检索结果-内蒙古大学图书馆

农业生物技术学报 2025年第5期 1106-1116页

作者：刘浩文刘峰张天乐李倩刘四芳朱家杰楼宝俞晓平中国计量大学生命科学学院浙江省农业科学院水生生物研究所/全省近岸生物种质资源保护与利用重点实验室浙江海洋大学国家海洋设施养殖工程技术研究中心宁波大学海洋学院

夏季频发的高温以及养殖过程中变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)引起的内脏白点病已成为制约小黄鱼(Larimichthys polyactis)养殖业发展不容忽视的问题，而参与氨基酸代谢的胰蛋白酶(trypsin)可能与小黄鱼面对高温以及变形假... 详细信息

夏季频发的高温以及养殖过程中变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)引起的内脏白点病已成为制约小黄鱼(Larimichthys polyactis)养殖业发展不容忽视的问题，而参与氨基酸代谢的胰蛋白酶(trypsin)可能与小黄鱼面对高温以及变形假单胞菌感染的响应过程存在关联。为探究胰蛋白酶基因在小黄鱼应对高温胁迫和变形假单胞菌感染的响应特征，本研究克隆获得小黄鱼trypsin基因Lp＿try的CDS序列共744 bp，编码247个氨基酸，含有Tryp＿SPc保守结构域。组织定量分析表明Lp＿try基因呈现泛组织表达特性，但是其在消化系统(肠道,肝脏)和循环系统(心脏)中呈现特异性高表达模式。分别对32℃高温胁迫和变形假单胞菌感染后小黄鱼肝脏中Lp＿try表达特征进行分析，发现高温胁迫导致Lp＿try表达量显著增加(P<0.05)，但是随着高温处理时间延长，基因表达量迅速下降；在细菌感染实验中，Lp＿try表达量随着病原菌感染时间的延长呈现出降低-升高-降低的动态变化趋势，说明Lp＿try在小黄鱼遭受高温胁迫和病原菌侵染过程中发挥了一定的调节作用。本研究为深入解析鱼类响应高温胁迫、病原菌感染等过程中的生理调节机制奠定了重要基础。

关键词：小黄鱼胰蛋白酶基因(try) 克隆高温胁迫变形假单胞菌

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变形假单胞菌PtxS蛋白基因的克隆与分析

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中国食品学报 2018年第4期18卷 284-291页

作者：张晓飞王大明孙文敬崔凤杰李运哲齐向辉江苏大学食品与生物工程学院江苏镇江212013 百勤异VC钠有限公司江西德兴334221 江南大学生物工程学院江苏无锡214122

为从变形假单胞菌中克隆2-酮基葡萄糖酸代谢调控蛋白Ptx S的基因,并明确其基本的生物学信息,采用同源比对的方法设计引物,利用TD-PCR技术克隆Ptx S的基因,再用生物信息学方法对其进行分析。试验结果表明:克隆的基因片段全长1 023 bp,其... 详细信息

为从变形假单胞菌中克隆2-酮基葡萄糖酸代谢调控蛋白Ptx S的基因,并明确其基本的生物学信息,采用同源比对的方法设计引物,利用TD-PCR技术克隆Ptx S的基因,再用生物信息学方法对其进行分析。试验结果表明:克隆的基因片段全长1 023 bp,其序列与铜绿假单胞菌、恶臭假单胞菌等假单胞菌的转录调控蛋白Ptx S的基因序列一致性达80%左右,编码由340个氨基酸残基组成的蛋白Ptx S。该蛋白与恶臭假单胞菌Ptx S的同源性最高,氨基酸序列一致性达88%。该蛋白定位于细胞质,无信号肽和跨膜区,为亲水性蛋白。该蛋白的氨基酸序列中含有多个结构域,其二级结构中α螺旋、延伸链、β转角和无规卷曲所占的比例分别为54.41%,13.53%,10.88%和21.18%。本研究为该基因的表达及表达产物的分离纯化提供了理论基础。

