检索结果-内蒙古大学图书馆

科学通报 2001年第18期46卷 1546-1549,T001页

作者：林丽珠喻红应明耀唐炯周炜赵寿元李昌本复旦大学生命科学学院遗传学研究所

为了阐明TNFa 作用的分子机制, 用抑制消减杂交(SSH)技术和反转录pcr(RT-pcr)方法, 从hTNFa 处理过的小鼠脑血管内皮细胞(bEnd.3)总RNA中扩增并克隆BRI3的cDNA, 构建了BRI3基因与绿色荧光蛋白(EGFP)基因融合的表达载体pEGFP/I3. 转染L92... 详细信息

为了阐明TNFa 作用的分子机制, 用抑制消减杂交(SSH)技术和反转录pcr(RT-pcr)方法, 从hTNFa 处理过的小鼠脑血管内皮细胞(bEnd.3)总RNA中扩增并克隆BRI3的cDNA, 构建了BRI3基因与绿色荧光蛋白(EGFP)基因融合的表达载体pEGFP/I3. 转染L929细胞后, 发现EGFP/I3融合蛋白位于细胞质里. 通过TUNEL法检测和流式细胞仪分析初步表明, 该融合蛋白在L929细胞中的表达能够导致细胞死亡, 而且这种细胞死亡能被L929细胞中表达的Bcl-2蛋白所抑制. 提示BRI3基因的功能可能与TNFa的细胞毒作用有一定的相关性.

关键词：肿瘤坏死因子α BRI3基因融合蛋白细胞死亡基因克隆抑制消减杂交技术反转录pcr方法

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芪合酶基因克隆及其多样性分析

芪合酶基因克隆及其多样性分析

引用

作者：林钟石华南农业大学

学位级别：硕士

长久以来人们就发现含有芪类物质的树木不易腐烂，因此芪类物质被冠以“植物杀菌素”的美誉。现代科学研究表明，以白藜芦醇为代表的芪类化合物具有广泛的生理活性和多种保健功能。芪类物质的研究已成为植物抗病性和植物保健品开发中十... 详细信息

长久以来人们就发现含有芪类物质的树木不易腐烂，因此芪类物质被冠以“植物杀菌素”的美誉。现代科学研究表明，以白藜芦醇为代表的芪类化合物具有广泛的生理活性和多种保健功能。芪类物质的研究已成为植物抗病性和植物保健品开发中十分关注的课题。芪类化合物的生物合成属于次生代谢，是通过苯丙氨酸代谢途径合成的。其中最关键的调节酶是芪合酶。\n 由于芪合酶在植物界中分布的局限性，一般植物体内虽然含有芪合酶的底物，但由于缺少芪合酶而无法合成芪类化合物。因此从芪类化合物高产物种中获取芪合酶基因进行转化具有重要的意义。\n 本试验采用反转录pcr(RT-pcr)的方法，首先从虎杖、何首乌叶片中提取总RNA，利用其中mRNA反转录为cDNA，然后利用芪合酶基因引物，以cDNA为模板扩增出目的基因。回收纯化目的基因，将其克隆到克隆载体pGEM-T Easy上，转化大肠杆菌TOP10，酶切，pcr鉴定后测序。对克隆的序列进行生物信息学分析和鉴定。这将为后期转化实验奠定基础。本文主要研究结果如下：\n 根据已报道的虎杖芪合酶基因序列设计引物，克隆得到的虎杖STS cDNA序列命名为HZcDNA，其中编码序列为1167bp，HZcDNA与Genbank中已有的虎杖芪合酶基因序列相似性为99.2％。序列分析发现，HZcDNA编码388个氨基酸，分子量为42306.6，等电点为5.68，该蛋白序列与已报道的虎杖芪合酶蛋白序列同源性为99.2％，且含有STS家族绝对保守的Cys-His-Asn催化活性中心结构。\n 根据已报道的何首乌芪合酶基因序列设计引物，克隆得到的何首乌STS cDNA序列命名为HScDNA，其中编码序列为1137bp，HScDNA与Genbank中已有的何首乌芪合酶基因序列相似性为98.9％。序列分析发现，HScDNA编码378个氨基酸，分子量为41273.5，等电点为6.02，该蛋白序列与已报道的何首乌蛋白序列同源性为98.1％，且含有STS家族绝对保守的Cys-His-Asn催化活性中心结构。\n 本实验克隆了虎杖、何首乌芪合酶基因，并通过生物信息学分析初步推断HZcDNA，HScDNA编码的芪合酶具有相应的生物学活性。\n 通过对葡萄芪合酶和花生芪合酶等位基因的多样性分析，发现两种植物芪合酶的第一外显子具有较高的突变率且与芪合酶生物功能的相关性较低。且两种植物的芪合酶等位基因之间表现出较丰富的多样性。

关键词：芪合酶基因克隆反转录pcr方法生物信息学

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