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生物工程学报 2024年第7期40卷 2150-2161页

作者：仝力心芦延珍于瑞明张莉萍刘霞王永录杜晓华刘新生甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046

为了研发出一种可同时预防猪德尔塔冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCo V)和猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)两种病毒病的有效二联亚单位疫苗,本研究将PDCo V的受体结合域(receptor binding domain,RBD)与PEDV的RBD基因进行串联,构建至真核表达载体p CDNA3.1(+)中,利用哺乳动物细胞Expi CHO^(TM)表达系统表达纯化出PDCo V-RBD-PEDV-RBD(简写为pd RBD-pe RBD)融合蛋白,以3种不同剂量(10、20和30μg)免疫小鼠,利用ELISA和流式细胞术评估该融合蛋白诱导的体液免疫反应和细胞免疫反应,利用病毒微量中和试验测定免疫小鼠血清对PDCo V或PEDV的中和效价。结果表明,3个不同剂量组在加强免疫后均诱发了高水平的Ig G抗体,不同剂量组间抗体水平没有明显差异,说明10μg的免疫剂量即可达到较好免疫效果。流式细胞术检测结果显示,免疫组的CD3^(+)CD4^(+)T细胞比例显著升高,CD3^(+)CD8^(+)T细胞比例相对较低,这符合亚单位疫苗主导机体产生体液免疫反应的预期。同时,对血清中细胞因子白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)和干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)的含量进行了检测,结果表明该融合蛋白诱导了良好的体液免疫效果,同时还产生了一定的细胞免疫应答。中和试验结果表明,10μg免疫剂量所诱导的抗体即可在体外有效中和PDCo V和PEDV两种病毒,效价分别为1:179.25和1:141.21。上述研究结果表明,pd RBD-pe RBD融合蛋白10μg免疫剂量即可诱导高水平的体液免疫反应,诱导的抗体可同时中和PDCo V和PEDV两种病毒,说明pd RBD-pe RBD融合蛋白有希望成为一种能同时预防PDCo V和PEDV的有效二联亚单位疫苗。

关键词：猪德尔塔冠状病毒猪流行性腹泻病毒受体结构域亚单位疫苗

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猫冠状病毒相关宿主膜蛋白筛选及其作用机制研究

猫冠状病毒相关宿主膜蛋白筛选及其作用机制研究

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作者：孙亚娟甘肃农业大学

学位级别：硕士

猫冠状病毒(Feline Coronavirus,FCoV)为有囊膜的、单股正链RNA病毒。猫传染性腹膜炎病毒(Feline Infectious Peritonitis Virus,FIPV)是FCo V的一种生物型,其引发的猫传染性腹膜炎(FIP),在各年龄段猫群中均发病,是一种慢性、渐进性、... 详细信息

猫冠状病毒(Feline Coronavirus,FCoV)为有囊膜的、单股正链RNA病毒。猫传染性腹膜炎病毒(Feline Infectious Peritonitis Virus,FIPV)是FCo V的一种生物型,其引发的猫传染性腹膜炎(FIP),在各年龄段猫群中均发病,是一种慢性、渐进性、致死性传染病;众所周知,病毒与宿主细胞膜表面的受体结合是感染发生的首要条件,因此筛选与FIPV结合的宿主膜蛋白,鉴定宿主膜蛋白在病毒入侵中的作用,为筛选FIPV功能性受体,阐明该病毒入侵宿主细胞中分子机制提供重要线索,同时也为冠状病毒的疾病防控和疫苗研发提供参考和理论依据。 FIPV依靠病毒囊膜的刺突(S)蛋白与细胞膜表面的受体识别,完成对宿主细胞的吸附和入侵。为了筛选FIPV潜在的未发现的受体,本研究主要针对FIPV S蛋白与细胞膜受体结合的区域(Receptor binding domain,RBD)开展。将FIPV RBD结构域进行原核表达纯化,表达出GST-RBD蛋白接近天然蛋白的复杂构象,并作为诱饵蛋白与FIPV易感组织的膜蛋白进行互作试验,筛选出与RBD蛋白发生相互作用的宿主膜蛋白。具体结果如下: 1.体外表达纯化得到接近天然构象的FIPV RBD蛋白,并提取FIPV易感宿主组织、细胞膜蛋白后与之进行体外互作试验联合质谱测序技术,筛选出与FIPV RBD蛋白存在直接或间接相互作用的宿主膜蛋白有ANXA2、ARL8B、DSC1、FABP6、JUP、MYH9、RAB11A、RAB1A、RAP1A、STOM、TMED10、VDAC2、VIL1作为候选宿主膜蛋白。 2.利用FIPV假病毒进一步筛选出有利于FIPV毒株侵入感染易感细胞CRFK的候选宿主膜蛋白猫源TMED10蛋白。 3.对猫源TMED10蛋白进行生物信息学分析,TMED10是亲水性的双跨膜蛋白,符合膜受体发挥功能的特性。后续深入研究猫源TMED10后,发现候选宿主膜蛋白TMED10通过影响FIPV毒株的吸附过程,进而影响FIPV毒株的增殖。 4.候选宿主膜蛋白TMED10与I II型FIPV受体结构域存在相互作用。可能是FIPV的功能性受体,但其具体的作用机制还有待深入研究。综上所述,本研究成功筛选到多个宿主膜蛋白与FIPV S蛋白RBD区域结合,并且初步揭示了猫源TMED10通过促进II型FIPV吸附过程,进而促进该病毒增殖的机制。本研究为研究FIPV感染宿主的分子机制提供了重要线索。

