检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2025年

作者：包燕玲宋昱庆户鑫兵张格林田占成关贵全罗建勋苟惠天殷宏独军政甘肃农业大学动物医学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心

旨在获得结节性皮肤病病毒（LSDV）的重组A27L蛋白并制备其多克隆抗体，将密码子优化的A27L基因进行人工合成，随后克隆至pET-28a表达载体中，成功构建重组表达质粒pET-28a-A27L，将其转化入BL21(DE3)感受态细胞中，用0.5 mmol/L IPTG... 详细信息

旨在获得结节性皮肤病病毒（LSDV）的重组A27L蛋白并制备其多克隆抗体，将密码子优化的A27L基因进行人工合成，随后克隆至pET-28a表达载体中，成功构建重组表达质粒pET-28a-A27L，将其转化入BL21(DE3)感受态细胞中，用0.5 mmol/L IPTG进行诱导表达，利用SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行分析。经优化表达条件获得分子质量约为19 kDa的可溶性重组A27L蛋白。采用High Affinity Ni-Charged Resin FF对可溶性表达产物进行纯化，成功获得高纯度的重组A27L蛋白，将其免疫新西兰大白兔4次后收集血清，Western-blot分析和间接免疫荧光鉴定结果表明A27L多克隆抗体可特异识别BHK-21细胞中表达的重组A27L蛋白。本研究利用大肠杆菌成功表达了可溶性重组LSDV A27L蛋白，并制备出特异的A27L多克隆抗体，为深入研究A27L蛋白的生物学功能以及研发结节性皮肤病疫苗和诊断技术提供了基础。

关键词：结节性皮肤病病毒 A27L蛋白可溶性表达多克隆抗体

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SUMO蛋白和高亲和PDGFβR肽共修饰的Bak BH3可溶性表达条件优化

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牡丹江医科大学学报 2025年第1期46卷 9-12,39页

作者：许云婷徐黎明刘妍王小花牡丹江医科大学生命科学学院黑龙江牡丹江157011 牡丹江医科大学基础医学院黑龙江牡丹江157011

目的优化小分子泛素相关修饰物(Small ubiquitin-related modifier,SUMO)和高亲和血小板衍生生长因子β受体(Platelet-derived growth factorβreceptor,PDGFβ)的短肽Z PDGFβR共修饰BAK蛋白的功能域多肽BH3,即融合蛋白SUMO-Z-BH3的可溶性表达条件。方法在不同浓度的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷浓度(0.1、0.3、0.6和1 mmol/L IPTG)、不同的诱导温度(16℃、20℃和37℃)以及不同的诱导时间(20 h、16 h和6.5 h)下,对含重组质粒pET28a/SUMO-Z-BH3的大肠杆菌Rosetta进行诱导表达。利用SDS-PAGE技术分析SUMO-Z-BH3的可溶性表达情况。结果在16℃,0.1 mmol/L的IPTG诱导20 h,SUMO-Z-BH3表达约占上清总蛋白的13.0%;在20℃,0.1 mmol/L的IPTG诱导16 h,SUMO-Z-BH3表达约占上清总蛋白的8.5%;在37℃,不同浓度的IPTG诱导后,上清中SUMO-Z-BH3的表达水平无明显差异,且表达量相对较低。结论融合蛋白SUMO-Z-BH3的最佳可溶性表达条件为16℃,0.1 mmol/L的IPTG诱导20 h,为后续的功能研究打下坚实的基础。

关键词：融合蛋白可溶性表达小分子泛素相关修饰物

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外源蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达策略

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过程工程学报 2006年第1期6卷 150-155页

作者：朱红裕李强清华大学化学工程系生物化工研究所北京100084

长期以来,大肠杆菌一直是表达外源蛋白的首选表达系统.但由于外源蛋白在表达过程中容易被宿主细胞蛋白酶降解或者形成包涵体,其应用受到了限制.本文综述了在大肠杆菌中表达可溶外源蛋白的策略和进展,以期提高具有生物活性的外源基因的... 详细信息

长期以来,大肠杆菌一直是表达外源蛋白的首选表达系统.但由于外源蛋白在表达过程中容易被宿主细胞蛋白酶降解或者形成包涵体,其应用受到了限制.本文综述了在大肠杆菌中表达可溶外源蛋白的策略和进展,以期提高具有生物活性的外源基因的表达水平.

