检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术通报 2013年第1期29卷 144-150页

作者：徐富勇徐玲刘仁荣裘雪梅朱立鑫南昌大学生命科学与食品工程学院南昌330029 江西科技师范大学生命科学学院南昌330013

拟用pⅧ噬菌体展示系统表达玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)模拟表位肽,并验证其反应原性。通过将含有ZEN模拟表位序列以及肠激酶酶切位点的寡聚核苷酸与经过EcoR I和BamH I双酶切的pC89S4噬菌粒连接,构建表达载体pC89-CZEN。pC89-CZEN... 详细信息

拟用pⅧ噬菌体展示系统表达玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)模拟表位肽,并验证其反应原性。通过将含有ZEN模拟表位序列以及肠激酶酶切位点的寡聚核苷酸与经过EcoR I和BamH I双酶切的pC89S4噬菌粒连接,构建表达载体pC89-CZEN。pC89-CZEN转化感受态XL1-Blue得到工程菌pC89-ek-zen,然后用KM13超感染、IPTG诱导表达,纯化后得到展示有玉米赤霉烯酮模拟表位的噬菌体颗粒。对KM13超感染时菌体浓度OD600、IPTG诱导时菌体浓度OD600、IPTG加入量以及诱导表达温度和时间进行优化,以探索最佳表达条件;通过ELISA测定反应原性,对比肠激酶酶切前后模拟表位肽与ZEN抗体的结合效果。结果显示,成功构建了表达载体pC89-CZEN,最优表达条件为KM13超感染时菌体浓度OD600为0.4、IPTG诱导时菌体浓度OD600为0.6以及IPTG加入量为终浓度1.0 mmol/L、诱导表达温度为24℃、时间8 h,酶切后结合效果明显高于酶切前。

关键词：噬菌体展示系统玉米赤霉烯酮模拟表位肠激酶

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

Ⅰ.人肿瘤坏死因子的蛋白质工程研究;Ⅱ.噬菌体展示系统在抗体工程的应用研究

Ⅰ.人肿瘤坏死因子的蛋白质工程研究;Ⅱ.噬菌体展示系统在抗体工...

引用

作者：刘惠中国科学院上海药物研究所中国科学院上海生命科学研究院上海药物研究所中国科学院上海生命科学研究院

学位级别：博士

第一部分:人肿瘤坏死因子的蛋白质工程研究.该文采用定点突变的方法构建了两株新型人肿瘤坏死因子突变体MT1(32Trp157Phe)和MT2(2Lys30Ser32Trp157Phe),并在大肠杆菌中得以高效表达,表达量占菌体总蛋白的50﹪且为可溶性蛋白.表达产物经... 详细信息

第一部分:人肿瘤坏死因子的蛋白质工程研究.该文采用定点突变的方法构建了两株新型人肿瘤坏死因子突变体MT1(32Trp157Phe)和MT2(2Lys30Ser32Trp157Phe),并在大肠杆菌中得以高效表达,表达量占菌体总蛋白的50﹪且为可溶性蛋白.表达产物经蛋白印渍法检测,均能与抗野生型hTNF-α单抗结合且经分离纯化后,样品的纯度在95﹪以上.第二部分:噬菌体展示系统在抗体工程领域的应用研究.第一章、具有芳香酯酯键水解催化活性单链抗体的筛选.该文在传统的获得催化抗体的杂交瘤技术结果阴性情况下,利用噬菌体展示系统从半抗原OBⅡ免疫过小鼠的脾脏中构建单链抗体表达库,库容量达4.6×10<'8>.该研究结果表明利用噬菌体展示系统,直接从半抗原免疫小鼠的脾脏中构建抗体库筛选催化抗体的途径是对杂交瘤技术的很好补充.第二章、可催化环氧角鲨烯单环形成的单链抗体的基因克隆及其性质鉴定.该章从分泌可催化环氧角鲨烯单环形成抗体的杂交瘤细胞株25A10中抽提RNA,反转录成CDNA并利用Over-lap PCR扩增出所有单链抗体基因,然后利用噬菌体展示系统经一轮Panning富集到能与半抗原特异性结合的25A10单链抗体基因,并在大肠杆菌中进行了分泌表达,其中40﹪分泌到培养上清,其余滞留在周质空间.第三章、利用热点(Hot Spots)突变的方法提高抗人肿瘤相关抗原Siayl Lewis<'x>单链抗体的亲和活性和稳定性.该章利用热点突变的方法对抗人肿瘤相关抗原Siayl Lewis<'x>的单链抗体S7轻链CDR3区域的hot spots位点进行了随机突变,结果富集得到了新型突变克隆C4其亲和力经BIACORE检测较野生型提高两倍,稳定性也较野生型在大提高.