关键词：猫冠状病毒猫传染性腹膜炎病毒受体结构域 p24蛋白家族

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可结合SARS-CoV-2的纳米抗体及其应用

可结合SARS-CoV-2的纳米抗体及其应用

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作者：吴喜林吴稚伟 215000 江苏省南京市江北新区新锦湖路3-1号中丹生态生命科学产业园一期A座617室

本发明涉及一种可结合SARS‑CoV‑2的多肽，包括3个互补决定区CDR1‑3，CDR1序列为或包括SEQ I D NO:1‑9所示序列之一，CDR2序列为或包括SEQ I D NO:10‑20所示序列之一，CDR3序列为或包括SEQ I D NO:21‑38所示序列之一。本发明针对SARS‑Co... 详细信息

标准号: CN112724248A

本发明涉及一种可结合SARS‑CoV‑2的多肽，包括3个互补决定区CDR1‑3，CDR1序列为或包括SEQ I D NO:1‑9所示序列之一，CDR2序列为或包括SEQ I D NO:10‑20所示序列之一，CDR3序列为或包括SEQ I D NO:21‑38所示序列之一。本发明针对SARS‑CoV‑2进行纳米抗体药物开发，通过免疫羊驼、利用噬菌体库展示纳米单抗的平台技术等，筛选到特异性结合病毒的S蛋白上受体结构域的纳米抗体，鉴定了其CDR序列，构建了人源化的抗体C9NB；利用病毒中和实验评估C9NB在治疗该病毒感染的疗效；同时，利用AAV载体装载了编码C9NB的表达序列。本发明为SARS‑CoV‑2的临床预防、治疗和检测提供了潜在的纳米抗体新药。

关键词：纳米抗体特异性结合病毒互补决定区受体结构域表达序列病毒感染病毒中和平台技术实验评估噬菌体库药物开发潜在的人源化单抗多肽构建抗体治疗装载筛选检测预防展示

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融合蛋白、核酸分子、重组表达载体以及药物组合物

融合蛋白、核酸分子、重组表达载体以及药物组合物

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作者：覃勉慕婷吴克 430000 湖北省武汉市东湖高新区高新大道858号生物医药产业园中小企业园A9-2栋

本申请公开了一种融合蛋白、核酸分子、重组表达载体以及药物组合物，所述融合蛋白包括串联的至少两种SARS CoV 2病毒株的RBD受体结构域，所述融合蛋白、所述核酸分子、所述重组表达载体、所述重组病毒以及所述药物组合物均能应用于制... 详细信息

标准号: CN117986378A

本申请公开了一种融合蛋白、核酸分子、重组表达载体以及药物组合物，所述融合蛋白包括串联的至少两种SARS CoV 2病毒株的RBD受体结构域，所述融合蛋白、所述核酸分子、所述重组表达载体、所述重组病毒以及所述药物组合物均能应用于制备治疗或预防SARS‑CoV‑2病毒感染的疫苗和/或药物，具有免疫效果理想和免疫持久性长的优点。

关键词：融合蛋白重组表达载体药物组合物核酸分子免疫持久性受体结构域病毒感染免疫效果重组病毒制备串联疫苗病毒申请预防治疗应用

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一种编码嵌合受体的多核苷酸

一种编码嵌合受体的多核苷酸

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作者：梁峻豪岛崎纪子萧思文 D·坎帕纳 J·B·特拉格尔 A·L·L·拉泽迪克郭超路旋·郭·布伦 S·S·马斯拉尼新加坡新加坡市

本发明涉及一种编码嵌合受体的多核苷酸，该嵌合受体包含：(a)胞外受体结构域，其中所述胞外受体结构域包含与自然杀伤组2成员D(NKG2D)的天然配体结合的肽，其中与NKG2D的天然配体结合的该肽是NKG2D片段，其中该NKG2D片段由包含SEQ ID N... 详细信息