关键词：变形假单胞菌 2-酮基葡萄糖酸 PtxS 克隆生物信息

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变形假单胞菌2-酮基葡萄糖酸操纵子的克隆与分析

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中国食品学报 2018年第4期18卷 292-298页

作者：栾方王大明孙文敬崔凤杰齐向辉郭钦张晓飞李运哲江苏大学食品与生物工程学院江苏镇江212013 百勤异VC钠有限公司江西德兴334221 江南大学生物工程学院江苏无锡214122

从变形假单胞菌JUIM01中克隆2-酮基葡萄糖酸操纵子(kgu操纵子),明确其基因组成及生物学信息。根据报道的假单胞菌的基因组信息设计简并引物,采用LA-PCR技术克隆变形假单胞菌的kgu操纵子,对克隆的基因片段进行测序,在此基础上利用生物信... 详细信息

从变形假单胞菌JUIM01中克隆2-酮基葡萄糖酸操纵子(kgu操纵子),明确其基因组成及生物学信息。根据报道的假单胞菌的基因组信息设计简并引物,采用LA-PCR技术克隆变形假单胞菌的kgu操纵子,对克隆的基因片段进行测序,在此基础上利用生物信息学方法进行分析。结果表明:克隆到的基因片段全长为6 130bp,其中包括基因ptx S、kgu E、kgu K、kgu T和kgu D,分别编码2-酮基葡萄糖酸代谢调控蛋白Ptx S、2-酮基葡萄糖酸差向异构酶、2-酮基葡萄糖酸激酶、2-酮基葡萄糖酸转运蛋白和2-酮基葡萄糖酸-6-磷酸还原酶;这些基因与铜绿假单胞菌PAO1的kgu操纵子中相应基因的序列一致性达56.15%~76.74%,然而变形假单胞菌的ptx S很可能并不位于kgu操纵子中。研究首次从变形假单胞菌中克隆到kgu操纵子,并对其进行生物信息学分析,为变形假单胞菌2-酮基葡萄糖酸代谢机理的研究奠定了基础。

关键词：变形假单胞菌 2-酮基葡萄糖酸操纵子克隆生物信息学

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变形假单胞菌2-酮基葡萄糖酸差向异构酶基因的原核表达

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食品科学 2018年第2期39卷 66-72页

作者：孙文敬杨荔栾方何小用崔凤杰王大明钱静亚齐向辉江苏大学食品与生物工程学院江苏镇江212013 百勤异VC钠有限公司江西德兴334221 江南大学生物工程学院江苏无锡214122

采用降落聚合酶链式反应(touchdown polymerase chain reaction,TD-PCR)技术,从2-酮基葡萄糖酸工业生产菌株变形假单胞菌JUIM01中克隆了编码2-酮基葡萄糖酸差向异构酶的基因kgu E。将目的基因与质粒pET-28a(+)重组后转入宿主表达菌中,... 详细信息

采用降落聚合酶链式反应(touchdown polymerase chain reaction,TD-PCR)技术,从2-酮基葡萄糖酸工业生产菌株变形假单胞菌JUIM01中克隆了编码2-酮基葡萄糖酸差向异构酶的基因kgu E。将目的基因与质粒pET-28a(+)重组后转入宿主表达菌中,获得了重组菌株大肠杆菌BL21(DE3)/pET-28a(+)-kgu E。在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷的诱导下,该重组菌株表达了一个分子质量约为30.5 ku的融合蛋白,且该蛋白的Western-blot鉴定结果显示为阳性。生物信息学分析结果表明,该蛋白是一种由256个氨基酸残基组成的分子质量为28.5 ku的亲水性蛋白,与恶臭假单胞菌的2-酮基葡萄糖酸差向异构酶在氨基酸序列上的一致性达78%,定位于细胞质中,其二级结构中α-螺旋、延伸链和无规则卷曲所占的比例分别为40.62%、17.19%和42.19%。本研究结果为变形假单胞菌2-酮基葡萄糖酸差向异构酶的功能研究提供了一定理论支持。