关键词：人肿瘤坏死因子定点突变催化抗体噬菌体展示系统环化反应杂交瘤技术酶联免疫分析 BIACORE

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

噬菌体展示系统的研究进展

引用

生命的化学 1996年第3期16卷 29-34页

作者：许正平李伯良浙江大学生物科学与技术系中国科学院上海生物化学研究所

噬菌体展示系统的研究进展许正平（浙江大学生物科学与技术系，杭州３１００２７）李伯良（中国科学院上海生物化学研究所，上海２０００３１）关键词噬菌体展示系统噬菌体展示是一种将外源肽或蛋白质与特定噬菌体衣壳蛋白融合并展示于... 详细信息

噬菌体展示系统的研究进展许正平（浙江大学生物科学与技术系，杭州３１００２７）李伯良（中国科学院上海生物化学研究所，上海２０００３１）关键词噬菌体展示系统噬菌体展示是一种将外源肽或蛋白质与特定噬菌体衣壳蛋白融合并展示于噬菌体表面的技术。若展示的是随机肽...

关键词：噬菌体噬菌体展示系统衣壳蛋白

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

多功能M13KE噬菌体展示系统的建立

引用

生物技术通报 2014年第2期30卷 143-147页

作者：方月琴郭娟宁陆豪杰朱国强江苏健雄职业技术学院苏州215411 扬州大学兽医学院扬州225009 新乡医学院新乡453003

以M13KE噬菌体为起始载体,建立一种无需辅助噬菌体的较长片段多肽库展示系统,以解决当前噬菌体展示仅能筛选短肽库现象,并扩大靶向高通量筛选范畴。根据M13KE次要外壳蛋白(Minor coat protein of wild-type M13KE,wt-pⅢ)基因III(wt-ge... 详细信息

以M13KE噬菌体为起始载体,建立一种无需辅助噬菌体的较长片段多肽库展示系统,以解决当前噬菌体展示仅能筛选短肽库现象,并扩大靶向高通量筛选范畴。根据M13KE次要外壳蛋白(Minor coat protein of wild-type M13KE,wt-pⅢ)基因III(wt-gene Ⅲ)结构与功能关系,设计并扩增出能发挥其基因功能的截短基因Ⅲ(Truncated gene Ⅲ,tgⅢ);通过拼接-重叠-延伸PCR(Splice-overlapping-extension polymerase chain reaction,SOEing-PCR)获得含启动子、信号肽和结构基因的融合基因片段,将其插入至M13KE载体的合适部位,进行蛋白质诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析。同时在wt-gⅢ和tgⅢ部位分别插入HA和c-Myc多肽标签,再次进行表达和检测。结果显示,tgⅢ被插入到M13KE的非必需部位,利用抗蛋白III(anti-M13 pⅢ)抗体进行Western blot检测发现,wt-gⅢ和tgIII均能表达pIII(protein Ⅲ,pⅢ);anti-HA和c-Myc抗体都能检测到2个标签蛋白和pⅢ蛋白质的表达。获得一种多功能M13KE载体,具有既能表达短片段多肽库,也能表达较长片段多肽库的潜能,而且无需辅助噬菌体,可用于更大范围的高通量靶向筛选。

关键词：靶向高通量筛选噬菌体展示系统 M13KE 长片段多肽库

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

噬菌体展示系统筛选糖尿病相关抗原蛋白及应用效果评价

引用

中国医药生物技术 2019年第6期14卷 517-521页

作者：刘尧林骏梁永羿山云王洪涛徐良深圳市药品检验研究院/深圳市医疗器械检测中心体外诊断试剂部

目的用噬菌体展示系统筛选与糖尿病相关的自身抗原新表位,表达新抗原肽段并评价其在糖尿病诊断中的应用效果。方法以Ⅰ型糖尿病血清作为靶分子,对Ph.D.-12噬菌体肽库进行淘选,测序淘选的噬菌体并用ELISA检测噬菌体与靶分子的结合效果,BL... 详细信息