关键词：外源蛋白可溶性表达大肠杆菌

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硫氧还蛋白还原酶缺陷的大肠杆菌宿主促进含半胱氨酸残基的重组蛋白可溶性表达

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2001年第1期33卷 30-34页

作者：童芹杨运桂张惠堂陈燕杨胜利龚毅中国科学院上海生物工程研究中心!上海200233

以人工设计的、不含半胱氨酸残基的三元蛋白 ,六聚和八聚鲑鱼降钙素融合蛋白和人尿激酶原等具有不同半胱氨酸残基含量的外源蛋白质为例 ,利用大肠杆菌硫氧还蛋白还原酶基因缺陷菌株GJ980 (DE3trxB-) ,探索把以包涵体形式表达的外源蛋白... 详细信息

以人工设计的、不含半胱氨酸残基的三元蛋白 ,六聚和八聚鲑鱼降钙素融合蛋白和人尿激酶原等具有不同半胱氨酸残基含量的外源蛋白质为例 ,利用大肠杆菌硫氧还蛋白还原酶基因缺陷菌株GJ980 (DE3trxB-) ,探索把以包涵体形式表达的外源蛋白质变为可溶性表达的可能性及其规律。研究表明 :由于硫氧还蛋白还原酶基因的缺陷所引起的细胞质氧化还原态势的变化 ,使一些在普通大肠杆菌宿主中以包涵体形式表达 ,含有半胱氨酸残基的重组蛋白 ,在GJ980中能在一定程度上以可溶性蛋白质形式表达 ;不含有半胱氨酸残基的重组蛋白在GJ980中仍以包涵体形式表达。推测重组蛋白在GJ980细胞质中形成二硫键对其正确构象的形成具有一定的作用

关键词：表达系统可溶性表达硫氧还蛋白还原酶基因

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大肠杆菌中dAb一级结构与可溶性表达关联

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食品与生物技术学报 2017年第9期36卷 951-958页

作者：郭雯雯刘萌白仲虎杨艳坤戴晓峰江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室江苏无锡214122 江南大学工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122 江南大学糖化学与生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122

抗体类药物研发是药物发展的一个重要研究方向,目前已有许多抗体在原核表达体系中成功表达。人们通常采用"试错法"优化表达系统,提高蛋白质产量,但该方法费时费力且成功率低,因此迫切需要探索氨基酸组成与蛋白质可溶性表达水... 详细信息

抗体类药物研发是药物发展的一个重要研究方向,目前已有许多抗体在原核表达体系中成功表达。人们通常采用"试错法"优化表达系统,提高蛋白质产量,但该方法费时费力且成功率低,因此迫切需要探索氨基酸组成与蛋白质可溶性表达水平之间的关联,以指导表达系统的选择或蛋白质分子的定向改造。在单域抗体dAb分子的C端末尾添加一个氨基酸,发现单个氨基酸的改变足以引起蛋白质可溶性表达量发生显著变化。通过层次聚类、Cluster Omega对dAb氨基酸序列与表达水平分别进行分类,发现两者分类一致的比例达到70%,证明了氨基酸序列与蛋白质表达水平间的关联。通过对65个CDR随机突变的dAb分子进行线性建模分析其可溶性表达量,发现对dAb胞外质量分数有显著影响作用的氨基酸组合为S(丝氨酸),R(精氨酸),N(天冬酰胺),D(天冬氨酸),Q(谷氨酰胺),Y(酪氨酸),F(苯丙氨酸),G(甘氨酸),对dAb胞内质量分数有显著影响作用的氨基酸组合为G,R,C(半胱氨酸),N,S,Y,K(赖氨酸),A(丙氨酸),对dAb蛋白质总量有显著影响的组合为R,S,G,N,Y,C,Q,F,T(苏氨酸)。其中R、S和G的含量显著影响dAb的可溶性表达量且该影响不受分布位置的影响。蛋白质的极性亦是其可溶性表达水平的显著影响因素。

关键词： dAb 氨基酸组成可溶性表达聚类分析线性建模

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用小鼠模型分析可溶性表达结核分枝杆菌Ag85A的免疫原性

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微生物学报 2016年第5期56卷 804-813页

作者：徐正中胡婷刘泽沈轩云刘佳莹殷月兰孙林陈祥焦新安扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室/江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

