识别出的剪接模式进行研究，分析这些剪接模式的核酸倾向性，染色体偏好性，以及与睾丸组织疾病之间的关系。利用所提出的方法，基于GeneBank中的dbEST数据库，哺乳动物EST文库，以及开放阅读框文库的数据，成功预测出具有睾丸及睾丸癌组织特异性的可变剪接模式。物种特异性可变剪接与疾病的研究。可变剪接在不同的物种中有着不同的剪接模式，其致病机理也有所不同。论文设计了一种研究物种特异性可变剪接与疾病相关性的生物信息学框架。从各个角度研究物种特异性可变剪接的特点。首先，对人类在小鼠和狗基因组中的保守性剪接模式进行识别，从而确定出具有物种特异性的剪接模式，然后对这些剪接模式进行多方面的分析研究，主要包括可变外显子，可变剪接位点的保守性分析，剪接位点功能倾向性的分析，以及剪接位点的分布等。应用该生物信息学框架，成功预测了人类特异性可变剪接的保守模式，并分析了这些模式的特点；应用Fisher检验方法，对人类具有物种特异性可变剪接的模式与相关疾病数据库进行检验，结果表明，物种特异性可变剪接与疾病密切相关。 RNA-蛋白质结合区域预测及其与疾病的相关性。RNA-蛋白质调控基因在后转录过程中的众多关键过程。为研究RNA-蛋白质结合区域的特性及其与相关疾病之间的关系。论文提出一种基于HMM的预测方法，对SFRS1蛋白质的结合区域进行从头预测。方法中考虑到RNA二级结构对结合位点的影响，将序列信息与结构信息结合起来对建立的HMM进行训练，应用训练好的HMM对RNA-蛋白质结合位点进行预测；然后应用贝叶斯网络对参与RNA-蛋白质结合区域的可变剪接事件进行预测，以盒式外显子为例，预测参与剪接调控的盒式外显子数目，方法中考虑到结合位点与剪接位点之间距离的远近对结合位点有影响，在构建贝叶斯网络时将距离因素考虑进来；最后对RNA-蛋白质结合区域的点突变与疾病数据库进行搜索，找出二者之间的相关性。通过对SFRS1蛋白质的结合序列的测试表明，HMM方法能准确预测出蛋白质结合RNA的区域，其准确率高于现有的预测方法。以盒式外显子为例，成功预测出119个参与调控RNA-蛋白质结合区域可变剪接的盒式外显子。进一步与疾病数据库的研究发现：结合区域的异常与疾病密切相关。癌症特异性可变剪接。可变剪接是癌症表达的天然来源，某些特定剪接模式的改变与癌症具有很强的相关性。论文基于外显子芯片数据，对癌症特异性剪接进行研究，首先，设计外显子芯片数据处理的方法，检测剪接事件；然后建立一种癌症特异性可变剪接模体表达水平的预测模型，预测出具有癌症特异性的剪接事件；通过对结肠癌组织与正常结肠组织的实验，发现许多具有结肠癌特异性的剪接变体，其中一些已经得到注释与癌症相关，大部分识别出的剪接变体影响细胞组织，细胞间质或者综合信号，可能参与细胞迁移与入侵。结果表明，利用外显子芯片技术，结合剪接模体表达水平预测模型对癌症特异性剪接进行研究，不仅可以在基因组范围内识别出不同的可变剪接变体，同时可以提供更为灵活的，更为可靠的基因表达分析。

关键词：可变剪接顺式作用元件反式作用因子隐马尔可夫模型贝叶斯网络

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

应用体内足迹法研究小鼠β-珠蛋白基因簇重要调控元件上的DNA-蛋白质间的相互作用

应用体内足迹法研究小鼠β-珠蛋白基因簇重要调控元件上的DNA-蛋...