目的用噬菌体展示系统筛选与糖尿病相关的自身抗原新表位,表达新抗原肽段并评价其在糖尿病诊断中的应用效果。方法以Ⅰ型糖尿病血清作为靶分子,对Ph.D.-12噬菌体肽库进行淘选,测序淘选的噬菌体并用ELISA检测噬菌体与靶分子的结合效果,BLAST分析特异性最好的表位与糖尿病的相关性,选择合适的目的基因合成重组质粒,用Expi293细胞表达新抗原肽段并检测该抗原与临床血清的特异结合效果。结果共完成2418个噬菌体单克隆的测序,淘选出93种表位序列,11种具有代表性的表位中测序超过200次的有4种,对特异性最强的表位序列"-GTFLFSLCAAVY"进行分析后选择mTOR相关蛋白mEAK-7作为目的基因,抗原肽段与临床血清的特异性结合效果为:Ⅰ型糖尿病阳性率为17%,Ⅱ型糖尿病阳性率为4%。结论 mEAK-7蛋白对糖尿病血清具有一定的抗原特异性,该基因与糖尿病可能有相关性,具有很好的研究价值。

关键词：噬菌体展示系统糖尿病自身抗体抗原表位

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

单链抗体展示系统研究进展

引用

生物工程学报 2023年第9期39卷 3681-3694页

作者：陈遥舒星富赵钰张博文马忠仁张海霞西北民族大学生物医学研究中心、生物工程与技术国家民委重点实验室甘肃兰州730030 西北民族大学生命科学与工程学院甘肃兰州730030

单链抗体(single chain antibody fragment,scFv)是由抗体重链可变区(variable region of heavy chain,VH)和轻链可变区(variable region of light chain,VL)通过柔性短肽连接组成的小分子,是具有完整抗原结合活性的最小功能片段,包含抗体识别及抗原结合部位。相比于其他抗体,scFv具有分子量小、穿透性强、免疫原性弱、易构建表达等优点。目前,scFv最常用的展示系统主要有噬菌体展示系统、核糖体展示系统、mRNA展示系统、酵母细胞表面展示系统和哺乳动物细胞展示系统等。近年来,随着scFv在医学、生物学、食品安全学等领域的发展,使得其在生物合成和应用研究方面备受关注。本文对近年来scFv展示系统的研究进展作一综述,以期为scFv的筛选及应用提供理论基础。

关键词：单链抗体基因工程抗体噬菌体展示系统核糖体展示系统

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪传染性胃肠炎病毒猪源单链抗体的筛选与鉴定

引用

中国兽医科学 2021年第6期51卷 695-704页

作者：孙宇王宁高崇周晗姜艳平崔文乔薪瑗唐丽杰徐义刚王丽李一经东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 黑龙江省动物疾病防控技术与制剂创制实验室黑龙江哈尔滨150030

为了获得猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的单链抗体,首先利用噬菌体展示技术,构建猪源噬菌体单链抗体库,然后,通过微孔板筛选法对抗体库进行3轮富集淘筛,并用ELISA检测单链抗体与TGEV的亲和力,对亲和性较高的单链抗体进行基因测序与分析。结... 详细信息

为了获得猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的单链抗体,首先利用噬菌体展示技术,构建猪源噬菌体单链抗体库,然后,通过微孔板筛选法对抗体库进行3轮富集淘筛,并用ELISA检测单链抗体与TGEV的亲和力,对亲和性较高的单链抗体进行基因测序与分析。结果表明,成功构建了猪源噬菌体单链抗体库,其库容为1.89×107 CFU/mL,通过Phage ELISA和Fab ELISA筛选得到4株与TGEV具有高亲和力的单链抗体,并通过桑格测序获得了与TGEV亲和性最佳的2株抗体的基因序列。利用在线生物信息学工具对所获得的抗体基因序列进行分析,结果表明,这2株单链抗体基因序列分别由猪源IgG的重链可变区基因(V_(H))和κ型轻链可变区基因(V_(L))构成,V_(H)和V_(L)均由3个CDR区和4个FR区构成,说明上述基因序列为完整的猪源TGEV抗体可变区。本研究的结果将为TGEV抗体药物的开发提供必要材料,为TGEV感染仔猪的临床治疗提供新的思路。

