检索结果-内蒙古大学图书馆

基于同位素相对标记与绝对定量技术结合质谱技术的幼年特发性关节炎血清蛋白质组学研究

实用医学杂志 2021年第20期37卷 2619-2623页

作者：刘琴孙红余东阳胡红兵华中科技大学同济学院附属武汉儿童医院输血科武汉430015 浙江省立同德医院检验科杭州310012 华中科技大学同济学院附属武汉儿童医院检验科武汉430015

目的应用同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)分析幼年特发性关节炎(JIA)患者与健康人群的血清差异蛋白。方法收集JIA患者血清18例、健康体检者20例、类风湿关节炎(RA)患者44例,采用iTRAQ标记联合纳升液相色谱-串联质谱筛选JIA患者的... 详细信息

目的应用同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)分析幼年特发性关节炎(JIA)患者与健康人群的血清差异蛋白。方法收集JIA患者血清18例、健康体检者20例、类风湿关节炎(RA)患者44例,采用iTRAQ标记联合纳升液相色谱-串联质谱筛选JIA患者的差异蛋白,并进行生物信息学分析。结果相对于健康体检组,JIA组共鉴定差异蛋白106个,其中49个表达上调,57个表达下调;JIA组和RA组中有26个差异蛋白均表达上调,37个表达下调。通过GO富集分析和KEGG通路分析,结果表明血液凝溶系统、免疫系统、脂质代谢与JIA的发病机制密切相关。通过STRING分析得到研究JIA机制的PPI网络的关键节点AHSG、APOH、脂联素等多个候选蛋白。结论本研究分析了JIA患者的血清蛋白质组,为JIA的诊断、JIA发病机制的探讨提供了实验依据。

关键词：幼年特发性关节炎蛋白质组学同位素相对标记与绝对定量技术质谱技术

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肾小球疾病患者尿液比较蛋白质组学研究方法的建立

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肾脏病与透析肾移植杂志 2014年第2期23卷 140-145页

作者：王玉孙伟左科王霞郑春霞高友鹤刘志红南京军区南京总医院国家肾脏病临床医学研究中心全军肾脏病研究所南京210016 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院

目的:采用蛋白质组学技术建立尿液蛋白质图谱分析方法,并通过对膜性肾病(MN)和局灶节段性肾小球硬化(FSGS)患者尿液蛋白质图谱的比较分析,以期寻找到具有鉴别诊断意义的尿液蛋白质标志物。方法:以肾病综合征为主要表现的MN和FSGS患者各1... 详细信息

目的:采用蛋白质组学技术建立尿液蛋白质图谱分析方法,并通过对膜性肾病(MN)和局灶节段性肾小球硬化(FSGS)患者尿液蛋白质图谱的比较分析,以期寻找到具有鉴别诊断意义的尿液蛋白质标志物。方法:以肾病综合征为主要表现的MN和FSGS患者各15例,采用白蛋白/IgG抗体清除联合同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)标记二维液相色谱与串联质谱联用技术(2D-LC MS/MS)蛋白质组学技术对患者尿液蛋白质组进行全面分析,并获取差异表达蛋白。对鉴定蛋白和差异蛋白进行Gene ontology(GO)分析。对鉴定蛋白丰度排序前10位蛋白与血蛋白质组丰度排序前10位蛋白进行比较。结果:共鉴定尿液蛋白809个,GO分析显示根据分子功能,鉴定蛋白主要属于催化活性、结合、受体活性三个类别;根据生物过程,鉴定蛋白主要属于代谢过程、细胞过程、发育过程三个类别;根据细胞定位,鉴定蛋白主要属于细胞外区域、细胞成分、细胞外基质三个类别。符合条件的差异蛋白16个,生物学功能包括参与纤溶调节、免疫反应、代谢过程、细胞增生等。对临床表现肾病综合征的MN和FSGS患者尿液鉴定蛋白丰度排序前10位蛋白与血蛋白质组丰度排序前10位蛋白进行比较显示有较大差异,提示即使在病理情况下,肾脏仍可对不同种类的蛋白保持不同的处理功能,蛋白尿可能有着不同于血蛋白质组的组成架构。结论:从患者尿液中获得的蛋白质组学图谱为进一步开展基于蛋白质组学生物标志物的研究提供了基础,从MN和FSGS患者尿液中获得的差异蛋白有待进一步验证其与疾病诊断、治疗及预后的关系。

