检索结果-内蒙古大学图书馆

中国免疫学杂志 2024年第6期40卷 1259-1264页

作者：张鑫王辉许剑锋上海海洋大学食品学院农业部水产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室(上海)上海201306 启东凯默纳米生物医药有限公司启东226200

目的:产KPC-2型肺炎克雷伯菌可引起β-内酰胺类抗生素、碳青霉烯类抗生素产生耐药性。通过噬菌体展示技术从抗KPC-2纳米抗体文库中筛选与KPC-2特异性结合的纳米抗体,为产KPC-2型肺炎克雷伯菌耐药性的检测和诊断提供技术支持。方法:利用... 详细信息

目的:产KPC-2型肺炎克雷伯菌可引起β-内酰胺类抗生素、碳青霉烯类抗生素产生耐药性。通过噬菌体展示技术从抗KPC-2纳米抗体文库中筛选与KPC-2特异性结合的纳米抗体,为产KPC-2型肺炎克雷伯菌耐药性的检测和诊断提供技术支持。方法:利用重组KPC-2免疫双峰骆驼,从骆驼的外周血淋巴细胞中提取RNA,逆转录为cDNA,通过两轮嵌套式PCR扩增出纳米抗体片段,构建抗体文库,并通过噬菌体展示技术筛选特异性纳米抗体。通过HPLC和OCTET分别进行表位分析和亲和力测定。结果:构建了一个库容为5.47×10^(8)cfu/ml且插入有效片段不低于81.25%的纳米抗体文库;并建立抗KPC-2纳米抗体的免疫淘选方法;获得了2个不同CDR3区的纳米抗体K2和K5,亲和力分别为6.0 nmol/L和4.8 nmol/L。且在KPC-2上具有2个非竞争性结合表位。结论:成功淘选出2个不同表位的特异性纳米抗体,有望替代传统抗体用于肺炎克雷伯菌耐药性疾病的检测和诊断。

关键词：纳米抗体噬菌体展示技术 KPC-2型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌

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应用噬菌体展示技术(12肽文库)进行蓝舌病1型病毒VP2蛋白型特异性表位分析

应用噬菌体展示技术(12肽文库)进行蓝舌病1型病毒VP2蛋白型特异性...

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中国畜牧兽医学会2014年学术年会

作者：宋建领熊和丽王金萍苗海生云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室

引言蓝舌病是由蓝舌病病毒引起的严重危害牛、羊等反刍动物的虫媒病毒病,其中蓝舌病病毒VP2蛋白决定其型特异性,不同型之间抗体不能交叉保护其他型病毒感染。1979年在云南首次分离获得的蓝舌病1型病毒是我国流行的主要血清型,历史上曾... 详细信息

引言蓝舌病是由蓝舌病病毒引起的严重危害牛、羊等反刍动物的虫媒病毒病,其中蓝舌病病毒VP2蛋白决定其型特异性,不同型之间抗体不能交叉保护其他型病毒感染。1979年在云南首次分离获得的蓝舌病1型病毒是我国流行的主要血清型,历史上曾引发我国绵羊发病、死亡。本研究应用蓝舌病1型病毒型特异性抗体淘选噬菌体展示的12肽随机肽库,采用ELISA、竞争ELISA分析不同噬菌体拟位与蓝

关键词：型特异性 VP2 噬菌体展示技术肽文库

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鼠源抗ALV-p27单链抗体噬菌体文库的构建与筛选

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中国动物传染病学报 2025年

作者：薛希彤范梦雅孟子毅芮萍李封赛杨姗姗杨义王林雨王洪涛张剑檀卫东马增军王丽丽宋涛河北科技师范学院动物科技学院河北省预防兽医学重点实验室秦皇岛野生动物园

为获取与禽白血病病毒（ALV）p27抗原高亲和力结合的特异性单链抗体（scFv），本研究以ALV-p27蛋白免疫的BALB/c小鼠脾淋巴细胞为材料，提取RNA，反转录并扩增抗体可变区基因，通过SOE-PCR技术成功构建了抗ALV-p27鼠源scFv噬菌体展示文... 详细信息