标准号: CN117363636A

本发明涉及一种编码嵌合受体的多核苷酸，该嵌合受体包含：(a)胞外受体结构域，其中所述胞外受体结构域包含与自然杀伤组2成员D(NKG2D)的天然配体结合的肽，其中与NKG2D的天然配体结合的该肽是NKG2D片段，其中该NKG2D片段由包含SEQ ID NO.2的多核苷酸编码；以及(b)包含跨膜区和胞内信号传导结构域的效应子结构域，其中该胞内信号传导结构域包含CD3ζ，并且其中该CD3ζ由包含SEQ ID NO.13的多核苷酸编码。

关键词：多核苷酸信号传导结构受体结构域天然配体编码嵌合受体嵌合受体自然杀伤结构域跨膜区效应子

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一种编码由细胞表达的嵌合受体的多核苷酸

一种编码由细胞表达的嵌合受体的多核苷酸

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作者：梁峻豪岛崎纪子萧思文 D·坎帕纳 J·B·特拉格尔 A·L·L·拉泽迪克郭超路旋·郭·布伦 S·S·马斯拉尼新加坡新加坡市

本发明涉及一种编码由细胞表达的嵌合受体的多核苷酸，该嵌合受体包含：(a)胞外受体结构域，其中所述胞外受体结构域包含与自然杀伤组2成员D的天然配体结合的肽，其中与NKG2D的天然配体结合的该肽是NKG2D片段，其中该NKG2D片段由包含SEQ... 详细信息

标准号: CN117384929A

本发明涉及一种编码由细胞表达的嵌合受体的多核苷酸，该嵌合受体包含：(a)胞外受体结构域，其中所述胞外受体结构域包含与自然杀伤组2成员D的天然配体结合的肽，其中与NKG2D的天然配体结合的该肽是NKG2D片段，其中该NKG2D片段由包含SEQ ID NO.2的多核苷酸编码，以及(b)包含跨膜区和胞内信号传导结构域的效应子结构域，其中该胞内信号传导结构域包含CD3ζ，其中该CD3ζ由包含SEQ ID NO.13的多核苷酸编码并且其中该细胞还包含膜结合的白细胞介素15(mbIL15)。

关键词：多核苷酸信号传导结构受体结构域嵌合受体天然配体白细胞介素细胞表达自然杀伤结构域跨膜区膜结合效应子细胞

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一种新的NETosis抑制剂TcpC及应用

一种新的NETosis抑制剂TcpC及应用

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作者：潘建平欧茜方佳琪方洁 310015 浙江省杭州市拱墅区湖州街51号

本发明公开了一种新的NETosis抑制剂TcpC及应用。本发明发现TcpC对中性粒细胞胞外捕捉网的形成(NETosis)具有抑制作用，不仅能在体外抑制NETosis，而且能在体内抑制NETosis。本发明研究表明，尿路致病性大肠埃希菌(UPEC)CFT073菌株分泌... 详细信息

标准号: CN111440776A

本发明公开了一种新的NETosis抑制剂TcpC及应用。本发明发现TcpC对中性粒细胞胞外捕捉网的形成(NETosis)具有抑制作用，不仅能在体外抑制NETosis，而且能在体内抑制NETosis。本发明研究表明，尿路致病性大肠埃希菌(UPEC)CFT073菌株分泌的一种含有Toll/白细胞介素1受体结构域蛋白TcpC能增强中性粒细胞NETosis关键蛋白——肽酰基精氨酸脱亚胺酶(PAD4)的泛素化降解，抑制NETosis形成，逃逸中性粒细胞对UPEC的杀伤，利于细菌在机体内的存活和致病。由于NETosis参与恶性肿瘤、自身免疫病和心血管病等多种疾病的发生发展。本发明发现TcpC作为NETosis的一种抑制剂，可用于恶性肿瘤、糖尿病、自身免疫病和心血管病等疾病治疗药物的开发。

关键词：中性粒细胞自身免疫病心血管病抑制剂恶性肿瘤疾病治疗药物白细胞介素大肠埃希菌受体结构域关键蛋白基精氨酸体内抑制体外抑制捕捉网对中性粒细胞致病性杀伤泛素降解菌株可用尿路亚胺肽酰分泌糖尿病存活细菌蛋白发现疾病应用开发研究

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带安全开关的嵌合抗原受体免疫细胞及其制备方法与应用

带安全开关的嵌合抗原受体免疫细胞及其制备方法与应用

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作者：袁顺宗刘兵苏航李庆虹孙磊廖辉阳 100071 北京市丰台区东大街8号

本发明涉及一种带安全开关的嵌合抗原受体(CAR)免疫细胞及其制备方法与应用。携带安全机制的CAR免疫细胞包括编码CAR的核酸序列，该核酸序列结构包括识别肿瘤特异性抗原或肿瘤相关抗原的受体结构域、跨膜-刺激结构域、CD3ζ刺激信号传... 详细信息

