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噬菌体展示技术及其在动物病毒学中的应用

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中国畜牧兽医 2011年第12期38卷 79-83页

作者：高顺平吴国华张强中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃省生物检测工程技术研究中心甘肃兰州730046

文章介绍了噬菌体展示技术的基本原理,分别阐述了单链丝状噬菌体、λ噬菌体、T4噬菌体及T7噬菌体展示系统的特点和用途,综述了近年来该技术在动物病毒学中的应用并对其发展前景进行了展望。

关键词：噬菌体展示技术动物病毒学应用

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噬菌体展示技术筛选bFGF抗原表位

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中国免疫学杂志 2003年第2期19卷 88-92页

作者：向军俭钟振宇杨红宇黄峙黄竞荷暨南大学生物工程学系广州510632

目的:以抗-bFGF单克隆抗体GF22为目标,用噬菌体随机七肽库进行筛选。经三轮筛选后的噬菌体阳性克隆能特异地抑制bFGF与CF22结合。测序结果表明与CF22结合的序列高度保守,为LP(P/L)GH(F/I)K,LPPGHFK与bFGF分子(155氨基酸)上22-27位氨基... 详细信息

目的:以抗-bFGF单克隆抗体GF22为目标,用噬菌体随机七肽库进行筛选。经三轮筛选后的噬菌体阳性克隆能特异地抑制bFGF与CF22结合。测序结果表明与CF22结合的序列高度保守,为LP(P/L)GH(F/I)K,LPPGHFK与bFGF分子(155氨基酸)上22-27位氨基酸一致,表明该序列在bFGF上是一个主要的抗原表位。用此序列的阳性噬菌体克隆免疫小鼠,发现此序列摸拟肽能诱导抗bFGF抗体反应,且序列LPLGHIK诱导的抗体反应比LPPCHFK序列强三倍,序列LPLGHIK可能作为一种有价值的肽疫苗诱导抗bFGF抗体的产生。

关键词：碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体 GF22 噬菌体展示技术抗原表位 LPLGHIK序列疫苗

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噬菌体展示技术筛选灵芝8蛋白配体短肽及其活性检测

噬菌体展示技术筛选灵芝8蛋白配体短肽及其活性检测

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作者：刘佳长春理工大学

学位级别：硕士

灵芝自古便是中国传统医学中的珍贵药材,具有滋补强身、扶正固本之效。在灵芝中提取的一些小分子物质如蛋白质,多糖等也有着免疫调节、抗肿瘤等功效。灵芝蛋白-8（LZ-8）是从灵芝菌丝体中提取出的一种真菌免疫调节蛋白。它的结构与功能... 详细信息

灵芝自古便是中国传统医学中的珍贵药材,具有滋补强身、扶正固本之效。在灵芝中提取的一些小分子物质如蛋白质,多糖等也有着免疫调节、抗肿瘤等功效。灵芝蛋白-8（LZ-8）是从灵芝菌丝体中提取出的一种真菌免疫调节蛋白。它的结构与功能与免疫球蛋白相似,具有广泛的免疫调节和抗肿瘤活性。因此,LZ-8可作为一种抗肿瘤药物,有着巨大的研发潜力。由于野生灵芝提取量低等原因,目前LZ-8的制备大多采用基因工程的方法,即重组灵芝-8（rLZ-8）。rLZ-8作为一种基因工程药物,其制备已经日趋成熟,但到目前为止还没有一套标准,快速的检测方法。因此,本文采取噬菌体展示技术筛选rLZ-8配体短肽的方法,建立对rLZ-8蛋白检测的方法,替代单克隆抗体,实现快速,便捷,实时检测rLZ-8,为抗肿瘤药物的检测提供一种新产品和生物学检测方法。本研究首先利用噬菌体展示技术,经过四轮筛选,得到与rLZ-8特异性结合的重组噬菌体。随机挑选克隆子进行ELISA鉴定并提取其ssDNA,进行测序及序列比对,得到一条与rLZ-8特异性结合较强的多肽L-T-P-H-K-H-H-K-H-L-H-A。合成该多肽,并将该多肽分别进行生物素化和KLH蛋白修饰。生物膜干涉方法验证多肽和rLZ-8的结合能力,KD值为9.5×10-7M。利用偶联KLH的多肽建立检测rLZ-8的方法学,并进行稳定性,重复性,回收率的实验,评价方法学的可行性。实验结果显示,该多肽与rLZ-8蛋白所建立的检测标准曲线为y=0.412x+0.1361。回收率在95%～110%之间,重复性:高低值样本CV%分别为3.53%和6.12%,稳定性:高低值样本CV%分别1.30%,2.10%,均在可接受范围内。该方法应用于rLZ-8发酵液的监测,结果与电泳结果一致。为蛋白质药物开发提供新的检测手段。

关键词：灵芝免疫调节蛋白噬菌体展示技术特异性配体活性检测

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噬菌体展示技术淘选三水白虎汤干预类风湿关节炎滑膜细胞的靶点研究

噬菌体展示技术淘选三水白虎汤干预类风湿关节炎滑膜细胞的靶点研...