关键词：蛋白组学膜性肾病局灶节段性肾小球硬化同位素相对标记与绝对定量技术标志物

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家系早发冠心病血瘀证患者的血浆蛋白质组学分析

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中华中医药杂志 2022年第10期37卷 5983-5988页

作者：张书萌江雨洁于子璇刘佳陈宇霞陈伶利李杰湖南中医药大学长沙410208 湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室长沙410208 湖南中医药大学中西医结合病原生物学湖南省重点实验室长沙410208

目的:通过同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)分析家系早发冠心病血瘀证患者的血浆蛋白质组学变化,为今后预防疾病及临床筛查提供新的潜在生物标志物。方法:从前期流调工作中收集的冠心病患者中筛选出典型的家系早发冠心病血瘀证患者... 详细信息

目的:通过同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)分析家系早发冠心病血瘀证患者的血浆蛋白质组学变化,为今后预防疾病及临床筛查提供新的潜在生物标志物。方法:从前期流调工作中收集的冠心病患者中筛选出典型的家系早发冠心病血瘀证患者、家系早发冠心病非血瘀证患者,并匹配健康对照组,收集每位受试者的血浆样本,采用iTRAQ技术对血浆蛋白表达情况进行定量检测,对所得的蛋白数据进行鉴定与筛选,并以Western Blot验证筛选出的蛋白。结果:通过iTRAQ技术共得到差异蛋白61个,其中与健康对照组比较,家系早发冠心病血瘀证共得到32个差异蛋白,包括22个上调蛋白与10个下调蛋白;家系早发冠心病非血瘀证共得到35个差异蛋白,其中8个上调蛋白和27个下调蛋白。家系早发冠心病血瘀证组中差异蛋白的生物功能分析提示与角质化、角质化包膜及表皮结构组成部分密切联系,差异蛋白所在通路主要与金黄色葡萄球菌感染、补体系统、血小板激活等相关。与健康对照组比较,家系早发冠心病血瘀证组差异蛋白二磷酸甘油酸变位酶(BPGM)表达水平显著降低(P<0.05)。结论:经iTRAQ技术初步筛选及Western Blot验证后的差异蛋白BPGM可作为家系早发冠心病血瘀证早期诊断的潜在生物标志物之一。

关键词：早发冠心病血瘀证同位素相对标记与绝对定量技术二磷酸甘油酸变位酶蛋白质组学

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利用转录组及iTRAQ技术筛选高油酸油菜抗病相关基因

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华北农学报 2015年第5期30卷 16-24页

作者：张振乾肖钢官春云邬贤梦熊兴华李云昌胡琼陈社员湖南农业大学农学院南方粮油作物协同创新中心湖南长沙410128 农业部油料作物生物学与遗传育种重点实验室湖北武汉430062

高油酸油菜和低油酸油菜对菌核病的抗性存在显著差异,为了弄清其分子机理,以一组高油酸油菜近等基因系自交授粉后20-35 d的种子为材料,分别进行转录组和同位素相对标记与绝对定量技术分析。分析了与抗病相关的氧化磷酸化、植物激素信号... 详细信息

高油酸油菜和低油酸油菜对菌核病的抗性存在显著差异,为了弄清其分子机理,以一组高油酸油菜近等基因系自交授粉后20-35 d的种子为材料,分别进行转录组和同位素相对标记与绝对定量技术分析。分析了与抗病相关的氧化磷酸化、植物激素信号转导通路和植物病原体互作3个分类,将注释的基因和蛋白进行关联,并对其中可能与抗病相关的基因进行定量PCR验证。结合前人研究发现,基因表达或蛋白表达发生显著变化的基因gi｜260505503（多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白）、gi｜226346102（HSR203J类蛋白）、gi｜470103214（钙调蛋白类）与抗病相关;而gi｜297843222（结合蛋白）、gi｜18397961（2-铁,2-硫-铁氧化还原类蛋白）、gi｜196052306（还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚基）、gi｜18423437（还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶（辅酶）1α-复形5）和gi｜297794581（激酶家族蛋白）等基因差异显著。

