检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：李壮壮北京协和医学院

学位级别：硕士

和血止痒方为临床经验方,在“治风先治血,血行风自灭”的治法治则基础上经四物汤、止痒散和黄芪防风汤化裁而来,由当归、黄芪、川芎、白芍、防风、生地黄、丹参、苦参及地肤子九味药组成,用于治疗血虚风燥所致的皮肤瘙痒症。本文从补血... 详细信息

和血止痒方为临床经验方,在“治风先治血,血行风自灭”的治法治则基础上经四物汤、止痒散和黄芪防风汤化裁而来,由当归、黄芪、川芎、白芍、防风、生地黄、丹参、苦参及地肤子九味药组成,用于治疗血虚风燥所致的皮肤瘙痒症。本文从补血活血作用、止痒作用、抗炎作用和免疫抑制作用四个层面对其进行药效评价;采用UPLC-MS/MS高分辨质谱技术对该方的主要化学成分及其入血原型成分进行鉴定;依据入血成分分析对主要成分进行定量,确定质量控制指标及标准,并对各个药味进行薄层鉴别。1.和血止痒方药效学评价通过皮下注射乙酰苯肼制备小鼠血虚模型,连续给药15 d,末次给药30 min,眼眶采血,测定全血RBC、HCT、HGB值。结果显示,与空白组相比,模型组动物外周血中HCT、RBC和HGB含量显著降低(P<0.01);同时皮下注射乙酰苯肼后,小鼠基本体征出现血虚证的症状,表明血虚疾病造模成功;与模型组比较,低剂量组显著提高了小鼠外周血中RBC、HCT和HGB的含量(P<0.01)。表明和血止痒方具有一定的改善小鼠血虚作用。通过尾静脉注射0.05%右旋糖酐诱导小鼠瘙痒,记录30min内小鼠瘙痒次数及持续时间。结果显示,尾静脉注射右旋糖酐可明显增加小鼠瘙痒次数(P<0.01)和瘙痒总时间(P<0.05),表明瘙痒模型造模成功;此外,三个剂量组均能缓解小鼠瘙痒症状,与对照组相比,低剂量组显著降低了小鼠瘙痒次数和瘙痒总时间(P<0.05),中剂量组和高剂量组在瘙痒次数、瘙痒时间和瘙痒总时间与模型组相比有极显著性差异(P<0.01),其中高剂量组效果最佳。通过毛细管通透性实验构建小鼠急性炎症模型,尾静脉注射0.5%伊文斯蓝液(Evans Blue),腹部皮下注射0.1%磷酸组胺,剪下小鼠腹部蓝色皮肤,剪碎后浸泡于5 ml丙酮:生理盐水(7:3)中24 h,离心(3 000 rpm,15 min)后取上清液于610nm下测定其吸光度。结果显示,与对照组相比,低剂量组能显著抑制磷酸组胺引起的小鼠毛细血管通透性增加(P<0.05),中剂量组与高剂量组具有极显著抑制作用(P<0.01),且中剂量组效果最佳。免疫抑制实验选择迟发型超敏反应和碳粒廓清实验。迟发性超敏反应:给药前除正常对照组外,各组小鼠腹部去毛处均匀涂抹0.5%的2,4-二硝基氟苯(DNFB)致敏,给药三天强化一次,末次给药1h,将0.2%DNFB丙酮橄榄油溶液均匀涂于小鼠右耳激发,左耳涂抹丙酮橄榄油,激发24～48h。结果发现,与空白组相比,模型组小鼠右耳肿胀度显著升高(P<0.01),脾脏指数显著升高(P<0.05)。与模型组相比各给药组小鼠耳肿胀度显著降低,其中低剂量组与模型组有极显著性差异(P<0.01),表明和血止痒方对DNFB所致的迟发性超敏反应模型有明显抑制作用,但是对DTH小鼠的脏器指数作用不大。碳粒廓清实验:连续给药14d,末次给药30 min后,尾静脉注射印度墨汁0.05 ml/10 g体重,分别在注射2 min和20 min使用定量采血管取血20 μ1溶于2 ml 0.1%Na2CO3,摇匀后于640 nm测定OD值。结果显示,与空白组相比,各给药组可降低碳粒廓清指数和吞噬指数,其中中剂量组具有极显著差异(P<0.01)。综上,和血止痒方具有改善血虚、止痒、抗炎以及一定的抑制免疫作用。2.基于LC-MS的和血止痒方主要化学成分及入血成分研究采用UPLC-Q-Exactive轨道肼高分辨质谱技术,鉴定和血止痒方主要化学成分,通过优化液相条件以及色谱柱,实现中药复方复杂体系中化学成分的分离和分析。为了获得更为全面的化合物信息,采用正、负离子模式进行检测,根据一级、二级MS/MS高分辨数据,结合数据库和文献报道,共鉴定出160个色谱峰,主要为苯丙素类、苯酞类、生物碱类、萜类、苷类、黄酮类以及有机酸类化合物,全面解析了和血止痒方的化学成分。由于存在某些成分来源不明的情况,故又对各单味药在同条件下进行化学成分分析,确定各成分来源。同时对经口给药大鼠血浆同样采用UPLC-Q-Exactive轨道肼高分辨质谱技术分析其入血成分,发现42个和血止痒方原型成分。上述结果为和血止痒方的作用机制及质量控制研究提供了基础。3.和血止痒方6种成分定量分析及薄层鉴别定量采用超高相液相(UPLC)分析和血止痒方中阿魏酸、芍药内酯苷、升麻素、升麻素苷、洋川芎内酯H和毛蕊异黄酮6个主要成分的含量。结果显示,在考察的浓度范围内,目标成分线性关系良好(R2>0.9958),精密度RSD<2.98%,重复性RSD<2.93%,回收率(n=9)均在92.06%～110.58%,RSD均小于3.91%,结果表明,该方法灵敏度高、重现性好,分析快速、准确、可靠,可用于定性、定量检测和血止痒方主要化学成分;采用TLC法,建立了和血止痒方中