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作者：潘超南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis, RA)是一种以关节滑膜炎症为中心病理的自身免疫病,其突出病理特点是滑膜增生并侵蚀关节软骨和骨质,最终导致关节破坏畸形。RA滑膜成纤维细胞(rheumatoid arthritis synovial fibroblasts, R... 详细信息

研究背景类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis, RA)是一种以关节滑膜炎症为中心病理的自身免疫病,其突出病理特点是滑膜增生并侵蚀关节软骨和骨质,最终导致关节破坏畸形。RA滑膜成纤维细胞(rheumatoid arthritis synovial fibroblasts, RASFs)大量增生并伴随大量炎症细胞浸润和新生血管形成是滑膜增生的基础。RA的关节破坏主要发生在血管翳增生浸润的软骨部位,滑膜组织血管翳可分为具免疫作用和侵蚀作用的两部分。前者由位于滑膜组织衬里下层的T细胞、B细胞、巨噬细胞和树突状细胞组成,介导抗原提呈、产生抗体和细胞因子,与滑膜炎症和过度增生有关；后者主要指紧邻骨和软骨损伤周围的滑膜组织和细胞,由过度增生的滑膜成纤维细胞和血管翳共同组成。在RA的病理进展中,RASFs发生活化并能产生大量炎症因子、基质蛋白和组织水解酶,造成局部炎症和关节软骨破坏,继而导致整个关节的损伤。RASFs增生的机制主要有二类,一是受多种致炎因子所驱动的炎症性增生(被动性增生),这其中肿瘤坏死因子-α (TNF-α)起到主要作用,当前广泛应用的TNF-α拮抗剂能显著控制RA的关节炎症症状,并部分阻断滑膜增生进程就是明证；二是由于RASFs本身的细胞生物学特点发生改变,生长周期调控机制障碍,出现类似肿瘤样转化的转化细胞特征所致(主动性增生)。目前发现,激活的RASFs具有下述特点：①异常增殖类似于局限性侵袭生长的肿瘤；②体外培养丧失了接触性抑制,可形成肿瘤样的癌巢；③原癌基因高度表达,使它们能逃避正常的生长调控机制而出现过度增殖,并获得侵袭特征；④抑癌基因P53突变型高度表达,而PTEN表达显著减少,细胞凋亡受到抑制；⑤蛋白酪氨酸激酶活性大大增加,而该酶是正常细胞与肿瘤细胞相互转化的关键环节；⑥能不通过细胞因子依赖途径,仅仅是内源性逆转录分子L1引导的MAPK信号分子p38δ就能激活RASFs,并持续分泌基质金属蛋白酶,从而降解软骨；⑦长期培养的RASFs侵袭人工基质程度4倍于正常的滑膜细胞,在免疫缺陷鼠体内单纯移植培养传代的RASFs仍表现有强烈的软骨侵蚀特征,而骨关节炎和正常成纤维细胞则无此特征。这些证据表明,RASFs与正常人和其它关节炎滑膜细胞相比,其生物学特点产生了明显的转化细胞特征。RA的治疗目标近年来已逐渐集中到真正阻断滑膜增生和骨质侵蚀方向,即所谓阻断病情进展。通过阻断滑膜增生,可延缓骨质侵蚀,从而阻断RA的病情进展,达到治疗RA的目标。 RA属于中医“痹病”、“历节”范畴,临床上,我们以三水白虎汤(Sanshui Baihu decoction, SSBH)治疗湿热痹阻型痹病。既往研究表明,SSBH缓解RA临床症状,改善炎症指标,并延缓和阻止X线水平RA的骨质侵袭进展。这都在大鼠胶原诱导性关节炎(CIA)模型得到证明,SSBH抑制CIA炎症发展过程中滑膜增生、纤维化、炎细胞的浸润、软骨和骨的破坏,X线照片上也明显能阻止CIA股指各关节的破坏。其作用机制包括：抑制基质金属蛋白酶(MMP-1、MMP-3)、NF-κB mRNA在关节局部的表达；抑制TNF-a的产生；该方能减少关节滑膜成纤维细胞内p38MAPK的激活,致使关节组织中p38MAPK表达降低。由于TNF-α及其在细胞内的信号转导通路p38MAPK被抑制,滑膜炎症和增生将被抑制；基质金属蛋白酶是导致软骨损伤的重要酶类,因此三水白虎汤能减轻软骨破坏。通过双向蛋白电泳技术发现SSBH抑制ASFs增殖相关的蛋白主要有IL-1Ra、OS-9、sorcin、Centrosomal等。三水白虎汤的作用机制无疑是多途径、多层次干预RA免疫炎症的反应的多个环节。既能抗炎镇痛、又能抑制免疫,同时还有一个重要的作用是抑制滑膜成纤维细胞的增生。而抑制滑膜成纤维细胞增生将成为RA治疗的主要方向,这就提示了三水白虎汤具有向阻断RA病情进展方向进行进一步研究开发的前景。噬菌体展示技术(Phage display technology)是一项将外源性的重组肽、蛋白质融合到噬菌体衣壳蛋白上的基因技术,广泛应用于药物作用靶点筛选。噬菌体展示随机肽库(phage-displayed random peptide library)的出现,将合成的随机序列的寡核苷酸片段克隆到噬菌体表面蛋白基因中,由一定长度的随机肽段混合组成的噬菌体随机肽库,理论上包含了该长度所有可能的氨基酸排列信息。用特定的靶分子通过亲和淘洗,能够高效、快速、简便地从噬菌体随机肽库中筛选到与特定靶分子结合的噬菌体肽,大大简化了蛋白质表达的筛选和鉴定。本文以差减筛选法淘选三水白虎汤抑制RASFs增殖的蛋白作用靶点,若筛选到这些靶点蛋白,将对三水白虎汤治疗RA的作用机制探讨、组方的科学精减