关键词：菌核病高油酸油菜转录组同位素相对标记与绝对定量技术定量PCR

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基于iTRAQ蛋白组学技术的大肠癌和肝癌术后肝肾阴虚证血浆差异表达蛋白的研究

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中华中医药杂志 2017年第6期32卷 2626-2630页

作者：季青陆奕宇宋雅楠魏滨李晓燕孙阳罗运权王文海李琦苏式兵上海中医药大学复杂系统研究中心上海201203 上海中医药大学附属曙光医院上海201203 上海中医药大学附属第七人民医院肿瘤科上海200137

目的:筛选大肠癌和肝癌术后肝肾阴虚证的血浆差异表达蛋白,探索大肠癌和肝癌"异病同证"的物质基础。方法:纳入具有典型肝肾阴虚证的大肠癌和肝癌患者各10例,对照组为无证可辨的大肠癌和肝癌患者各10例。采集患者血浆并提取蛋... 详细信息

目的:筛选大肠癌和肝癌术后肝肾阴虚证的血浆差异表达蛋白,探索大肠癌和肝癌"异病同证"的物质基础。方法:纳入具有典型肝肾阴虚证的大肠癌和肝癌患者各10例,对照组为无证可辨的大肠癌和肝癌患者各10例。采集患者血浆并提取蛋白,然后进行蛋白变性、还原及酶解,最后进行同位素相对标记与绝对定量技术(i TRAQ)标记和液相色谱串联质谱联用技术鉴定,得到的峰图采用Maxquant 1.3.0.5软件进行系统的蛋白差异表达分析。鉴定蛋白组间比值>1.5或<0.6被认为存在表达差异。结果:大肠癌术后肝肾阴虚证组共筛选出9个典型的差异表达蛋白,肝癌术后肝肾阴虚证组也筛选出9个典型差异表达蛋白,两组共同的差异蛋白有8个:激肽原1(KNG1)、血红蛋白α2(HBA2)、血红蛋白β(HBB)、α1微球蛋白比库蛋白前体(AMBP)、性激素结合球蛋白(SHBG)、羧肽酶N催化链(CPN1)、血浆蛋白酶C1抑制剂(SERPING1)、间α胰蛋白酶抑制剂重链H1(ITHIH1)。这些蛋白主要与补体和凝血级联途径有紧密联系。结论:本研究证实i TRAQ结合液相色谱串联质谱联用技术能够快速、有效地进行差异蛋白质组学研究,发现KNG1,HBA2等蛋白可能是大肠癌和肝癌"异病同证"的物质基础之一。

关键词：大肠癌肝癌肝肾阴虚证蛋白质组学差异表达蛋白同位素相对标记与绝对定量技术

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基于iTRAQ技术的寻常型银屑病(血虚证)蛋白组学研究

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中华中医药杂志 2018年第4期33卷 1497-1501页

作者：郝平生严晓萍成都中医药大学附属医院皮肤科成都610075

应用同位素相对标记与绝对定量技术(i TRAQ)对寻常型银屑病(血虚证)患者的血清蛋白进行定量分析,探求其与健康人差异表达蛋白质,从蛋白组学角度揭示血虚证的部分内涵。本实验共鉴定定量了208个蛋白质,血虚证寻常型银屑病患者血清蛋白组... 详细信息

