检索结果-内蒙古大学图书馆

生物学教学 2001年第6期26卷 40-42页

作者：张嘉敏华东师范大学生命科学院上海200062

1990年9月14日, 美国国立卫生研究院(NIH)的Micheal ***和French ***研究小组对一名4岁的患腺苷脱氨酶(ADA)缺乏症的女孩进行基因治疗.他们将正常ADA基因利用反转录病毒载体导入女孩淋巴细胞内, 体外培养后回输入她体内, 实验取得圆满成... 详细信息

1990年9月14日, 美国国立卫生研究院(NIH)的Micheal ***和French ***研究小组对一名4岁的患腺苷脱氨酶(ADA)缺乏症的女孩进行基因治疗.他们将正常ADA基因利用反转录病毒载体导入女孩淋巴细胞内, 体外培养后回输入她体内, 实验取得圆满成功.这是人类历史上第一个成功的基因治疗临床实验.

关键词：基因治疗 ADA 女孩人类疾病回输反转录病毒载体正常小组导入输入

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肝再生磷酸酶-1稳定转染肝癌细胞株的建立及其生物学功能

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中华实验外科杂志 2015年第2期32卷 302-305页

作者：金少文王开美徐康徐鋆耀褚忠华王捷中山大学孙逸仙纪念医院肝胆外科广州510120 中山大学孙逸仙纪念医院儿科广州510120 中山大学孙逸仙纪念医院胃肠外科广州510120

目的构建肝再生磷酸酶-1（PRL-1）真核表达载体,建立稳定过表达PRL-1的肝细胞癌Huh7细胞株,研究PRL-1在Huh7细胞中的生物学功能.方法应用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术从人肝癌组织总RNA中扩增PRL-1基因编码区域（CDS）全长序列... 详细信息

目的构建肝再生磷酸酶-1（PRL-1）真核表达载体,建立稳定过表达PRL-1的肝细胞癌Huh7细胞株,研究PRL-1在Huh7细胞中的生物学功能.方法应用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术从人肝癌组织总RNA中扩增PRL-1基因编码区域（CDS）全长序列,与双酶切的pMSCV-PIG质粒连接,经PCR及测序鉴定pMSCV-血细胞凝集素（HA）-PRL-1载体构建成功.用293T细胞包装病毒,并感染Huh7细胞,1 mg/L嘌呤霉素持续加压筛选2周后,荧光显微镜、流式细胞仪、实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）及Western blot检测PRL-1在Huh7中的表达.PRL-1稳定转染细胞株构建成功后,用细胞计数试剂盒（CCK-8）法进行细胞增殖实验、平板克隆形成实验和Transwell侵袭实验研究PRL-1在Huh7细胞中的生物学功能.结果测序结果显示克隆的PRL-1基因CDS序列完全正确,且正确插入到pMSCV-PIG载体中,荧光显微镜及流式细胞仪检测结果显示细胞稳定转染效率在90％以上,FQ-PCR结果显示PRL-1稳定转染组其mRNA表达是对照组的（4.4±1.5）倍（P＜0.05）,Western blot结果显示PRL-1在Huh7细胞中过表达.CCK-8细胞增殖实验结果显示PRL-1促进Huh7细胞增殖（P＜0.01）.PRL-1稳定转染细胞2周克隆形成率为（26.7±1.9）％,明显高于对照组[（7.3±0.8）％,P＜0.01].PRL-1稳定转染组较对照组侵袭细胞数量增多（P＜0.01）.结论 PRL-1肝细胞癌Huh7稳定转染细胞株构建成功,PRL-1促进Huh7细胞增殖、克隆形成及侵袭.