为获取与禽白血病病毒（ALV）p27抗原高亲和力结合的特异性单链抗体（scFv），本研究以ALV-p27蛋白免疫的BALB/c小鼠脾淋巴细胞为材料，提取RNA，反转录并扩增抗体可变区基因，通过SOE-PCR技术成功构建了抗ALV-p27鼠源scFv噬菌体展示文库。经过三轮生物淘选，筛选出6株高亲和力scFv抗体，并将其序列插入pCAGGS-Fc载体，在HEK293T细胞中共转染表达。最终，通过间接ELISA筛选并在HEK293F细胞中高效表达抗ALV-p27 scFv的Fc融合抗体，并利用Western blot和IFA方法验证了抗体表达及其与p27蛋白的特异性结合。结果显示，构建的文库滴度为2.0×1012pfu/mL，筛选出的5株抗体成功表达，其中4株具有特异性结合能力。本研究成功构建了抗ALV-p27鼠源scFv噬菌体展示文库，筛选并制备了特异性scFv，为开发ALV-p27检测试剂盒奠定了实验基础。

关键词： ALV-p27 噬菌体展示技术单链抗体真核表达

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纳米抗体结构特性及在传染病治疗方面研究进展

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中国公共卫生 2024年第2期40卷 252-256页

作者：张欣邓瑞新刘建青包头师范学院生态环境学院包头市014030 天津农学院食品科学与生物工程学院天津市300392

病原微生物可以引起各种各样的传染性疾病,近年来埃博拉出血热、新冠病毒感染、疟疾等传染病疫情的大规模暴发,促使人们寻求更加简洁有效的方法治疗烈性传染病。纳米抗体是在骆驼血清中重链抗体上发现的VHH结构域,其分子量低至12~15 kDa... 详细信息

病原微生物可以引起各种各样的传染性疾病,近年来埃博拉出血热、新冠病毒感染、疟疾等传染病疫情的大规模暴发,促使人们寻求更加简洁有效的方法治疗烈性传染病。纳米抗体是在骆驼血清中重链抗体上发现的VHH结构域,其分子量低至12~15 kDa,仅为传统抗体的1/10,是目前能得到的可稳定与抗原结合的最小的功能单结构域抗体,因其分子质量小、组织穿透性强、特异性亲和力高、能识别缝隙表位、低免疫原性、水溶性高、稳定性强、生产简单、易于表达等优点,使得纳米抗体成为可满足研究、诊断和治疗各种要求的新型抗体。本文介绍了纳米抗体的结构及特性,概述了其在传染病治疗方面的应用进展,为未来发展研究提出参考借鉴。

关键词：纳米抗体噬菌体展示技术核糖体展示技术传染病治疗

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人源性抗SARS-CoV-2单链抗体文库的构建及广谱中和抗体的筛选与鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2025年第2期41卷 154-160页

作者：尹慧敏吕海迟莹刘静娴焦永军卫平民东南大学公共卫生学院环境医学工程教育部重点实验室江苏省疾病预防控制中心卫生与健康委员会肠道病原微生物重点实验室江苏南京210009

目的构建人源性抗严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)单链可变片段(scFv)抗体文库,并筛选具有广谱中和活性的抗体,为诊断和治疗制剂的开发提供候选分子。方法从新型冠状病毒感染康复者外周血中分离单个核淋巴细胞(PBMC),提取总RNA... 详细信息

目的构建人源性抗严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)单链可变片段(scFv)抗体文库,并筛选具有广谱中和活性的抗体,为诊断和治疗制剂的开发提供候选分子。方法从新型冠状病毒感染康复者外周血中分离单个核淋巴细胞(PBMC),提取总RNA,逆转录成cDNA,以此为模板构建人源性抗SARS-CoV-2 scFv抗体文库;利用噬菌体展示技术筛选对SARS-CoV-2 S蛋白具有特异性的scFv抗体。通过序列分析和人源IgG抗体表达,合成IgG全抗体,并评估其对SARS-CoV-2的结合能力及中和活性。结果成功构建了库容量为1.56×10^(7)CFU的SARS-CoV-2人源性scFv抗体文库,筛选出两种特异性scFv抗体;并将scFv抗体表达成IgG形式的全抗体(IgG-A10和IgG-G6),其中IgG-A10对SARS-CoV-2原始株(WT)和奥密克戎亚型变异毒株XBB(XBB)毒株均具有较好中和活性,对奥密克戎BA.2.86变异株的第二代亚分支JN.1(JN.1)毒株中和效果一般。结论本研究从康复者外周血中成功构建了人源性抗SARS-CoV-2 scFv抗体文库,并筛选表达出具有中和活性的抗SARS-CoV-2 IgG抗体,为SARS-CoV-2感染的预防、诊断和治疗奠定了基础。