【目的】可溶性表达结核分枝杆菌Ag85A蛋白,并评价其免疫原性。【方法】利用冷休克表达质粒和含有伴侣质粒的大肠杆菌对Ag85A蛋白进行可溶性原核表达,并进行纯化与鉴定,通过C57BL/6小鼠模型对Ag85A蛋白的免疫原性,包括诱导机体特异性体... 详细信息

【目的】可溶性表达结核分枝杆菌Ag85A蛋白,并评价其免疫原性。【方法】利用冷休克表达质粒和含有伴侣质粒的大肠杆菌对Ag85A蛋白进行可溶性原核表达,并进行纯化与鉴定,通过C57BL/6小鼠模型对Ag85A蛋白的免疫原性,包括诱导机体特异性体液免疫应答和细胞免疫应答水平进行分析。【结果】重组菌诱导后裂解上清中检测到可溶性Ag85A蛋白的表达,经过亲和层析纯化收获了纯度在90%以上的Ag85A蛋白,Western blot鉴定显示其具有较好的免疫反应性。Ag85A蛋白免疫小鼠后,血清中可以检测到高水平的Ig G抗体效价,其中Ig G2b水平要高于Ig G1。通过特异性多肽、蛋白刺激脾脏和腹股沟淋巴结细胞可分泌高水平的IFN-γ、TNF-α等Th1型细胞因子。【结论】实现了Ag85A蛋白的可溶性表达,免疫特性评价显示Ag85A蛋白可诱导机体产生强烈的特异性体液免疫应答及Th1型的细胞免疫应答,从而为其进一步免疫学功能的研究奠定了重要基础。

关键词：结核分枝杆菌 Ag85A 可溶性表达免疫原性

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一种特异性识别斑马鱼卵黄蛋白原的噬菌体展示单链抗体的可溶性表达方案

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生物工程学报 2011年第11期27卷 1637-1644页

作者：饶瑜钟利桥张凤张晓华戴和平中国科学院水生生物研究所淡水生态和生物技术国家重点实验室武汉430072 中国科学院研究生院北京100049

为了实现特异性识别斑马鱼卵黄蛋白原的噬菌体展示单链抗体的可溶性表达,将不能以可溶性蛋白形式表达的、只能以噬菌体展示形式特异性识别斑马鱼卵黄蛋白原的单链抗体F5的基因,克隆到pET 32a载体并转化入大肠杆菌ori DE3中。结果表明,... 详细信息

为了实现特异性识别斑马鱼卵黄蛋白原的噬菌体展示单链抗体的可溶性表达,将不能以可溶性蛋白形式表达的、只能以噬菌体展示形式特异性识别斑马鱼卵黄蛋白原的单链抗体F5的基因,克隆到pET 32a载体并转化入大肠杆菌ori DE3中。结果表明,通过诱导表达,可获得可溶性的并且仍特异性识别斑马鱼卵黄蛋白原的单链抗体32a-F5。噬菌体展示单链抗体不能可溶性表达是噬菌体展示技术应用中常见的问题,该方法提供了一种表达可溶性单链抗体的可行性方案。

关键词：噬菌体展示技术单链抗体可溶性表达大肠杆菌斑马鱼卵黄蛋白原

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不同原核表达载体对非洲猪瘟病毒CD2v蛋白可溶性表达及免疫反应性比较

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2023年第6期49卷 873-880页

作者：冯梦珂王星博林璐璐崔明仙颜焰周继勇浙江大学动物医学中心浙江杭州310058 农业农村部动物病毒学重点实验室浙江杭州310058

本研究旨在系统性地探究不同原核表达载体对非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的可溶性表达差别,并利用临床非洲猪瘟病毒抗体阳性血清比较包涵体和可溶性CD2v蛋白的免疫反应性。利用5种原核表达载体pCold-TF、pET28a、pMAL-C6T、pGEX-4T-1、pET32a... 详细信息