关键词：肝细胞癌肝再生磷酸酶-1 反转录病毒载体生物学功能

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人脐静脉内皮细胞永生化及生物学特性的研究

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中华实验外科杂志 2019年第1期36卷 60-62页

作者：李盛波郑勇斌武汉大学人民医院重症医学科 430060 武汉大学人民医院胃肠外科 430060

目的建立永生化人脐静脉内皮细胞(HUVECs)系并探讨永生化对HUVECs增殖、凋亡及成瘤性影响。方法扩增并提取猿猴病毒40大T抗原(SV40LT)和人端粒酶反转录酶催化亚基(hTERT)基因,反转录病毒载体介导感染HUVECs;筛选2周;聚合酶链反应(PCR)... 详细信息

目的建立永生化人脐静脉内皮细胞(HUVECs)系并探讨永生化对HUVECs增殖、凋亡及成瘤性影响。方法扩增并提取猿猴病毒40大T抗原(SV40LT)和人端粒酶反转录酶催化亚基(hTERT)基因,反转录病毒载体介导感染HUVECs;筛选2周;聚合酶链反应(PCR)扩增后行琼脂糖凝胶电泳成像鉴定目的基因是否转入HUVECs;细胞计数法比较细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡、裸鼠成瘤实验检测细胞恶性转化。结果筛选出抗嘌呤霉素阳性克隆,SV40LT、hTERT成功转入HUVECs;永生化组细胞生长曲线上移,细胞增殖第5、6、7天,SV40LT永生化组及hTERT永生化组与HUVECs组细胞数目差异有统计学意义(P<0.05),hTERT永生化组和HUVECs组细胞数目差异有统计学意义(P<0.05);HUVECs组细胞总凋亡率为(11.2±0.9)%,SV40LT永生化组HUVECs总凋亡率为(3.4±0.4)%,hTERT永生化组HUVECs总凋亡率为(2.8±0.4)%,SV40LT永生化组、hTERT永生化组凋亡率均低于HUVECs组(均P<0.05);两种永生化细胞株不具成瘤性。结论SV40LT、hTERT基因能使HUVECs发生永生化,永生化HUVECs增殖能力增强,凋亡率下降,无恶性转化。

关键词：猿猴病毒40大T抗原人端粒酶反转录酶催化亚基反转录病毒载体人脐静脉内皮细胞永生化

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反转录病毒介导的 HSV-tk/ACV 系统基因治疗的安全性研究

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高技术通讯 1998年第8期8卷 50-55页

作者：卢大儒胡锦王之敏惠国桢李向东邱信芳薛京伦复旦大学遗传学研究所苏州医学院附属第一医院

研究了反转录病毒介导的ＨＳＶ－ｔｋ／ＡＣＶ系统基因治疗脑肿瘤的安全性。首先采用ＰＣＲ、反转录ＰＣＲ（ＲＴ／ＰＣＲ）、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交以及补救分析方法，对ＨＳＶ－ｔｋ病毒包装细胞（ＴＫ／ＶＰＣ）、Ｃ６转ＴＫ基因细胞... 详细信息

研究了反转录病毒介导的ＨＳＶ－ｔｋ／ＡＣＶ系统基因治疗脑肿瘤的安全性。首先采用ＰＣＲ、反转录ＰＣＲ（ＲＴ／ＰＣＲ）、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交以及补救分析方法，对ＨＳＶ－ｔｋ病毒包装细胞（ＴＫ／ＶＰＣ）、Ｃ６转ＴＫ基因细胞和实验动物血液进行了检测。结果表明，所采用的反转录病毒基因转移系统没有产生野生型病毒，是安全的；另一方面，采用细胞接种、Ｘ－ｇａｌ染色、ｔｋ基因的ＰＣＲ和病理切片观察方法，对ＨＳＶ－ｔｋ／ＡＣＶ系统本身的安全性进行了探讨，结果表明ＨＳＶ－ｔｋ／ＡＣＶ系统用于动物基因治疗，ＡＣＶ及其代谢产物没有发现明显的毒副作用和病理改变。反转录病毒介导的ＨＳＶ－ｔｋ／ＡＣＶ系统是安全的。

关键词：脑肿瘤反转录病毒载体基因治疗安全性

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组织工程研究中病毒表达载体的构建

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中国组织工程研究 2011年第28期15卷 5121-5121页

组织工程中的表达载体按构建来源类型可分为质粒和病毒表达载体。其中病毒表达载体包括腺病毒、反转录病毒和慢病毒表达载体。腺病毒是一种线状DNA肿瘤病毒,基因组内有14个基因。反转录病毒是使最常用的一种病毒载体,是由具有感染性的... 详细信息