标准号: CN106755023A

本发明涉及一种带安全开关的嵌合抗原受体(CAR)免疫细胞及其制备方法与应用。携带安全机制的CAR免疫细胞包括编码CAR的核酸序列，该核酸序列结构包括识别肿瘤特异性抗原或肿瘤相关抗原的受体结构域、跨膜-刺激结构域、CD3ζ刺激信号传导区和自杀基因区。不同免疫效应细胞经扩增和转导携带自杀机制的CAR序列后可获得CAR免疫细胞，通过CAR识别肿瘤细胞相应抗原，CAR免疫细胞可对肿瘤细胞产生特异性杀伤作用。使用时按梯度输注CAR免疫细胞并监测相关细胞因子水平的动态变化，需要时可利用药物启动自杀基因而清除效应免疫细胞，以取得安全性与疗效的最佳平衡，从而在最大程度上保证该技术在临床肿瘤治疗应用上的安全性。

关键词：免疫细胞核酸序列自杀基因特异性杀伤作用肿瘤特异性抗原免疫效应细胞识别肿瘤细胞细胞因子水平效应免疫细胞肿瘤相关抗原受体结构域安全开关刺激信号动态变化临床肿瘤嵌合抗原携带安全治疗应用肿瘤细胞传导区结构域抗原扩增输注转导制备携带自杀刺激监测平衡应用保证

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一种同时靶向人p185和血管内皮生长因子的抗体及其应用

一种同时靶向人p185和血管内皮生长因子的抗体及其应用

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作者：杨洋尹伟 201507 上海市金山区漕泾镇亭卫公路3688号5幢1715室

本发明公开了一种同时靶向人源化p185和VEGF的双特异性抗体及其应用。其由以下四条肽链组成：(1)两条完全相同的抗体轻链，和，(2)两条完全相同的重组抗体重链；其中，所述的抗体轻链是识别p185抗原表位或抗原的抗体的轻链；所述的重组... 详细信息

标准号: CN107602702A

本发明公开了一种同时靶向人源化p185和VEGF的双特异性抗体及其应用。其由以下四条肽链组成：(1)两条完全相同的抗体轻链，和，(2)两条完全相同的重组抗体重链；其中，所述的抗体轻链是识别p185抗原表位或抗原的抗体的轻链；所述的重组抗体重链的氨基酸序列从N端至C端依次为：①识别p185抗原表位或抗原的抗体的轻链序列，②抗体重链恒定区序列，③柔性短肽序列，和，④以下(a)、(b)两种序列中的任何一种：(a)具有识别VEGF抗原表位或抗原的抗VEGF抗体的单链可变区序列(ScFv)，或，(b)具有结合VEGF能力的受体结构域序列。其具有同时结合p185和VEGF的能力，并能够抑制肿瘤细胞的增殖，在T淋巴细胞中会显著促进IFN‑γ表达，是优良的抗肿瘤的抗体药物。

关键词：抗原抗体轻链抗原表位重组抗体抗体重链双特异性抗体抑制肿瘤细胞氨基酸序列单链可变区恒定区序列抗VEGF抗体受体结构域抗体药物抗体重链轻链序列柔性短肽抗肿瘤人源化靶向轻链肽链增殖应用

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粘附受体构建体及其在自然杀伤细胞免疫疗法中的用途

粘附受体构建体及其在自然杀伤细胞免疫疗法中的用途

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作者：朱延松 D·坎帕纳新加坡新加坡

本发明涉及包含表达粘附受体的工程改造的自然杀伤(NK)细胞的组合物，所述粘附受体包含结合靶细胞抗原的胞外受体结构域以及将所述胞外受体结构域锚定在所述NK细胞表面的跨膜结构域。表达这种粘附受体的NK细胞具有增强的靶向特定细胞的... 详细信息

标准号: CN111712516A

本发明涉及包含表达粘附受体的工程改造的自然杀伤(NK)细胞的组合物，所述粘附受体包含结合靶细胞抗原的胞外受体结构域以及将所述胞外受体结构域锚定在所述NK细胞表面的跨膜结构域。表达这种粘附受体的NK细胞具有增强的靶向特定细胞的能力，例如癌细胞或那些受传染病影响的细胞。几个示例性实施例涉及表达粘附受体的NK细胞，所述粘附受体包含靶向Her2或PSMA癌抗原的scFv，当所述NK细胞结合靶细胞时，所述NK细胞表现出细胞毒性和/或细胞溶解效应。

关键词：粘附受体结构域靶细胞细胞跨膜结构域靶向特定工程改造细胞毒性细胞溶解自然杀伤癌抗原抗原癌细胞靶向锚定传染病表现

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