引用

作者：纪新军中国协和医科大学

学位级别：博士

β-珠蛋白基因簇是研究真核基因表达调控的良好模型，在个体发生中β-珠蛋白基因簇表现为从5′到3′依次表达，具有高度的红系组织特异性和发育阶段特异性，虽然α和β两个珠蛋白基因簇不在同一条染色体上，但两类珠蛋白基因表达的终产... 详细信息

β-珠蛋白基因簇是研究真核基因表达调控的良好模型，在个体发生中β-珠蛋白基因簇表现为从5′到3′依次表达，具有高度的红系组织特异性和发育阶段特异性，虽然α和β两个珠蛋白基因簇不在同一条染色体上，但两类珠蛋白基因表达的终产物始终维持平衡。基因表达是由众多顺式作用元件和反式作用因子相互作用调控的。β-珠蛋白基因的正确表达主要依赖于两种类型的调控元件：位于基因簇5′端的位点控制区(Locus Control Region，LCR)以及各珠蛋白基因的启动子等近端调控序列。LCR由4个DNase 历高敏位点(5'HS1-5'HS4)构成，每个HS的活性又都集中在核心序列上。研究发现，LCR的HSs以及单个基因的启动子上，都含有红系特异和公共表达的反式作用因子的结合位点，LCR及其HSs的形成、启动子上转录装置的建立、LCR与下游基因调控元件间的相互联系(如：Looping)等，都需要这些顺式作用元件(DNA)与相关反式作用因子(蛋白质)间的相互作用来介导。因此，研究DNA-蛋白质之间的相互作用对于阐明LCR的作用机制、珠蛋白基因表达调控的开关机制具有重要意义。体内足迹法(In Vivo Footprinting)是一种研究DNA-蛋白质相互作用的方法，它能真实反映体内蛋白．DNA相互作用的情况，而且可以检测体内的DNA构象的变化，连接介导的聚合酶链反应(Ligation-Mediated polymerase chain Reaction，LM-PCR)的发明，使得体内足迹研究的敏感性和特异性大大提高，有力地促进了体内足迹技术在真核基因表达调控研究方面的应用。本文应用连接介导的聚合酶链反应及体内足迹法研究了诱导前后的MEL细胞、处于不同发育时期的红系组织、药物处理后的成年造血组织中β珠蛋白基因启动子及LCR-HS2上的DNA-蛋白质之间的相互作用。 (1)标准条件下培养MEL细胞，经2％DMSO诱导分化三天，收集状态良好的细胞，悬浮于无血清DMEM培养基中，调整细胞浓度为5×10～7／ml。 (2)正常健康昆明小鼠交配，待胚胎发育至14天时，处死怀孕母鼠，取胎鼠肝脏，用另一组成年小鼠制备骨髓；然后应用40％-70％Percol1梯

关键词：珠蛋白基因基因启动子体内足迹法 DNA 反式作用因子

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

人同源盒基因NKX3.1表达调控的研究

人同源盒基因NKX3.1表达调控的研究

引用

作者：于春晓山东大学

学位级别：博士

前列腺癌是男性肿瘤疾病中发病率最高的恶性肿瘤之一,在发达国家中其死亡率高居第二位,在我国其发病率也有逐年增高的趋势。前列腺癌的发生,发展和转移与NKX3.1密切相关。NKX3.1是前列腺特异表达的、受雄激素调节的同源盒基因,在前列腺... 详细信息