组织工程中的表达载体按构建来源类型可分为质粒和病毒表达载体。其中病毒表达载体包括腺病毒、反转录病毒和慢病毒表达载体。腺病毒是一种线状DNA肿瘤病毒,基因组内有14个基因。反转录病毒是使最常用的一种病毒载体,是由具有感染性的小白鼠白血病病毒改造而来。慢病毒表达载体是以人类免疫缺陷1型病毒为基础发展起来的基因治疗载体。

关键词：表达载体反转录病毒载体

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组织构建中基因表达载体的构建与表达

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中国组织工程研究 2010年第50期14卷 9377-9377页

1携带低氧诱导因子1αmu和人源化海肾绿色荧光蛋白双基因真核表达载体构建及其在HEK293A细胞中的表达2携RSKA/hIGF-1杂交基因重组质粒的构建及表达

关键词：基因表达载体反转录病毒载体真核表达质粒慢病毒表达载体分子伴侣辅因子组织构建

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病毒——基因治疗中有效的载体系统

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生物学通报 2003年第11期38卷 16-17页

作者：肖英华李雅轩郑继刚首都师范大学生物系北京100037

基因治疗面临的首要问题是如何选择适当的基因载体将具有治疗价值的基因导入靶细胞并使其有效表达 ,以达到治疗疾病的目的。目前基因治疗临床试验中采用的载体大多数为病毒载体。本文主要介绍基因治疗中常用的 4种病毒载体的生物学特性 ... 详细信息

基因治疗面临的首要问题是如何选择适当的基因载体将具有治疗价值的基因导入靶细胞并使其有效表达 ,以达到治疗疾病的目的。目前基因治疗临床试验中采用的载体大多数为病毒载体。本文主要介绍基因治疗中常用的 4种病毒载体的生物学特性 ,以及各个载体在基因治疗中的优缺点。

关键词：基因治疗病毒载体靶细胞腺病毒载体反转录病毒载体

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基因治疗的进展

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中国实用内科杂志 1991年第2期 95-97页

作者：王应,冯树异,王良绪北京医科大学基础医学院北京医科大学基础医学院北京医科大学第三医院 100083 100083

10年前曾有人设想通过正常基因的转移治疗代谢性和其他功能性遗传缺陷疾病,目前有关这方面研究已取得显著进步。基因治疗即以分子遗传学技术为基础,将克隆的正常基因序列导入该基因有缺陷的患者体内,使导入的基因发挥作用而纠正基因缺... 详细信息

10年前曾有人设想通过正常基因的转移治疗代谢性和其他功能性遗传缺陷疾病,目前有关这方面研究已取得显著进步。基因治疗即以分子遗传学技术为基础,将克隆的正常基因序列导入该基因有缺陷的患者体内,使导入的基因发挥作用而纠正基因缺陷。由

关键词：基因治疗遗传缺陷基因转移基因序列基因疗法遗传缺失转基因反转录病毒载体外源基因

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抗口蹄疫转基因猪成纤维细胞系的建立与鉴定

抗口蹄疫转基因猪成纤维细胞系的建立与鉴定

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作者：王婧吉林大学

学位级别：硕士

本研究利用分子生物学、病毒学等技术和手段,为解决目前口蹄疫防控技术方面的不足,筛选了高效抗口蹄疫病毒相关基因三种:猪机体内广谱抗病毒基因—γ干扰素(IFN-γ);抗口蹄疫病毒单链抗体基因(scFv);猪IFN-γ及抗口蹄疫病毒scFv融合基因... 详细信息

