检索结果-内蒙古大学图书馆

含HIV-1 Tat基因重组反转录病毒表达载体构建与表达Tat蛋白功能检测

中华微生物学和免疫学杂志 2003年第9期23卷 691-695页

作者：卢春黄丽曾怡南京医科大学微生物学与免疫学系 210029

目的　构建含HIV 1Tat基因重组反转录病毒表达载体及评价表达Tat蛋白的功能。方法　使用HindⅢ将HIV 1Tat1 0 1 蛋白编码基因从pEV质粒中切出 ,插入到表达质粒LZRSpBMN Z中 ,构建成重组反转录病毒表达质粒LZRS Tat1 0 1 。采用磷酸钙转... 详细信息

目的　构建含HIV 1Tat基因重组反转录病毒表达载体及评价表达Tat蛋白的功能。方法　使用HindⅢ将HIV 1Tat1 0 1 蛋白编码基因从pEV质粒中切出 ,插入到表达质粒LZRSpBMN Z中 ,构建成重组反转录病毒表达质粒LZRS Tat1 0 1 。采用磷酸钙转染法将重组质粒LZRS Tat1 0 1 转染进含反转录病毒env、gal和pol编码基因的包装细胞phoenix(ФNX)中 ,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞系。免疫组化 (IHC)染色检查Tat在临时转染和稳定转染ФNX细胞中的表达水平。收集临时转染和稳定转染包装细胞分泌的病毒上清 ,并分别感染 2 93细胞 ,Westernblot检测Tat在 2 93中表达。与此同时 ,收集感染 2 93细胞培养上清 ,加入到HL3T1细胞 (HeLa HIV 1 LTR CAT报告基因 )中 ,共培养 72h后收集细胞 ,提取蛋白作CAT活性检测。结果　①含Tat1 0 1 基因重组反转录病毒表达质粒转染包装细胞后 ,Tat在临时转染ФNX中表达水平显著高于在稳定转染中的水平 ;②临时转染病毒感染 2 93细胞 ,Tat在感染细胞中得到了表达 ,且分泌至上清中的Tat蛋白能够激活靶细胞HL3T1中HIV 1的LTR启动子 ,使得其下游的CAT基因得到表达。结论　重组LZRS Tat1 0 1 反转录病毒能够在其感染靶细胞中表达Tat蛋白 ,且表达蛋白具有转录激活功能。

关键词： HIV-1Tat 基因重组反转录病毒表达载体表达 Tat蛋白检测转录激活

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一个新的大鼠APP基因的发现及其全长cDNA反转录病毒表达载体的构建

一个新的大鼠APP基因的发现及其全长cDNA反转录病毒表达载体的构建

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作者：冯俊杰南开大学

学位级别：硕士

淀粉样沉淀前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)基因在阿尔茨海默氏病病理发生和发展中起中心作用,然而对于APP在细胞中的正常生理功能目前仍不清楚.在过去的研究中我们发现,Rat6大鼠胚胎成纤维细胞中的APP表达受到抑制,细胞的形... 详细信息

淀粉样沉淀前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)基因在阿尔茨海默氏病病理发生和发展中起中心作用,然而对于APP在细胞中的正常生理功能目前仍不清楚.在过去的研究中我们发现,Rat6大鼠胚胎成纤维细胞中的APP表达受到抑制,细胞的形态和分裂出现明显的转化趋势.这表明,APP可能参与了细胞生长和增殖的调控.为进一步考察APP的过表达对细胞表型的影响,我们需要构建能够表达大鼠APP全长cDNA的真核表达载体.利用该表达载体,我们能够顺利地开展APP的过表达对Rat6大鼠胚胎成纤维细胞表型影响的研究,这对于我们阐明APP与细胞癌变的关系,理解APP在细胞中的正常功能,以及APP在阿尔莎海默氏病致病机理中的作用都有着重要意义.

关键词：淀粉样沉淀前体蛋白细胞转化 RT-PCR 反转录病毒表达载体

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含HIV-1 Tat基因重组反转录病毒表达载体构建与表达Tat蛋白功能检测

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中华放射医学与防护杂志 2003年第9期 695-695页

目的构建含HIV-1 Tat基因重组反转录病毒表达载体及评价表达Tat蛋白的功能. 方法使用HindⅢ将HIV-1 Tat101蛋白编码基因从pEV质粒中切出,插入到表达质粒LZRSpBMN-Z中,构建成重组反转录病毒表达质粒LZRS-Tat101.采用磷酸钙转染法将重组质... 详细信息

目的构建含HIV-1 Tat基因重组反转录病毒表达载体及评价表达Tat蛋白的功能. 方法使用HindⅢ将HIV-1 Tat101蛋白编码基因从pEV质粒中切出,插入到表达质粒LZRSpBMN-Z中,构建成重组反转录病毒表达质粒LZRS-Tat101.采用磷酸钙转染法将重组质粒LZRS-Tat101转染进含反转录病毒env、gal和pol编码基因的包装细胞phoenix(ФNX)中,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞系.免疫组化(IHC)染色检查Tat在临时转染和稳定转染ФNX细胞中的表达水平.收集临时转染和稳定转染包装细胞分泌的病毒上清,并分别感染293细胞,Western blot检测Tat在293中表达.与此同时,收集感染293细胞培养上清,加入到HL3T1细胞(HeLa-HIV-1-LTR/CAT报告基因)中,共培养72*!h后收集细胞,提取蛋白作CAT活性检测. 结果①含Tat101基因重组反转录病毒表达质粒转染包装细胞后,Tat在临时转染ФNX中表达水平显著高于在稳定转染中的水平;②临时转染病毒感染293细胞,Tat在感染细胞中得到了表达,且分泌至上清中的Tat蛋白能够激活靶细胞HL3T1中HIV-1的LTR启动子,使得其下游的CAT基因得到表达. 结论重组LZRS-Tat101反转录病毒能够在其感染靶细胞中表达Tat蛋白,且表达蛋白具有转录激活功能.