前列腺癌是男性肿瘤疾病中发病率最高的恶性肿瘤之一,在发达国家中其死亡率高居第二位,在我国其发病率也有逐年增高的趋势。前列腺癌的发生,发展和转移与NKX3.1密切相关。NKX3.1是前列腺特异表达的、受雄激素调节的同源盒基因,在前列腺胚胎发育、上皮分化及肿瘤发生发展中起重要作用。在胚胎形成过程中,NKX3.1的表达可作为前列腺上皮分化的重要标志。NKX3.1基因敲除的老鼠显示前列腺上皮发育不良、腺管形态异常和蛋白分泌障碍,表明NKX3.1对于前列腺的正常发育及维持前列腺上皮的正常分化是必需的。而且NKX3.1基因敲除鼠随着年龄的增长,出现了类似于人前列腺上皮内瘤的病理变化,表明NKX3.1缺失可能与前列腺癌的起始有关。人同源盒基因NKX3.1位于染色体8p21,包括两个外显子,一个内含子,较短的5′-非翻译区和较长的3′-非翻译区。约80%的前列腺肿瘤中存在该区域的杂合缺失,表明NKX3.1在前列腺癌中可能作为抑癌基因发挥作用。但也有研究显示不同的结果,有研究表明在前列腺癌标本中存在NKX3.1过表达情况,同时比较转移灶与原发灶的NKX3.1的表达情况,发现转移灶中NKX3.1过表达明显高于原发灶,说明NKX3.1过表达可能与前列腺癌的侵袭性有关。这表明NKX3.1与前列腺癌的发生和发展密切相关,但其作用可能是复杂多变的。目前关于人同源盒基因NKX3.1在前列腺发育和前列腺癌发生发展中的作用及其基因表达调控机制尚不完全清楚,有待于进一步研究探讨。本课题对人同源盒基因NKX3.1的表达调控进行了初步研究。研究了人同源盒基因NKX3.1内含子及10段5′上游10 kb调控区的调控元件,并未发现明显的雄激素反应元件和组织特异性增强区域,在5′上游调控区-6548～-6505 bp发现一个功能性的正调控区并对该作用元件及结合蛋白做了初步鉴定。研究发现Sp1过表达对人同源盒基因NKX3.1有增强作用,并在NKX3.1启动子区鉴定了其功能性元件。同时本课题研究了抑癌基因p53及姜黄素对人同源盒基因NKX3.1的作用及其机制,结果表明p53及姜黄素可以通过抑制雄激素受体（androgenreceptor,AR）表达及其DNA结合活性从而抑制AR对人同源盒基因NKX3.1的转录激活作用。这些为进一步阐明NKX3.1基因表达调控机制奠定了基础,并为了解其在前列腺发育及肿瘤发生发展中的作用提供了新的思路。第一部分人同源盒基因NKX3.1内含子及5′上游10 kb调控区功能元件的鉴定研究目的:分段克隆人同源盒NKX3.1基因5′上游10kb调控区域及内含子,检测其对启动子活性的影响,鉴定其调控元件及其相互作用的蛋白因子,检测雄激素反应元件和组织特异性增强子,为进一步研究人同源盒NKX3.1基因表达调控机制及DNA顺式元件与其结合蛋白的相互作用机制奠定基础。研究方法和结果:1.本实验室前期工作已经证明在NKX3.1基因5′上游-212～+48 bp存在基本启动子活性。根据基因数据库中的NKX3.1基因序列,利用PCR技术构建521 bp启动子（-473～+48 bp）-荧光素酶报道基因质粒（pGL3-521）。进一步利用PCR技术构建内含子-521 bp启动子-荧光素酶报道基因质粒（pGL3in-521）;并分10段（1至10）分别构建NKX3.1基因5′上游调控区-521 bp启动子-荧光素酶报道基因质粒（pGL31-521至pGL310-521）,每个片段重叠200 bp左右。经酶切和测序鉴定,构建的重组质粒结果正确。2.利用脂质体将各重组质粒和对照pGL3-521质粒分别转染雄激素依赖性前列腺癌细胞株LNCaP,检测荧光素酶报道基因的表达活性,观察内含子及5′上游10 kb调控区对NKX3.1启动子活性的影响。结果显示:NKX3.1基因5′上游调控区第7号片段（-7681～-6483bp）可以明显升高NKX3.1启动子活性,表明此区域可能存在正调控元件,其他各区域未发现明显的正调控作用。***3.1是受雄激素调节的基因,为了观察内含子及5′上游10 kb调控区是否受雄激素调节,用雄激素类似物R1881分别处理pGL3-521、pGL3in-521、pGL31-521至pCL310-521转染的雄激素依赖性前列腺癌细胞LNCaP,检测荧光素酶活性,同时转染受雄激素调节的含前列腺特异性抗原（PSA）上游6 kb调控区的质粒pGL3-PSA作为阳性对照。结果显示:LNCaP细胞转染质粒后,加R1881处理24 h,PSA的启动子活性明显增强,而NKX3.1的内含子及10段5′上游10 kb调控区没有明显的雄激素反应性。***3.1是前列腺特异表达的基因,为检测第7号片段是否含前列腺特异性的增强元