关键词：变形假单胞菌 2-酮基葡萄糖酸差向异构酶 kgu E基因克隆表达生物信息学

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变形假单胞菌2-酮基葡萄糖酸激酶基因的克隆、表达及生物信息学分析

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食品科学 2017年第16期38卷 10-16页

作者：何小用王大明孙文敬崔凤杰钱静亚齐向辉余泗莲江苏大学食品与生物工程学院江苏镇江212013 百勤异VC钠有限公司江西德兴334221 江南大学生物工程学院江苏无锡214122

采用聚合酶链式反应技术,从2-酮基葡萄糖酸工业生产菌株变形假单胞菌JUIM01中克隆2-酮基葡萄糖酸激酶的全长基因kguK,并在此基础上构建了重组菌株大肠杆菌BL21(DE3)/pET-28a(+)-kguK。在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷的诱导下,该重组菌株表... 详细信息

采用聚合酶链式反应技术,从2-酮基葡萄糖酸工业生产菌株变形假单胞菌JUIM01中克隆2-酮基葡萄糖酸激酶的全长基因kguK,并在此基础上构建了重组菌株大肠杆菌BL21(DE3)/pET-28a(+)-kguK。在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷的诱导下,该重组菌株表达了一个特异的分子质量约为36.0 ku融合蛋白,且该蛋白的Western-Blot鉴定结果显示为阳性。生物信息学分析结果表明,该蛋白是一种由305个氨基酸残基组成的亲水性蛋白,定位于细胞质中,存在着与pfkB家族蛋白类似的保守结构域,其二级结构中α-螺旋、延伸链和无规则卷曲所占的比例分别为35.73%、12.79%和51.48%。

关键词：变形假单胞菌 2-酮基葡萄糖酸激酶 kguK基因克隆表达生物信息学

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变形假单胞菌吡咯喹啉醌合成基因簇的克隆与分析

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食品与生物技术学报 2020年第6期39卷 47-54页

作者：王大明孙雷孙文敬崔凤杰龚劲松张晓梅史劲松许正宏江南大学工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122 江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室江苏无锡214122 江苏大学食品与生物工程学院江苏镇江212013 百勤异VC钠有限公司江西德兴334221

从变形假单胞菌JUIM01中克隆到吡咯喹啉醌(PQQ)合成基因簇,阐明了其基因组成和生物学信息。根据已报道的假单胞菌的基因组进行简并引物设计,采用LA-PCR技术克隆变形假单胞菌的PQQ合成基因簇,对克隆的基因片段进行测序并使用生物信息学... 详细信息

从变形假单胞菌JUIM01中克隆到吡咯喹啉醌(PQQ)合成基因簇,阐明了其基因组成和生物学信息。根据已报道的假单胞菌的基因组进行简并引物设计,采用LA-PCR技术克隆变形假单胞菌的PQQ合成基因簇,对克隆的基因片段进行测序并使用生物信息学方法进行综合分析。结果表明:克隆到的基因片段全长为11659 bp,其中包括pqqF、pqqA、pqqB、pqqC、pqqD、pqqE、pqqM、pqqH和pqqI共9个基因,编码PQQ生物合成的前体短肽PqqA和合成途径的相关酶;这些基因与荧光假单胞菌Pf0-1的PQQ合成基因簇的基因组成类似,相应基因的序列一致性达41%~94%。本研究中首次从变形假单胞菌中克隆到PQQ合成基因簇,并对其进行生物信息学分析,为变形假单胞菌的PQQ生物合成途径和胞内再生机制的研究奠定了基础,进而为提高2KGA的生产强度提供了理论支撑。

关键词：变形假单胞菌吡咯喹啉醌基因簇克隆生物信息学分析

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变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)核酸适配体的SELEX筛选

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海洋与湖沼 2023年第2期54卷 583-590页

作者：林筱钧许净郑江鄢庆枇高得骥范云庭黄将远集美大学水产学院福建厦门361021 鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心福建厦门361021