关键词：类风湿关节炎滑膜成纤维细胞三水白虎汤噬菌体展示技术全细胞差减筛选

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噬菌体展示技术在食源性致病菌检测中的应用

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食品科学 2015年第11期36卷 236-239页

作者：胡雨欣何早陈力力刘霞湖南农业大学食品科学技术学院食品科学与生物技术湖南省重点实验室湖南长沙410128

噬菌体展示技术是20世纪80年代逐步建立并发展起来的一种分子生物学新技术,目前用于构建展示文库的噬菌体主要有丝状噬菌体、λ噬菌体、T4噬菌体和T7噬菌体。该技术在筛选噬菌体、单链抗体及多肽以建立食品安全检测体系方面,具有广阔的... 详细信息

噬菌体展示技术是20世纪80年代逐步建立并发展起来的一种分子生物学新技术,目前用于构建展示文库的噬菌体主要有丝状噬菌体、λ噬菌体、T4噬菌体和T7噬菌体。该技术在筛选噬菌体、单链抗体及多肽以建立食品安全检测体系方面,具有广阔的应用前景。本文在介绍噬菌体展示技术系统的基础上,对该技术在食源性致病菌检测中的应用进行综述。

关键词：噬菌体展示技术食品致病菌检测

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噬菌体展示技术在毒素检测分析中的应用

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河南农业科学 2011年第6期40卷 32-35页

作者：胡骁飞栗力邢广旭裴亚峰职爱民王耀孙亚宁王磊赵丽娜邓瑞广河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室河南郑州450002 河南省农村能源环境保护总站河南郑州450002

霉菌毒素严重危害动物及人类健康,毒素检测已成为评价农产品、食品、饲料品质的重要内容之一。毒素检测有一定危险性,建立新的毒素检测手段意义重大。噬菌体展示技术是一种设计精巧、具有极强分离多肽功能的生物学技术。综述了此项技术... 详细信息

霉菌毒素严重危害动物及人类健康,毒素检测已成为评价农产品、食品、饲料品质的重要内容之一。毒素检测有一定危险性,建立新的毒素检测手段意义重大。噬菌体展示技术是一种设计精巧、具有极强分离多肽功能的生物学技术。综述了此项技术的发展和在筛选霉菌毒素模拟表位肽中的作用及模拟表位肽在毒素检测中的应用,并展望了该技术的应用前景。

关键词：霉菌毒素检测噬菌体展示技术模拟表位肽

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噬菌体展示技术筛选HBV前-前-S抗原基因启动子结合蛋白基因

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世界华人消化杂志 2004年第12期12卷 2801-2804页