本研究旨在系统性地探究不同原核表达载体对非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的可溶性表达差别,并利用临床非洲猪瘟病毒抗体阳性血清比较包涵体和可溶性CD2v蛋白的免疫反应性。利用5种原核表达载体pCold-TF、pET28a、pMAL-C6T、pGEX-4T-1、pET32a分别表达去除信号肽和跨膜区的非洲猪瘟病毒CD2v蛋白,利用镍-氨三乙酸(nickel-nitrilotriacetic acid,Ni-NTA)亲和层析法分别纯化源自pET28a和pCold-TF表达载体的包涵体和可溶性CD2v蛋白,并用间接酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)方法比较纯化蛋白的免疫反应性。结果显示,pCold-TF载体以表达可溶性蛋白为主,pMAL-C6T载体同时表达包涵体和可溶性蛋白,而其他载体主要表达包涵体蛋白。临床非洲猪瘟病毒抗体阳性血清检测数据显示,可溶性蛋白的免疫反应性显著优于包涵体蛋白(P<0.05)。pCold-TF载体的触发因子(trigger factor,TF)标签可促进CD2v蛋白的可溶性表达,其表达蛋白的免疫反应性优于包涵体蛋白。本研究结果为CD2v蛋白的免疫原性研究奠定了基础,亦为其他重要抗原的可溶性表达提供了思路。

关键词：非洲猪瘟病毒 CD2v蛋白原核表达可溶性表达免疫反应性

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重组蛋白质在大肠杆菌体系中的可溶性表达策略

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中国生物工程杂志 2023年第9期43卷 33-45页

作者：苗朝悦杜乐王佳琦陈梓杰黄靖倍陈且昕邹沛璇韩笑张纯四川大学华西药学院靶向药物及释药系统教育部重点实验室成都610041

大肠杆菌表达体系因其表达量高、周期短、成本低等诸多优势特征而被广泛用作重组异源蛋白质的表达宿主。据统计超过30%的重组蛋白质药物和50%重组蛋白质的制备是使用大肠杆菌作为表达宿主。蛋白质错误折叠或未折叠以及包涵体形成是大肠... 详细信息

大肠杆菌表达体系因其表达量高、周期短、成本低等诸多优势特征而被广泛用作重组异源蛋白质的表达宿主。据统计超过30%的重组蛋白质药物和50%重组蛋白质的制备是使用大肠杆菌作为表达宿主。蛋白质错误折叠或未折叠以及包涵体形成是大肠杆菌表达体系更广泛应用的主要阻碍。因此,重组蛋白质在大肠杆菌体系中可溶性表达策略探索意义重大。综述了重组蛋白质在大肠杆菌表达系统中不可溶性表达的原因、机制以及影响大肠杆菌表达系统重组蛋白质可溶性的一些关键因素,并基于外源蛋白质在大肠杆菌中表达的各个步骤,总结了目前促进蛋白质在大肠杆菌表达系统中高效、可溶性表达的策略,为进一步拓展大肠杆菌表达体系在重组异源蛋白质可溶性表达中的应用提供参考。

关键词：大肠杆菌表达体系重组异源蛋白质可溶性表达包涵体糖基化

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伴侣蛋白提高木糖苷酶的可溶性表达及其协同酶解木聚糖

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林产化学与工业 2021年第5期41卷 15-22页

作者：李琦朱文慧姜云鹏赵林果南京林业大学化学工程学院江苏省林业资源高效加工利用协同创新中心江苏南京210037

通过分子伴侣蛋白共表达的方式,对6种商业化的分子伴侣蛋白进行筛选以提高β-木糖苷酶(Xln-DT)的可溶性表达量。研究结果表明:构建诱导型质粒pG-KJE8和含有xln-DT基因的重组表达质粒pET-28a-xln-DT共表达系统后,Xln-DT的可溶性表达量为... 详细信息

通过分子伴侣蛋白共表达的方式,对6种商业化的分子伴侣蛋白进行筛选以提高β-木糖苷酶(Xln-DT)的可溶性表达量。研究结果表明:构建诱导型质粒pG-KJE8和含有xln-DT基因的重组表达质粒pET-28a-xln-DT共表达系统后,Xln-DT的可溶性表达量为原酶初始表达量的1.31倍;以质量分数2.0%甘油为碳源,质量分数1.2%蛋白胨为氮源,添加0.01 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)、5μg/L四环素、1.5 g/L L-阿拉伯糖,32℃下诱导60 h,重组酶的表达量可达11.9 U/mL,较原酶提高了4.22倍。此外,利用内切木聚糖酶(XynB-DT)和Xln-DT协同酶解木聚糖,在添加Xln-DT后,榉木、桦木、玉米芯、燕麦和甘蔗渣5种木聚糖的酶解率分别为84.4%、90.2%、79.6%、77.3%和64.7%,相较于仅添加XynB-DT的酶解率有了显著的提高。

关键词： β-木糖苷酶分子伴侣可溶性表达协同酶解木聚糖

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