关键词：人同源盒基因NKX3.1 基因表达调控顺式作用元件反式作用因子 Sp1 p53 姜黄素雄激素受体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

LcDREB2选择性剪接及表达调控机制的研究

LcDREB2选择性剪接及表达调控机制的研究

引用

作者：刘祝江中国科学院大学

学位级别：博士

选择性剪接(alternative splicing，AS)是RNA转录后修饰的一种机制，是一个基因从前体mRNA上选择性的移除或保留特定的外显子或内含子，编码产生多个不同的转录本的过程。选择性剪接的过程是被严格调控的，通过顺式作用元件和反式作用... 详细信息

选择性剪接(alternative splicing，AS)是RNA转录后修饰的一种机制，是一个基因从前体mRNA上选择性的移除或保留特定的外显子或内含子，编码产生多个不同的转录本的过程。选择性剪接的过程是被严格调控的，通过顺式作用元件和反式作用因子的互作实现，极易受到遗传和突变的影响。选择性剪接现象在多细胞生物中普遍存在，选择性剪接机制在转录调控中备受关注，但是在植物中的研究很少。DREB(dehydration responsive element binding protein)是一类植物特有的转录因子，通过调控下游基因的表达实现抗逆功能。本实验室之前的研究结果显示，从羊草中克隆到的LcDREB2基因能够产生3种选择性剪接产物并且具有不同的表达模式和功能。本研究深入解析了LcDREB2选择性剪接和表达调控机制，取得的主要研究结果如下:　　1.鉴定出5个顺式元件:在LcDREB2基因的保守序列上设计突变，包括碱基序列缺失和颠换，构建了28个LcDREB的突变体。根据LcDREB2突变体改变3种选择性剪接产物的情况，鉴定出影响LcDREB2基因选择性剪接的顺式元件5个，根据其调控选择性剪接的功能将其分为3种类型:外显子剪接增强子2个，内含子剪接增强子1个，内含子剪接弱化子2个。　　2.反式作用因子的鉴定:以上述确定的5个顺式元件序列设计RNA探针，分别与分离纯化的SR(serine/argininc rich)蛋白在体外进行杂交互作实验，通过EMSA实验确定了特异结合顺式元件序列的7个反式作用因子，包括水稻中的RSZp21b，SCL25，SCL30b，RSp33，RSZ36和拟南芥中的RSZ32和RSZp22。　　***2选择性剪接的进化分析:通过对DREB亚家族系统进化分析表明，LcDREB2和其他禾本科植物中含有3个内含子的DREB基因均归类于DREB亚家族的A-2组的第2亚组，此亚组的所有禾本科DREB2直系同源基因都能产生3个不同的转录产物，具有相同的选择性剪接形式。在此亚组的另外一支，LcDREB2在禾本科中的旁系同源基因只有1个内含子，不具备选择性剪接。另外，LcDREB2在十字花科中的同源基因没有内含子，也不具备选择性剪接现象。　　***2基因亚家族进化策略:通过对LcDREB2基因的进化过程和基因表达模式分析发现，虽然基因数量不一致，LcDREB2的直系同源基因在禾本科植物中转录产物的数量与十字花科植物中的同源基因的数量基本一致。此分析结果说明，DREB亚家族在进化过程中同时采用了选择性剪接和基因复制的策略，这个现象是DREB亚家族在不同的物种类群中的环境适应性进化的结果。　　总之，本论文的研究通过确定LcDREB2基因上的顺式元件和特异结合并调控其剪接的SR蛋白，从RNA和蛋白质互作的角度阐明了LcDREB2的选择性剪接机制，并证明在禾本科和十字花科植物中LcDREB2基因的异源表达和选择性剪接机制存在明显差异。更重要的是，我们的研究首次提供了证据证明，不同植物类群中的同源基因通过选择性剪接和基因组复制同步进行实现了表达产物数量的一致。这些结果对于植物基因家族选择性剪接机制和适应性进化的系统研究有重要意义。