应用同位素相对标记与绝对定量技术(i TRAQ)对寻常型银屑病(血虚证)患者的血清蛋白进行定量分析,探求其与健康人差异表达蛋白质,从蛋白组学角度揭示血虚证的部分内涵。本实验共鉴定定量了208个蛋白质,血虚证寻常型银屑病患者血清蛋白组与健康组比较,有109个蛋白质差异存在统计学意义(P<0.05)。寻常型银屑病(血虚证)血清中存在与健康人表达差异性蛋白质,如角蛋白类相关蛋白、凝血相关蛋白、脂蛋白类相关蛋白、免疫相关蛋白、肿瘤相关蛋白、甲状腺素结合球相关蛋白、血红蛋白类相关蛋白、细胞外基质类蛋白等。提示这些蛋白可能与寻常型银屑病血虚证有关。

关键词：寻常型银屑病血虚证蛋白组学同位素相对标记与绝对定量技术差异蛋白

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血液中细胞质肌动蛋白-1升高在急性脑梗死早期诊断中的价值

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中华全科医学 2020年第6期18卷 942-946页

作者：寇雪莲陈琳迪管姝轶唐维国何松彬浙江省舟山医院神经内科浙江舟山316000

目的应用iTRAQ技术,探索急性脑梗死早期血液生物标志物。方法选取2016年7月-2018年7月就诊浙江省舟山医院的急性脑梗死患者40例,按发病时间分为5组:脑梗死1组(发病<2 h)8例,脑梗死2组(发病2~4 h)8例,脑梗死3组(发病4~6 h)8例,脑梗死4... 详细信息

目的应用iTRAQ技术,探索急性脑梗死早期血液生物标志物。方法选取2016年7月-2018年7月就诊浙江省舟山医院的急性脑梗死患者40例,按发病时间分为5组:脑梗死1组(发病<2 h)8例,脑梗死2组(发病2~4 h)8例,脑梗死3组(发病4~6 h)8例,脑梗死4组(发病6~24 h)8例,脑梗死5组(发病24~72 h)8例;另选取3组为:短暂脑缺血性发作组(发病<2 h)和急性脑出血组(发病<2 h)各8例,以及健康对照组8例。应用iTRAQ技术,对各组血清进行检测,筛选出临床上有意义的生物标志物。结果①在脑梗死急性期发现多个差异蛋白质,主要参与165种生物学过程、35种细胞组分、38种分子功能。②这些差异蛋白质主要涉及三类生物代谢途径,包括:补体调节途径、血液凝固途径和细胞信号转导通路;细胞组分包括:细胞外空间、血小板a颗粒、脂蛋白复合体、分泌颗粒;分子功能包括:酶活性、离子类等。③脑梗死特有的生物标志物有细胞质肌动蛋白-1、血清淀粉样蛋白P、P因子、C反应蛋白、血清淀粉样蛋白A1、3-磷酸甘油醛脱氢酶,其中细胞质肌动蛋白-1最具意义。结论急性脑梗死2 h内血脑屏障紧密连接损害是一个特征性的变化,这一变化可以有效区分急性脑梗死与短暂脑缺血发作、脑出血。细胞质肌动蛋白-1可能是一种可以用于诊断急性脑梗死的特异性标志物。

关键词：同位素相对标记与绝对定量技术急性脑梗死生物标志物早期诊断紧密连接细胞质肌动蛋白-1

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水稻对稻瘟菌侵染胁迫应答机制的定量蛋白质组学研究

水稻对稻瘟菌侵染胁迫应答机制的定量蛋白质组学研究

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作者：崔书建扬州大学

学位级别：博士

水稻是世界上最重要的粮食作物之一,它广泛的适应性和高产性能使水稻生产具有巨大社会意义和重要的战略意义,在粮食危机愈演愈烈和人口总数不断增长的历史背景下,全世界对水稻生产的期望也越来越高。据预测,到2050年,水稻产量在现有基... 详细信息