关键词： SARS-CoV-2 单链可变片段(scFv) 噬菌体展示技术中和抗体

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牛乳乳清中主要过敏原的B细胞表位定位

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食品科学 2022年第20期43卷 148-156页

作者：胡永芯谭宏凯胡巍熊子奕袁娟丽潘丽娜汪家琦李欣南昌大学食品科学与技术国家重点实验室江西南昌330047 南昌大学食品学院江西南昌330047 南昌大学药学院江西南昌330047 澳优乳业(中国)有限公司湖南长沙410005

采用噬菌体展示技术结合生物信息学定位牛乳α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的B细胞表位,分析不同类型表位之间的氨基酸组成和空间分布规律。结果表明,某些线性表位是构象性表位的组成部分,IgE与IgG表位存在共同区域。本研究得到的表位是牛乳... 详细信息

采用噬菌体展示技术结合生物信息学定位牛乳α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的B细胞表位,分析不同类型表位之间的氨基酸组成和空间分布规律。结果表明,某些线性表位是构象性表位的组成部分,IgE与IgG表位存在共同区域。本研究得到的表位是牛乳过敏诊断和预后的候选生物标志物,也可用于指导于低致敏性乳制品的开发。

关键词：乳白蛋白 β-乳球蛋白线性表位构象性表位噬菌体展示技术

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人乳头瘤病毒16型纳米抗体的筛选及鉴定

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中国肿瘤生物治疗杂志 2024年第12期31卷 1211-1217页

作者：王若瑜白崇智仲启明范瑞文牛林茹韩鹏程山西省中医药研究院中心实验室山西太原030000 山西农业大学羊驼生物工程实验室山西太谷030801 君研生物科技(山西)有限公司山西太原030000 东南大学附属中大医院医学院江苏南京210000

目的:构建人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1蛋白纳米抗体初级文库,通过筛选鉴定获得一株HPV16 L1特异性纳米抗体。方法:以HPV 16 L1蛋白为抗原对羊驼进行免疫,采用噬菌体展示技术构建初级抗体文库。经3轮淘选,采用ELISA法鉴定阳性克隆,将阳性... 详细信息

目的:构建人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1蛋白纳米抗体初级文库,通过筛选鉴定获得一株HPV16 L1特异性纳米抗体。方法:以HPV 16 L1蛋白为抗原对羊驼进行免疫,采用噬菌体展示技术构建初级抗体文库。经3轮淘选,采用ELISA法鉴定阳性克隆,将阳性反应最强克隆的VHH序列进行真核表达。经亲和纯化、凝胶过滤层析纯化、SDS-PAGE和WB法鉴定,获得目的纳米抗体;采用表面等离子共振(SPR)技术检测纳米抗体与HPV 16 L1蛋白之间的亲和力,CCK-8法检测纳米抗体对人永生化角质细胞HaCat的毒性,荧光素酶报告基因实验检测纳米抗体对HPV 16假病毒的中和活性。结果:初级文库库容为1.304×10^(10),丰度为6.5×10^(9)个/mL,ELISA法鉴定获得36个阳性克隆。表达、纯化获得蛋白单体与二聚体,经鉴定为目的纳米抗体(命名为Nb)。Nb与HPV 16 L1蛋白结合的亲和力为35.41 nmol/L。Nb实验组HaCat细胞增殖活力与空白组没有显著差异(P>0.05)。与阴性组比较,0.1和1μmol/L Nb均能抑制假病毒感染293FT细胞(均P<0.01)。结论:成功获得一株纯度较好、亲和力较高,对上皮细胞没有明显毒性作用、有效抑制HPV 16假病毒感染293FT细胞的纳米抗体Nb,为防治HPV 16感染提供了有效的候选抗体类药物。

关键词：人乳头瘤病毒16型噬菌体展示技术纳米抗体亲和力

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猪肠道α冠状病毒CTD蛋白纳米抗体的筛选与鉴定

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中国动物传染病学报 2024年

作者：文晓晓唐国瑞张香斋魏璨储丽宇王毅季裕婷芮萍杨姗姗王丽丽李封赛马增军宋涛河北科技师范学院动物科技学院河北省预防兽医学重点实验室

猪肠道α冠状病毒（PEAV）是新发现的主要感染并引起仔猪快速发病且高致死率的第五种猪冠状病毒，对猪养殖业的发展具有潜在威胁；且其具有广泛的细胞嗜性，对人类的健康安全存在一定的危险性。本研究以真核表达纯化的PEAV CTD蛋白作为... 详细信息