关键词：植物遗传学选择性剪接机制顺式元件基因表达反式作用因子

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

人胎儿珠蛋白基因在成人期持续表达机制的研究

人胎儿珠蛋白基因在成人期持续表达机制的研究

引用

作者：黄小东中国协和医科大学

学位级别：博士

人β-珠蛋白基因簇包含五个功能基因，按5′-ε-Gγ-Aγ-δ-β-3′顺序排列。在个体发育过程中，这些基因的表达经历两个开关，即发生在妊娠早期的由胚胎（ε）向胎儿（Gγ和Aγ）以及发生在围产期的由胎儿向成人（δ和β）的开关。目... 详细信息

人β-珠蛋白基因簇包含五个功能基因，按5′-ε-Gγ-Aγ-δ-β-3′顺序排列。在个体发育过程中，这些基因的表达经历两个开关，即发生在妊娠早期的由胚胎（ε）向胎儿（Gγ和Aγ）以及发生在围产期的由胎儿向成人（δ和β）的开关。目前，血红蛋白开关的分子机制尚不十分清楚。人γ-珠蛋白基因主要在胎肝红细胞中表达，在成人红细胞中γ-珠蛋白链不足β-类珠蛋白链总量的1％。然而，β-珠蛋白基因簇内天然发生的缺失突变或点突变可能影响胎儿到成人的开关，导致γ-珠蛋白基因在成人期持续表达。这些天然突变体为血红蛋白开关机制的研究提供了很好的分子模型。另外，胎儿血红蛋白（HbF，α2γ2）的升高能够减轻由于β-珠蛋白基因表达异常所致的遗传病（如β-地中海贫血和镰刀型细胞贫血）的临床症状。所以，对这些天然突变体的研究不仅有助于揭示血红蛋白开关机制，而且可能为β-地中海贫血和镰刀型细胞贫血的基因治疗提供线索。我们鉴别到一例新的AγHPFH杂合子，其具有高水平的HbF（23.8％），主要为Aγ型(Aγ／（Gγ+Aγ）=83％)，具有正常水平的HbA2（α2δ2，3.0％），无明显贫血症状（Hb=11.5g／dl，MCV=84.1fl，MCH=26.1 pg）。限制性内切酶作图分析未发现其β-珠蛋白基因簇内存在DNA重排和缺失。对经PCR获得的Gγ-和Aγ-珠蛋白基因启动子区进行的直接测序分析证明Gγ-珠蛋白基因启动子顺序正常，但Aγ-珠蛋白基因启动子存在新的-173 T→C突变。进一步将扩增的Aγ-珠蛋白基因启动子重组到pGEM-4Z载体中，测序证明该个体确实为Aγ-珠蛋白基因启动子-173 T→C突变杂合子。利用电泳迁移改变分析，我们研究了此点突变对反式作用因子与启动子结合的影响，发现-173 T→C突变使反式作用因子GATA-1与启动子片段（-201～-158）的结合降低96％（P＜0.01），使Oct-1因子的结合降低55％（P＜0.05）。利用荧光素酶报告基因及瞬时转染分析，进一步研究了此点突变对Aγ-珠蛋白基因启动子活性的影响，发现在MELGM979细胞中突变启动子的活性为正常启动子的2倍（P＜0.05），而在K562和Hela细胞中突变和正常启动子

关键词：珠蛋白基因 DNA 反式作用因子启动子活性成人期人胎儿

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：