变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)是大黄鱼内脏白点病的主要致病菌。核酸适配体,因其亲和力高、特异性好等多个优点,在微生物检测等多个领域都有较好的应用前景。以变形假单胞菌为靶目标,采用SELEX筛选方法,从高频序列中筛选... 详细信息

变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)是大黄鱼内脏白点病的主要致病菌。核酸适配体,因其亲和力高、特异性好等多个优点,在微生物检测等多个领域都有较好的应用前景。以变形假单胞菌为靶目标,采用SELEX筛选方法,从高频序列中筛选获得了变形假单胞菌的5个核酸适配体,测定了这些核酸适配体对变形假单胞菌的亲和特异性及其亲和常数(K_(d))和最大亲和力(A_(m)),并对其二级结构进行了分析研究。结果表明,这5个核酸适配体对变形假单胞菌的亲和力是其他非目标菌(嗜水气单胞菌、溶藻弧菌、哈维氏弧菌、大肠杆菌、迟钝爱德华氏菌、铜绿假单胞菌)的10倍以上,体现出了较好的亲和特异性。测定了5个核酸适配体(#1、#2、#3、#4、#5)的K_(d)和A_(m),相应的K_(d)值分别为(25.77±6.11)、(7.14±1.86)、(19.59±3.01)、(83.22±22.45)、(34.31±8.76) nmol/L,A_(m)值分别为(789.23±38.46)、(1392.27±58.03)、(3012.50±106.19)、(1457.99±171.32)、(1070.91±70.16) nmol/L。二级结构模拟发现核酸适配体对靶标的结合能力可能主要与其二级结构中的大中型环有关。相关研究对于变形假单胞菌的快速检测及其病害防控都具有重要意义。

关键词：变形假单胞菌核酸适配体亲和常数最大亲和力二级结构

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变形假单胞菌2-酮基葡萄糖酸转运蛋白基因的克隆与分析

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现代食品科技 2016年第6期32卷 50-55页

作者：孙文敬栾方王大明张晓飞崔凤杰李运哲江苏大学食品与生物工程学院江苏镇江212013 百勤异VC钠有限公司江西德兴334221 江南大学生物工程学院江苏无锡214122

该研究旨在克隆变形假单胞菌JUIM01的2-酮基葡萄糖酸转运蛋白基因kgu T,并明确其基本的生物学信息。根据已报道的假单胞菌的基因组信息及其2-酮基葡萄糖酸操纵子的物理图谱设计简并引物,采用TD-PCR技术从变形假单胞菌中克隆到全长为1278... 详细信息

该研究旨在克隆变形假单胞菌JUIM01的2-酮基葡萄糖酸转运蛋白基因kgu T,并明确其基本的生物学信息。根据已报道的假单胞菌的基因组信息及其2-酮基葡萄糖酸操纵子的物理图谱设计简并引物,采用TD-PCR技术从变形假单胞菌中克隆到全长为1278 bp的kgu T,其核苷酸序列与Pseudomonas ***191的编码2-酮基葡萄糖酸转运蛋白(Kgu T)的核苷酸序列的一致性为87%,编码一个由425个氨基酸残基组成的蛋白。该蛋白与Pseudomonas sp.M1的Kgu T在氨基酸序列上的一致性达90%,定位于细胞膜,是一个具有12个跨膜结构的疏水性的跨膜蛋白,无信号肽,其二级结构中α螺旋、延伸链和无规卷曲所占的比例分别为75.76%、2.12%和22.12%。本研究首次从2-酮基葡萄糖酸的工业生产用菌中克隆到基因kgu T,并对其进行了生物信息学分析,为变形假单胞菌的Kgu T的功能研究奠定了基础。

关键词：变形假单胞菌 2-酮基葡萄糖酸转运蛋白 kgu T基因克隆生物信息学

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变形假单胞菌ExsA蛋白表达、纯化及多克隆抗体的制备

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农业生物技术学报 2023年第4期31卷 883-888页