作者：黄燕萍成军张树林杨艳杰高学松钟彦伟杨瑗白桂芹蔺淑梅中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京市100039 西安交通大学第一医院传染科陕西省西安市710061

目的:筛选乙型肝炎病毒(HBV)前-前-S抗原基因启动子的结合蛋白. 方法:应用噬菌体表面展示技术,以HBV前-前-S抗原基因启动子的聚合酶链反应产物作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行4轮“黏附-洗脱-扩增”的筛选过程,经噬斑的... 详细信息

目的:筛选乙型肝炎病毒(HBV)前-前-S抗原基因启动子的结合蛋白. 方法:应用噬菌体表面展示技术,以HBV前-前-S抗原基因启动子的聚合酶链反应产物作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行4轮“黏附-洗脱-扩增”的筛选过程,经噬斑的PCR扩增后,构建克隆载体,并对所筛选克隆进行DNA测序和生物信息学分析. 结果:噬菌体经富集后,从随机筛选的43个克隆中得到20 个与HBV前-前-S抗原基因启动子特异结合的阳性克隆, 包括人类SMG-1的磷脂酰肌醇3相关激酶激酶、28 S核糖体、单倍型As2A线粒体、组氨酰-tRNA合成酶、脂肪醛脱氢酶、桥粒相关蛋白、MAX相互作用蛋白1等17个已知功能基因及3个未知功能基因. 结论:用噬菌体人肝细胞cDNA文库筛选得到HBV前-前- S抗原基因启动子的结合蛋白基因,为进一步研究HBV发病机制创造了新的途径.

关键词：噬菌体展示技术筛选 HBV 前-前-S抗原基因启动子结合蛋白基因乙型肝炎病毒

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噬菌体展示技术定位主要食物过敏原表位的研究进展

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食品工业科技 2015年第3期36卷 379-384页

作者：袁水林李欣陈红兵高金燕熊鼎南昌大学食品科学与技术国家重点实验室江西南昌330047 南昌大学生命科学与食品工程学院江西南昌330047 南昌大学中德联合研究院江西南昌330047

噬菌体展示技术是一项可以在噬菌体颗粒的表面展示外源多肽的体外筛选技术。由于该技术实现了基因和蛋白质的体外统一,现已被广泛应用于生命科学和医学等领域。目前噬菌体展示系统主要有丝状噬菌体展示系统、λ噬菌体展示系统、T4噬菌... 详细信息

噬菌体展示技术是一项可以在噬菌体颗粒的表面展示外源多肽的体外筛选技术。由于该技术实现了基因和蛋白质的体外统一,现已被广泛应用于生命科学和医学等领域。目前噬菌体展示系统主要有丝状噬菌体展示系统、λ噬菌体展示系统、T4噬菌体展示系统和T7噬菌体展示系统。本文主要介绍了噬菌体展示技术以及该技术在八类食物抗原表位分析的应用。

关键词：噬菌体展示技术噬菌体展示系统食物过敏表位应用

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噬菌体展示技术在汉坦病毒研究中的应用

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医学研究生学报 2012年第7期25卷 767-770页

作者：杨栋强白雪帆第四军医大学唐都医院全军感染病中心西安710038 河南省人民医院感染科

噬菌体展示技术是近年发展起来的新技术,在研究蛋白质与蛋白质之间、抗原抗体之间的相互作用、新药开发、疾病诊断、疫苗研制以及病毒研究等方面具有广泛应用。文中就噬菌体展示技术在汉坦病毒研究中的应用现状作一综述。

关键词：噬菌体展示技术汉坦病毒多肽

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噬菌体展示技术在农药等小分子检测中的应用

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江苏农业学报 2008年第1期24卷 89-92页

作者：张晓刘媛刘贤进程罗根江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所江苏南京210014 南京师范大学生命科学学院江苏南京210097

噬菌体展示技术是将外源蛋白基因与噬菌体表面特定蛋白基因在其表面融合表达,用于筛选和改造功能性多肽的生物技术,具有库容量大,结合特异性强等特点,现已被广泛应用于生命科学的许多领域。本文在系统介绍了噬菌体展示技术及其载体系统... 详细信息

噬菌体展示技术是将外源蛋白基因与噬菌体表面特定蛋白基因在其表面融合表达,用于筛选和改造功能性多肽的生物技术,具有库容量大,结合特异性强等特点,现已被广泛应用于生命科学的许多领域。本文在系统介绍了噬菌体展示技术及其载体系统发展的基础上,对该技术在农药等小分子化合物免疫检测中的应用进行了综述。

关键词：噬菌体展示技术酶联免疫检测农药小分子

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