关键词： HIV-1 Tat 反转录病毒表达载体转录激活

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反转录病毒介导人骨形态发生蛋白2基因修饰骨髓基质细胞的体内成骨效应

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中国临床康复 2005年第26期9卷 51-53,i0002页

作者：蔡善保杨民马庆军余希杰党耕町王申五马大龙北京大学第三医院骨科北京市100083 北京大学人民医院中心实验室北京市100083 北京大学人类疾病基因研究中心北京市100083

目的:构建人骨形态发生蛋白2反转录病毒表达载体,探讨以转人骨形态发生蛋白2基因骨髓基质细胞为种子细胞的组织工程骨修复骨缺损的可行性。方法:实验于2001-05/2003-01在北京大学医学部完成。①采用DNA重组技术,将骨形态发生蛋白2cDNA... 详细信息

目的:构建人骨形态发生蛋白2反转录病毒表达载体,探讨以转人骨形态发生蛋白2基因骨髓基质细胞为种子细胞的组织工程骨修复骨缺损的可行性。方法:实验于2001-05/2003-01在北京大学医学部完成。①采用DNA重组技术,将骨形态发生蛋白2cDNA克隆到pLXSN反转录病毒质粒,经酶切及测序鉴定正确后,包装成为pLXSN/BMP2重组反转录病毒。取15d龄BALB/c系小鼠5只用于骨髓基质细胞的提取。将重组病毒感染小鼠骨髓基质细胞,经筛选后,聚合酶链反应鉴定人骨形态发生蛋白2cDNA在转基因骨髓基质细胞中的整合情况。②转基因骨髓基质细胞的骨形态发生蛋白2表达情况采用免疫印渍杂交和核糖核酸印渍杂交技术检测。转基因骨髓基质细胞碱性磷酸酶的表达采用钙-钴法染色检测,用以评定表达骨形态发生蛋白2的生物活性。③取6周龄BALB/c小鼠6只,将转基因骨髓基质细胞与羟基磷灰石构建人工骨植于小鼠骨骼肌内,体内成骨情况予组织学观察评估。结果:①pLXSN/BMP2质粒的鉴定结果:经酶切及DNA测序证实重组pLXSN/BMP2序列正确。②重组病毒的滴度测定结果:包装的病毒滴度为(6～8)×105cfu/mL。③基因整合及表达的分析:聚合酶链反应证实转基因骨髓基质细胞基因组中有骨形态发生蛋白2cDNA整合;核糖核酸印渍杂交和蛋白免疫印渍杂交证实转基因骨髓基质细胞稳定表达人骨形态发生蛋白2;钙-钴法染色证实转基因骨髓基质细胞碱性磷酸酶阳性。④小鼠体内成骨情况:甲苯胺蓝染色的组织切片镜下观察显示转骨形态发生蛋白2基因骨髓基质细胞构成人工骨可见少量软骨细胞及软骨基质存在,软骨细胞呈巢状分布。结论:成功地构建了pLXSN-BMP2重组反转录病毒载体,该载体不仅有效地表达骨形态发生蛋白2蛋白,表达的骨形态发生蛋白2能够诱导未分化的骨髓基质细胞向成骨细胞方向分化,且在体内肌肉环境下能促进成骨。

关键词：组织工程骨形态发生蛋白质类基因反转录病毒骨髓细胞转基因骨髓基质细胞反转录病毒表达载体骨形态发生蛋白2 体内成骨基因修饰

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阿尔茨海默氏病相关基因APP与细胞癌变关系的研究

阿尔茨海默氏病相关基因APP与细胞癌变关系的研究

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中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议

作者：冯俊杰郑坚瑜南开大学分子生物学研究所南开大学分子生物学研究所

Alzheimer病(Alzheimer’s Disease,AD)是一种老年痴呆性疾病.APP即淀粉样前体蛋白(amyloid pre-cursor protein)是目前已经确认的AD相关基因.APP是一种单跨膜糖蛋白,其结构类似于细胞膜表面受体.关于APP的正常功能,目前仍处于推测阶段... 详细信息

Alzheimer病(Alzheimer’s Disease,AD)是一种老年痴呆性疾病.APP即淀粉样前体蛋白(amyloid pre-cursor protein)是目前已经确认的AD相关基因.APP是一种单跨膜糖蛋白,其结构类似于细胞膜表面受体.关于APP的正常功能,目前仍处于推测阶段,据认为与促进细胞粘附、维护突触膜的稳定性及参与中枢神经系统免疫反应有关.

关键词：阿尔茨海默氏病细胞癌变反转录病毒表达载体 APP 相关基因

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本期专题：组织工程研究中病毒表达载体的构建①

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中国组织工程研究与临床康复 2011年第28期15卷 5196-5196页

1构建携带增强型绿色荧光蛋白报告基因的重组反转录病毒表达载体pLXSN-Kozak-EGFP及鉴定，见2010年37期6908。2新型骨形态发生蛋白2反转录病毒载体的构建及活性检测．见2010年7期1227。

关键词：反转录病毒表达载体组织工程绿色荧光蛋白报告基因骨形态发生蛋白2 反转录病毒载体专题活性检测增强型

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