水稻是世界上最重要的粮食作物之一,它广泛的适应性和高产性能使水稻生产具有巨大社会意义和重要的战略意义,在粮食危机愈演愈烈和人口总数不断增长的历史背景下,全世界对水稻生产的期望也越来越高。据预测,到2050年,水稻产量在现有基础上翻一番才能基本满足不断增长人口需求。水稻病害是造成稻谷产量下降的主要原因之一,如水稻三大病害之一的稻瘟病每年给水稻造成11-30%的产量损失。尽管化学防治对水稻病害效果显著,但由于施用时期局限、病原菌抗药性增强、对环境造成严重污染和对稻米品质的关注提高,一定程度上限制了化学药剂的使用。与之相反,抗病水稻品种的选育及大面积推广却是多年来被证明为防治病害最经济、最有效和最安全的解决途径。本论文研究内容涉及植物生理学、生物化学、定量蛋白值组学等技术,研究内容主要包括(1)通过体外标记技术(iTRAQ)结合高通量的质谱鉴定平台(LC-MS/MS),对水稻响应稻瘟菌侵染胁迫时,不同时间段叶片样本蛋白质表达进行研究;(2)对不同抗性水稻品种响应稻瘟菌侵染胁迫时叶片样本蛋白质表达进行定量研究;(3)通过生物信息学手段结合实验验证,旨在找到稻瘟菌侵染水稻时,水稻发生差异表达的蛋白,从而从分子水平阐明抗病性机制,为培育优质、抗病的水稻新品种奠定基础,推动水稻抗稻瘟菌的分子机制研究。本论文的主要结果是:1)在水稻对稻瘟菌侵染不同时间胁迫应答的定量蛋白质组学研究中,我们提取谷梅2号在稻瘟菌(Guy11)侵染0小时、24小时、48小时后的叶片蛋白,进行定量、酶解及标记处理,再根据肽段特征,将复杂肽段进行SCX柱的初级分离,最后通过LC-MS/MS高通量质谱鉴定平台(ABSECXTripleTOFTM4600)进行图谱采集。通过ProteinPilot4.5软件(ABSCIEX,FosterCity)针对280,528条Oryzasativa蛋白序列进行搜索。数据采集时,对每个组分进行两次技术重复,即共采集20个组分,每10个组分采集图谱经过软件整合到一个文件中,每个文件分别针对Oryzasativa库进行比对搜索,两次结果表为Repeat 1 和 Repeat2。结果显示,Repeat 1 在 FDR 为 1.0%时,共鉴定到 33,373 Spectral,15,835条肽,1,604 个蛋白。Repeat2 在 FDR 为 1.0%时,共鉴定到 33,004 Spectral,15,800条肽,1,581个蛋白。取2个及2个以上肽段支持的蛋白作为分析的结果。结果表明,Repeat1共有1,234个蛋白,Repeat2共有1,210个蛋白。根据上述得到的结果,将两次实验得到的蛋白进行分类,分为上调和下调,将ratio值大于1.2的标为上调,小于0.8的标为下调,去除只有一次鉴定到的且趋势不一致的蛋白,剩余蛋白分为五组:在稻瘟菌侵染24小时和48小时后,蛋白表达量在两个时间段都上调的一组共121个蛋白;稻瘟菌侵染24小时和48小时后,蛋白表达量有一时间段上调的一组共26个蛋白;稻瘟菌侵染24小时和48小时后,蛋白表达量有一时间段下调的一组共34个蛋白;稻瘟菌侵染24小时和48小时后,蛋白表达量有一时间段上调且另一时间段下调的一组共43个蛋白;稻瘟菌侵染24小时和48小时后,蛋白表达量两个时间段都下调的一组共148个蛋白。对差异表达蛋白进行生物信息学分析、GO分类和KEGG-pathway分析,结果表明,这些差异表达蛋白共在79个通路中起着关键作用,参与较多的为光合作用途径;对差异表达蛋白进行分泌蛋白分析,发现其中61个蛋白具有信号肽,可能为分泌蛋白。进行GO enrichment分析时,发现在TCA循环、NADP代谢过程、异构酶活性等15个分类中有富集;我们还将这些蛋白进行网络互作分析,通过string在线分析发现,有314个功能被String数据库收录,分析显示,这314个蛋白存在相互作用,有两类蛋白发生聚类现象,对这些蛋白进行分析发现这两类蛋白分别为:一类为光合相关蛋白,另一类为核糖体相关蛋白。这两类蛋白在水稻中起着重要功能,光合相关蛋白参与光合作用,提供能量;核糖体蛋白与转录调控有关。提示在稻瘟菌侵染水稻时,这两类蛋白发生了变化,参与了水稻拮抗稻瘟菌的过程。在水稻受稻瘟菌侵染不同时间段表达差异的蛋白中,发现胰蛋白酶抑制剂含量显著上升。定量PCR分析结果表明,编码胰蛋白酶抑制剂基因在mRNA水平也显著上升。胰蛋白酶抑制剂是一类能够抑制蛋白水解酶活性的蛋白质,该蛋白能与蛋白酶的活性部位和变构部位结合,抑制酶的催化活性或阻止酶原转化为有活性的酶。因此它具有防止体内不必要的蛋白降解,调节蛋白代谢及调节各种蛋白酶生理活性的功能。很多植物的胰蛋白酶抑制剂还具有抑制某些病原微生物及某些昆虫体内蛋白酶的作用,是植物体的一种自然防御体。有