猪肠道α冠状病毒（PEAV）是新发现的主要感染并引起仔猪快速发病且高致死率的第五种猪冠状病毒，对猪养殖业的发展具有潜在威胁；且其具有广泛的细胞嗜性，对人类的健康安全存在一定的危险性。本研究以真核表达纯化的PEAV CTD蛋白作为抗原，利用噬菌体展示技术，从纳米抗体的天然噬菌体文库中筛选得到了24株纳米抗体，成功构建了带有人源抗体重链恒定区的真核表达质粒，并在HEK-293T细胞上瞬时转染试表达了这24株抗体。酶联免疫吸附试验和蛋白免疫印记试验结果显示有12株抗体能够正常表达且效价较高。间接免疫荧光试验（IFA）鉴定其中6株抗体与PEAV S蛋白具有结合活性，为PEAV的理论研究和临床检测奠定了基础。

关键词： PEAV CTD 真核表达噬菌体展示技术纳米抗体

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抗分选连接蛋白16纳米抗体的开发及初步应用研究

抗分选连接蛋白16纳米抗体的开发及初步应用研究

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作者：陈海伦南昌大学

学位级别：硕士

研究背景和目的:纳米抗体(Nanobody,Nb)是目前已知的最小抗原结合片段,源于骆驼科或鲨鱼科的天然重链抗体,通过基因工程改造而获得,其分子量仅为传统Ig G抗体的十分之一(12～15 k Da)。Nb虽然结构简单,但仍然可以达到与传统单抗相当,甚... 详细信息