本研究利用分子生物学、病毒学等技术和手段,为解决目前口蹄疫防控技术方面的不足,筛选了高效抗口蹄疫病毒相关基因三种:猪机体内广谱抗病毒基因—γ干扰素(IFN-γ);抗口蹄疫病毒单链抗体基因(scFv);猪IFN-γ及抗口蹄疫病毒scFv融合基因,获得了相应的携带抗口蹄疫病毒相关基因的重组反转录病毒载体,建立了相应的抗口蹄疫病毒转基因细胞系,同时为抗口蹄疫病毒转基因动物的研究打下基础。首先,通过反转录病毒系统构建了分别含有猪体内IFN-γ、单链抗体基因scFv和IFN-γ与scFv融合基因,以及对照基因EGFP的重组反转录病毒载体pFB-IFN、pFB-scFv、pFB-Is和pFB-EGFP。然后将重组反转录病毒载体和两个辅助病毒包转载体共转染HEK 293T包装细胞后,收获含有抗口蹄疫病毒基因和对照基因的重组病毒MMLV-IFN、MMLV-scFv、MMLV-Is和MMLV-EGFP。用重组病毒感染供体猪成纤维细胞,这些抗口蹄疫病毒基因和对照基因就随着病毒感染细胞后反转录形成的cDNA整合到细胞染色体基因组中,建立了抗口蹄疫转基因猪成纤维细胞系WMP-IFN、WMP-scFv、WMP-Is和对照基因EGFP的转基因猪成纤维细胞系WMP-EGFP。通过一系列实验研究证明,所获得转基因细胞系性状稳定,形态完整、增殖性能未受影响。本研究采用PCR方法验证抗口蹄疫病毒相关基因在所获得转基因细胞中的整合情况,将A型口蹄疫病毒感染所获得转基因细胞后,通过MTT法比较口蹄疫病毒对阳性细胞和正常细胞的杀伤率,验证细胞的抗口蹄疫功能。结果显,WMP -IFN、WMP- scFv和WMP-Is均能不同程度的抵抗口蹄疫病毒。上述研究为有效结合体细胞克隆技术,培育出抗口蹄疫转基因猪奠定了基础。

关键词：口蹄疫反转录病毒载体转基因猪

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通过反转录病毒侵染建立稳定过表达c-Myc的MIN6细胞系

通过反转录病毒侵染建立稳定过表达c-Myc的MIN6细胞系

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作者：赵冶东北林业大学

学位级别：硕士

c-Myc为原癌基因,为正常组织器官发育过程中所必需。它主要通过特异或非特异性与靶基因DNA结合位点相结合,启动或抑制靶基因的表达,调节细胞生长、分化等生命活动。有研究发现,c-Myc基因在染色体上发生扩增或激活突变会引起细胞增殖加快... 详细信息

c-Myc为原癌基因,为正常组织器官发育过程中所必需。它主要通过特异或非特异性与靶基因DNA结合位点相结合,启动或抑制靶基因的表达,调节细胞生长、分化等生命活动。有研究发现,c-Myc基因在染色体上发生扩增或激活突变会引起细胞增殖加快,细胞侵袭能力加强,导致胰腺肿瘤的发生、发展及恶化；在p细胞中过表达c-Myc也可诱导细胞凋亡,减少β细胞群体数量。为了进一步研究c-Myc对于p细胞的调控机制,本研究通过用293GP细胞包装带有c-Myc基因的逆转录病毒载体,制备假性逆转录病毒,用其侵染胰腺β细胞系MIN6。通过对整合c-Myc基因的MIN6细胞G418筛选、扩增获得稳定过表达c-Myc基因的MIN6细胞克隆,并进一步分析c-Myc过表达引起MIN6细胞的生命活动变化。结果表明,通过抗性药物G418的筛选,获得整合逆转录病毒基因的多个MIN6细胞克隆RT-PCR检测结果表明,这些细胞能稳定过表达c-Myc基因,同时发现,在过表达c-Myc的M1N6细胞中可以检测到mtR-17-92基因簇的表达上调；通过分析过表达c-Myc克隆细胞的生长曲线,我们发现,过表达c-Myc会引起MIN6细胞生长加快,细胞周期变短；通过细胞染色,我们发现某些过表达c-Myc的MIN6细胞凋亡有明显增加。这些研究结果表明,在小鼠β细胞系中稳定过表达c-Myc会诱导MIN6细胞增殖加快、凋亡加剧,其机制有待于进一步的实验探索。

关键词： c-Myc 反转录病毒载体过表达增殖凋亡

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