关键词：和血止痒方血虚风燥型瘙痒药效评价化学成分分析质量控制

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基于UPLC-QE-Orbitrap-MS的和血止痒方化学成分表征

引用

中国现代中药 2021年第9期23卷 1542-1553页

作者：李壮壮常晓燕金唯一吴嘉朔张方晴石钺中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所北京100193 河北医科大学河北石家庄050017

目的:采用超高效液相色谱-四级杆-静电轨道串联高分辨质谱法(UPLC-QE-Orbitrap-MS)对和血止痒方的化学成分进行表征。方法:采用沃特世ACQUITY UPLC@Hss T3型色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以乙腈-0.1%甲酸为流动相梯度洗脱,流速为0... 详细信息

目的:采用超高效液相色谱-四级杆-静电轨道串联高分辨质谱法(UPLC-QE-Orbitrap-MS)对和血止痒方的化学成分进行表征。方法:采用沃特世ACQUITY UPLC@Hss T3型色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以乙腈-0.1%甲酸为流动相梯度洗脱,流速为0.2 mL·min^(-1);采用加热电喷雾离子源(HESI),正、负离子模式分别进行一级、二级质谱数据采集;采用数据库和文献报道对和血止痒方的化学成分进行表征。结果:在和血止痒方中共鉴定出92个化合物,结合数据库和文献报道对其中67个化合物进行初步表征,包括萜类、苯丙素类、有机酸类、苯酞类、生物碱类、黄酮类及其他类,并对化合物的药材来源进行归属。结论:该方法灵敏度高,分析快速,结果准确、可靠,能够全面快速地分析和鉴定和血止痒方中的化学成分,为其进一步的药效物质基础及质量控制研究提供了参考。

关键词：和血止痒方超高效液相色谱-四级杆-静电轨道串联高分辨质谱法成分分析

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