研究背景和目的: 纳米抗体(Nanobody,Nb)是目前已知的最小抗原结合片段,源于骆驼科或鲨鱼科的天然重链抗体,通过基因工程改造而获得,其分子量仅为传统Ig G抗体的十分之一(12～15 k Da)。Nb虽然结构简单,但仍然可以达到与传统单抗相当,甚至更高的亲和力。此外,相比于传统单抗,Nb还具有稳定性强、易于重组表达及改造等优点。近年来在生命科学、医学诊断、食品安全检测以及环境监控等领域获得越来越多的关注。 SNX16作为分选连接蛋白(Sorting Nexin,SNX)家族成员中的一种,含有保守序列PX结构域-吞噬细胞氧化酶同源性结构域(Phoxhomology,PX),参与蛋白分选及定位、信号转导等过程,与结直肠癌、乳腺癌、膀胱癌、动脉粥样硬化、心力衰竭、炎症、先兆子痫、肥胖等多种疾病的发生发展过程密切相关。本研究院前期开展了多项关于SNX16的研究,发现SNX16通过调控心肌细胞EGFR/ERK1/2信号通路的活性,参与心肌肥大的发生发展过程;通过IR/PI3K/AKT信号通路调节胰岛β细胞中胰岛素的合成和分泌,参与机体血糖稳态的调节;心肌细胞SNX16缺失明显缓解了ISO诱导的心脏纤维化,而髓系特异性敲除SNX16可显著增加ISO诱导的心脏纤维化。现有研究表明均SNX16是一个重要的疾病调控靶点,对其进行深入研究具有重要的意义。然而在SNX16的研究上,存在一个不佳的局面,即商业化SNX16抗体种类较少、效果不佳且价格昂贵。市面上SNX16抗体主要是多克隆抗体,容易出现批次间差异的情况,严重影响了SNX16在基础医学、疾病诊断领域的研究。本课题通过噬菌体展示等技术制备获得SNX16纳米抗体,并验证了其特异性和亲和力,期望为SNX16相关研究提供高性能的抗体试剂。实验方法与结果: 1、SNX16抗原蛋白的制备:构建p ET22b-SNX16质粒并在大肠杆菌中表达,随后通过镍柱亲和层析方法纯化获得SNX16蛋白。经过SDS-PAGE和Western Blot验证,成功获得纯度较高的SNX16蛋白,其可作为靶标蛋白对天然纳米抗体噬菌体展示文库进行淘选。 2、SNX16纳米抗体的淘选及鉴定:利用噬菌体展示技术进行四轮淘选,随后通过phage-ELISA及Western Blot鉴定获得阳性克隆。经过测序鉴定获得13条独特性SNX16纳米抗体序列。 3、纳米抗体的验证:利用原核表达纯化的SNX16蛋白和真核表达的SNX16-EGFP融合蛋白通过Western Blot验证SNX16纳米抗体。结果筛选出两个与SNX16结合特异性高,灵敏性强的SNX16纳米抗体,分别为SNX16-4-2纳米抗体、SNX16-4-13纳米抗体。 4、SNX16七价纳米抗体的开发:为了提高上述两株纳米抗体的亲和力,通过同源重组方法将其基因连接到p ET22b-C4bpα-SBP质粒上,利用自诱导方法诱导蛋白表达和镍柱纯化蛋白,并通过SDS-PAGE和Western Blot对纯化的七价纳米抗体蛋白进行验证。成功获得特异性高,灵敏性强的七价SNX16-4-2纳米抗体、SNX16-4-13纳米抗体。 5、噬菌体展示纳米抗体突变文库的构建及突变子的筛选:为了进一步提高上述两株纳米抗体的亲和力,利用易错PCR等技术构建噬菌体展示纳米抗体突变文库。成功构建了库容量约为10～7pfu的SNX16-4-2、SNX16-4-13噬菌体展示纳米抗体突变文库。通过phage-ELISA及Western Blot鉴定筛选到4个结合原核表达的SNX16蛋白的突变子,分别为4-2-6、4-2-29、4-13-1、4-13-31纳米抗体。 6、对纳米抗体的亲和力测定:利用非竞争性ELISA方法对七价4-2、4-13纳米抗体以及它们的突变子七价4-2-6、4-2-29、4-13-1、4-13-31纳米抗体进行了亲和力测定。七价4-2纳米抗体的亲和力达到3.15*10～7 L/mol、七价4-13纳米抗体的亲和力达到1.44*10～7 L/mol;七价4-2-6、4-2-29、4-13-1纳米抗体的亲和力有所降低,七价4-13-31纳米抗体亲和力提高了10%,为1.58*10～7 L/mol。结论: 1、本课题通过大肠杆菌原核表达系统及镍柱亲和层析纯化系统,成功获得纯度较好的SNX16抗原蛋白。 2、本课题从天然纳米抗体噬菌体展示文库中成功筛选获得13条独特性SNX16纳米抗体序列,为后续筛选抗SNX16的纳米抗体打下良好的基础。 3、本课题通过两种策略来提高纳米抗体的亲和力。一是利用蛋白自组装技术开发七价纳米抗体;二是利用易错PCR技术构建噬菌体展示纳米抗体突变文库。经Western Blot验证七价4-2纳米抗体、七价4-13纳米抗

关键词： SNX16 噬菌体展示技术纳米抗体随机突变

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肠炎沙门氏菌噬菌体单链抗体库的构建及其检测肠炎沙门氏菌的研究

肠炎沙门氏菌噬菌体单链抗体库的构建及其检测肠炎沙门氏菌的研究

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作者：倪畅扬州大学

学位级别：硕士

沙门氏菌(Salmonella),是肠杆菌科(Enterbacteriaceae)中一种重要的人畜共患病原菌,能导致人食物中毒及动物疾病。我国的《食品安全国家标准食品中致病菌限量》(GB29921-2013)中规定,食品中不得检出沙门氏菌,因此发展常见致病性沙门氏... 详细信息