关键词：水稻稻瘟菌定量蛋白质组同位素相对标记与绝对定量技术 LC-MS/MS 定量PCR

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寻常型银屑病湿热证与血热证的差异血清蛋白质组学表达初探

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中华中医药杂志 2016年第2期31卷 428-431页

作者：郝平生杨川张婧杨剑李天浩成都中医药大学附属医院成都610072 成都中医药大学成人教育学院成都610075

目的:应用同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)技术对寻常型银屑病(血热证、湿热证)患者与健康人差异且共有蛋白进行分析,探求两证之间差异性表达蛋白,从蛋白质组学角度揭示两证之间差异。方法:取寻常型银屑病血热证、湿热证患者血清,... 详细信息

目的:应用同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)技术对寻常型银屑病(血热证、湿热证)患者与健康人差异且共有蛋白进行分析,探求两证之间差异性表达蛋白,从蛋白质组学角度揭示两证之间差异。方法:取寻常型银屑病血热证、湿热证患者血清,予纯化等处理后,SDS-PAGE电泳分离,经i TRAQ特异性标记酶解后的肽段,采用串联质谱分析与健康人比较寻找差异且两证共有蛋白,并将这些蛋白进行组间比较。结果:发现了19个显著性差异蛋白(P<0.05),其中,强显著性差异的蛋白有6个(P<0.01)。结论:寻常型银屑病血热证与湿热证血清中存在表达差异性蛋白质,如糖蛋白类、脂蛋白类、免疫类等。是否为证型之间的特征性差异蛋白,有待进一步证实。

关键词：银屑病血热证湿热证蛋白质组学同位素相对标记与绝对定量技术

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基于蛋白组学iTRAQ与双抗体夹心试纸条检测技术的蜂蜜真实性研究

基于蛋白组学iTRAQ与双抗体夹心试纸条检测技术的蜂蜜真实性研究

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作者：张一帆浙江大学

学位级别：硕士

蜂蜜作为营养丰富的天然食品和保健品，深受全球消费者喜爱，但它却是一种极易掺假的食品，因此研究蜂蜜真伪检测技术长期深受关注。现有蜂蜜检测标准技术虽然在一定程度上能够有效鉴别蜂蜜真伪，有利于蜂蜜质量控制，但由于现实中鉴别... 详细信息