作者：韦金平李云凤邱薇陈兴莆陈波宇陈新华覃盼福建农林大学海洋学院福建省海洋生物技术重点实验室

Ⅲ型分泌系统(type Ⅲ secretion system, T3SS)是革兰氏阴性菌中普遍存在的蛋白分泌机制，是细菌毒力因子产生致病效果的重要途径。阿糖胞苷(Ara-C)型DNA结合蛋白ExsA是T3SS的主要激活因子之一，能够调控T3SS相关蛋白的表达。本研究将... 详细信息

Ⅲ型分泌系统(type Ⅲ secretion system, T3SS)是革兰氏阴性菌中普遍存在的蛋白分泌机制，是细菌毒力因子产生致病效果的重要途径。阿糖胞苷(Ara-C)型DNA结合蛋白ExsA是T3SS的主要激活因子之一，能够调控T3SS相关蛋白的表达。本研究将变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)PQLYC4菌株的ExsA基因克隆至原核表达载体pET28a(+)，将重组表达质粒pET-28a-ExsA转化至大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达。结果显示，大肠杆菌表达的重组ExsA蛋白分子量略小于30 kD，与预期分子量(29.7 kD)一致。将表达的重组ExsA蛋白进行纯化，免疫新西兰大白兔(Oryctolagus cuniculus)制备抗ExsA蛋白的多克隆抗体，效价达1∶256 000以上；利用制备的抗体，采用Western blot和间接免疫荧光方法，检测变形假单胞菌菌体中的ExsA蛋白和鲤鱼(Cyprinus carpio)上皮细胞(epithelioma papulosum cyprini, EPC)中过表达的ExsA蛋白，均可发生特异性反应。本研究为深入探讨ExsA蛋白结构及其在调控变形假单胞菌毒力因子T3SS系统中的功能提供了工具。

关键词：变形假单胞菌 ExsA 原核表达蛋白纯化多克隆抗体

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变形假单胞菌免疫刺激复合物对大黄鱼口服免疫效果的评价

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农业生物技术学报 2024年第9期32卷 2181-2189页

作者：许斌福陈秀霞池洪树李素一郑在予徐梦婷江秋欢郑炜强林能锋福建省农业科学院生物技术研究所福建省水产病害防治工程技术研究中心海水养殖生物育种全国重点实验室/宁德市富发水产有限公司

变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)是大黄鱼(Larimichthys crocea)内脏白点病的主要病原，可导致巨大经济损失。前期研究表明免疫刺激复合物(immune stimulating complexes, ISCOMs)具有较好的口服免疫效果。为了评价口服变形... 详细信息

变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)是大黄鱼(Larimichthys crocea)内脏白点病的主要病原，可导致巨大经济损失。前期研究表明免疫刺激复合物(immune stimulating complexes, ISCOMs)具有较好的口服免疫效果。为了评价口服变形假单胞菌ISCOMs免疫大黄鱼的效果，本研究制备具有笼格状纳米颗粒结构的变形假单胞菌ISCOMs疫苗(Pp-ISCOMs)，检测口服免疫后21 d大黄鱼头肾的各免疫因子的基因表达水平，通过菌体血清凝集方法测定免疫后大黄鱼血清效价，并测定其免疫保护力。结果显示，与灭活变形假单胞菌(Pp)和空白对照(CK)相比，口服免疫Pp-ISCOMs的大黄鱼头肾的髓样分化因子88 (myeloid differentiation factor 88, MyD88)(P<0.05)和白介素2 (interleukin 2, IL-2)(P<0.001)等免疫相关因子表达显著提高；受免21 d的大黄鱼血清凝集效价为2～2；用5.0×10～2 CFU/g剂量的变形假单胞菌腹腔注射攻毒后，Pp-ISCOMs和Pp受免鱼的相对免疫保护率分别为73.3%和40%。研究表明变形假单胞菌ISCOMs口服免疫可提高大黄鱼抗变形假单胞菌感染能力，具有良好的应用前景。本研究为大黄鱼内脏白点病的免疫防控提供了技术支撑。

关键词：变形假单胞菌免疫刺激复合物(ISCOMs) 口服大黄鱼免疫效果

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