沙门氏菌(Salmonella),是肠杆菌科(Enterbacteriaceae)中一种重要的人畜共患病原菌,能导致人食物中毒及动物疾病。我国的《食品安全国家标准食品中致病菌限量》(GB29921-2013)中规定,食品中不得检出沙门氏菌,因此发展常见致病性沙门氏菌快速检测技术,可有效监控动物养殖环境及食品生产中的沙门氏菌污染,保障人民身体健康,维护动物健康养殖。噬菌体展示技术是筛选复杂靶标抗体和研发特定疾病新药的有效工具,基于该技术所构建出的噬菌体抗体库,可在噬菌体表面展示大量抗体片段,实现针对性的高特异、高亲和抗体筛选。目前单链抗体(scFv)是较常用于噬菌体抗体库构建的重组抗体,其在保留原始抗体分子识别和结合特定抗原能力的同时减小了抗体分子尺寸和分子量,与传统抗体相比,scFv可作为小分子载体应用于沙门氏菌的检测。本研究以肠炎沙门氏菌为免疫原,构建肠炎沙门氏菌鼠源噬菌体单链抗体库。经过多轮筛选后,从中筛选出6株与肠炎沙门氏菌具有较高反应性、特异性、亲和力的鼠源scFv,对其中特异性和亲和力最好的scFv-4进行原核表达并验证其特性。基于噬菌体单链抗体phage-scFv-4建立了一种针对沙门氏菌的phage ELISA检测方法,为肠炎沙门氏菌的检测、诊断提供了一种新的噬菌体单链抗体思路。 1.肠炎沙门氏菌噬菌体单链抗体文库的构建对肠炎沙门氏菌C50041进行鉴定以及纯化,探索其最佳灭活条件为0.3%甲醛、37℃、200 rpm孵育48 h,并将灭活后的肠炎沙门氏菌C50041作为免疫原对小鼠进行免疫。在经过三轮免疫后使用间接ELISA测定小鼠血清中肠炎沙门氏菌的特异性抗体效价,选取效价达到1:25600以上的小鼠提取脾细胞总RNA并进行反转录。根据IMGT数据库中公布的鼠源抗体基因设计重叠PCR引物,扩增获得肠炎沙门氏菌C50041鼠源抗体的VH、VL基因片段。利用重叠延伸PCR获得鼠源scFv基因库。将scFv基因插入pCANTAB5E载体并在宿主菌TG1中扩增,经M13KO7辅助噬菌体侵染后成功构建肠炎沙门氏菌免疫鼠源噬菌体单链抗体文库。 2.肠炎沙门氏菌噬菌体单链抗体库的富集筛选及特性研究为获得C50041单链抗体,以灭活的肠炎沙门氏菌C50041为靶标抗原,经过3轮生物富集,筛选到6株能特异结合靶标抗原的噬菌体单克隆,其中以scFv-4的特异性、亲和力最好。将PCR鉴定阳性和测序正确的阳性质粒pET28a-scFv-4转化至大肠杆菌表达菌株*** BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后,对产生的包涵体蛋白进行复性,通过Ni-NTA凝胶柱纯化后获得高纯度的重组抗体蛋白pET28a-scFv-4。为了研究该重组抗体蛋白的特异性,采用噬菌体ELISA(phage ELISA)技术分别对肠炎沙门氏菌、不同血清型的沙门氏菌和其他肠科菌等进行鉴定。结果显示,pET28a-scFv-4对肠炎沙门氏菌具有良好的特异性,与沙门氏菌的其他血清学(如鸡白痢、鼠伤寒等)以及其他的肠科菌(如大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等)结合反应为阴性。Western Blot鉴定结果显示,scFv-4抗体蛋白能与肠炎沙门氏菌结合,进一步表明该抗体可以特异性识别肠炎沙门氏菌。 3.构建基于噬菌体单链抗体phage-scFv-4的phage ELISA检测方法基于重组噬菌体单链抗体phage-scFv-4构建针对沙门氏菌的phage ELISA检测方法,并对检测条件进行优化,确定其最佳检测条件为:最佳抗原包被浓度为108 CFU/mL(每孔100 μL),4℃包被过夜;重组噬菌体单链抗体phage-scFv-4最佳稀释倍数为1:600,37℃孵育2 h;HRP-anti-pⅧ二抗以1:10000的比例稀释后,37℃孵育1 h;15 min后终止显色反应。本研究建立的沙门氏菌phage ELISA检测法经验证显示出良好的重复性,可特异性检测出肠炎沙门氏菌,且最低检测限达到104 CFU/mL,表明该方法具备高灵敏度。综上所述,本课题构建了一个抗肠炎沙门氏菌的鼠源噬菌体单链抗体库,并利用固相化灭活肠炎沙门氏菌作为抗原筛选到1株特异性好、亲和力高的单链抗体,通过原核表达系统诱导表达得到重组抗体蛋白pET28a-scFv-4验证该单链抗体特异性良好,构建重组噬菌体单链抗体phage-scFv-4,并基于此建立了一种可特异性检测沙门氏菌的 phage ELISA 方法。

关键词：肠炎沙门氏菌单链抗体噬菌体展示技术 phage ELISA 沙门氏菌检测

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