蜂蜜作为营养丰富的天然食品和保健品，深受全球消费者喜爱，但它却是一种极易掺假的食品，因此研究蜂蜜真伪检测技术长期深受关注。现有蜂蜜检测标准技术虽然在一定程度上能够有效鉴别蜂蜜真伪，有利于蜂蜜质量控制，但由于现实中鉴别分析技术常常落后于掺假技术，导致难以彻底杜绝蜂蜜掺假。近年来，基于蛋白组学和代谢组学的生物标志物研究应用在相关领域非常普遍，但尚未见应用于蜂蜜真伪和花蜜鉴别的研究报道。本文以蜂蜜中的内源物质王浆主蛋白(MRJPs)为研究对象，开展了不依赖于添加到蜂蜜中的外源物质，针对蜂蜜特有成分的分析鉴别新技术研究，建立了基于蛋白组学的iTRAQ技术以及双抗体夹心胶体金免疫试纸条的检测方法。　　1、应用质谱搜索候选标记多肽　　通过毛细管液相色谱串联轨道阱高分辨质谱的方法检测分析蜂蜜中的王浆蛋白，分析了所选蛋白质消化后的每个候选体特征肽的数量变化。通过网络和软件得到了包含9个蜂王浆主蛋白（MRJP1-9)的蛋白质一级序列数据库，共选择了45种肽，其中9种属于MRJP1，13种属于MRJP2，10种属于MRJP3，8种属于MRJP4，3种属于MRJP5，3种属于MRJP6，5种属于MRJP7，1种属于MRJP8，2种属于MRJP9。　　2、候选标记多肽筛选　　开展了44种选择的肽（其中MRJP2的YFDYDFGSEER多肽轻重标记都不出峰，所以舍去）消化性分析，根据它们的消化率和稳定性，分为4类。其中17种A型肽具有高消化效率且稳定，属于最佳选择的标记肽：EYILVLSNK、SLPILHEWK、FFDYDFGSDER、LLTFDLTTSQLLK、IVSAFK、ILGANVK、LHVFDLK、SLNVIHEWK、YDGVPSTLNVISGK、IVNDDFNFDDVNFR、LLTFDLK、LTVAGESFTVK、IAIDEYER、LFAFDLNTSQLLK、ILIGGVSD LLENTR、LLVFDLNSSQLIK、ILNNDLNFNDINFR。　　3、候选标记多肽酶解条件优化　　通过胰蛋白酶、DTT用量和反应温度三个变量控制来设计实验，研究了结构对消化率的影响。酶解分离方法优化，得到了最佳酶解条件为：400μg/mL的胰蛋白酶，200mM的DTT，50℃作为反应温度。　　4、双抗体夹心试纸条的多克隆抗体的效价检测　　通过间接法ELISA分析，显示SP-1和SP-2两种抗体在80000倍稀释度下的OD值分别是阴性对照的6.73倍和7.71倍，说明这两种抗体对MRJP1具有很高的结合活性，符合免疫学实验的效价标准。基于这两种抗体的夹心法ELISA的分析结果，建立了检测MRJP1含量的标准曲线：y=0.1528x+1.4232（R2=0.996），夹心法ELISA检测MRJP1含量的范围为2-10μg/mL。　　5、双抗体夹心试纸条制备技术优化　　考虑到所需能见度和空间位阻之间的平衡关系，选用了粒径为40nm的胶体金。pH=8.6为目标蛋白带正电荷的最佳pH值，确定了与胶体金结合的多抗SP-1的最佳量为5μg。　　6、双抗体夹心试纸条检出限及掺假蜂蜜检测验证　　采用所制备试纸条分别检测了MRJP含量为2、4、6、8、10μg/mL的标准液和空白对照。验证检测结果表明MRJP1的试纸条的最低检出限是2μg/mL。用蜂王浆、紫云英蜜和洋槐蜜样品分别作检测验证，试纸条都出现了C线，显示出试纸条的有效性。同时，验证试验显示所用试纸条均出现清晰的T线，说明所检测样品中均含有MRJP1。进一步作蜂蜜掺假检验，结果显示，当测试溶液中的蜂蜜浓度高于30％时，C线和T线的显色稳定;当蜂蜜浓度低于30％时，T线变得难以辨认，但是部分不含蜂蜜的试纸条仍有T线显示，这表明高浓度蜂蜜强烈地影响了在NC膜上的胶体金标记的抗体，而低浓度则会产生部分假阳性。

关键词：蜂蜜真伪检测蛋白质组学同位素相对标记与绝对定量技术双抗体夹心试纸条

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