关键词：猪源噬菌体抗体库传染性胃肠炎病毒单链抗体噬菌体展示系统

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

噬菌体展示疫苗的研究进展

引用

中国生物制品学杂志 2023年第9期36卷 1132-1137页

作者：王财赵子红(综述) 李唯峰张玉妥(审校) 河北北方学院病原生物学与免疫研究所河北张家口075000

噬菌体是感染细菌、真菌、放线菌和螺旋体等微生物的病毒,因其固有的免疫原性、遗传可塑性、稳定性及安全性等优势,使其在疫苗研发中具有独特的潜力。目前,有较多利用其构建疫苗递送平台的研究,主要包括噬菌体展示疫苗、噬菌体DNA疫苗... 详细信息

噬菌体是感染细菌、真菌、放线菌和螺旋体等微生物的病毒,因其固有的免疫原性、遗传可塑性、稳定性及安全性等优势,使其在疫苗研发中具有独特的潜力。目前,有较多利用其构建疫苗递送平台的研究,主要包括噬菌体展示疫苗、噬菌体DNA疫苗及杂交噬菌体DNA疫苗3种形式,其中研究最为广泛的是噬菌体展示疫苗。噬菌体展示技术是一种新型疫苗制备技术,是以噬菌体为载体,通过将外源多肽或蛋白基因整合至噬菌体基因中,以融合蛋白的形式展示在噬菌体表面的分子生物学技术。本文主要就噬菌体展示疫苗的免疫学基础、展示系统及其在疾病预防应用的研究进展作一综述,以期为噬菌体展示疫苗的研发与应用提供参考。

关键词：噬菌体噬菌体展示疫苗噬菌体展示系统

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

噬菌体展示技术定位主要食物过敏原表位的研究进展

引用

食品工业科技 2015年第3期36卷 379-384页

作者：袁水林李欣陈红兵高金燕熊鼎南昌大学食品科学与技术国家重点实验室江西南昌330047 南昌大学生命科学与食品工程学院江西南昌330047 南昌大学中德联合研究院江西南昌330047

噬菌体展示技术是一项可以在噬菌体颗粒的表面展示外源多肽的体外筛选技术。由于该技术实现了基因和蛋白质的体外统一,现已被广泛应用于生命科学和医学等领域。目前噬菌体展示系统主要有丝状噬菌体展示系统、λ噬菌体展示系统、T4噬菌... 详细信息

噬菌体展示技术是一项可以在噬菌体颗粒的表面展示外源多肽的体外筛选技术。由于该技术实现了基因和蛋白质的体外统一,现已被广泛应用于生命科学和医学等领域。目前噬菌体展示系统主要有丝状噬菌体展示系统、λ噬菌体展示系统、T4噬菌体展示系统和T7噬菌体展示系统。本文主要介绍了噬菌体展示技术以及该技术在八类食物抗原表位分析的应用。

关键词：噬菌体展示技术噬菌体展示系统食物过敏表位应用

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

BLyS<,134-285>对噬菌体展示文库的筛选及其受体突变体的研究

BLyS<,134-285>对噬菌体展示文库的筛选及其受体突变体的研究

引用

作者：丁艳丽沈阳药科大学

学位级别：博士

B淋巴细胞刺激因子(BLyS)是1999年发现的肿瘤坏死因子(TNF)家族的一个新成员，主要调节B细胞的增殖、分化，BLyS表达异常会引起严重的免疫功能紊乱。本研究首先在大肠杆菌中对BLyS<,134-285>进行了可溶表达，获得了有活... 详细信息

B淋巴细胞刺激因子(BLyS)是1999年发现的肿瘤坏死因子(TNF)家族的一个新成员，主要调节B细胞的增殖、分化，BLyS表达异常会引起严重的免疫功能紊乱。本研究首先在大肠杆菌中对BLyS<,134-285>进行了可溶表达，获得了有活性的表达产物，以BLyS<,134-285>为靶蛋白对噬菌体随机12肽库进行亲和淘洗，筛选到一结合肽；其次将该肽与BLyS受体-B细胞成熟抗原(BCMA)胞外区序列比较，确定位点对BCMA进行了定点突变，并找到BCMA与BLyS<,134-285>结合的关键氨基酸；同时，我们用BLyS<,134-285>和FP248两种蛋白分别对噬菌体展示scFv文库进行淘洗，在获得各自高亲和力克隆的基础上，成功地将抗体噬菌体作为一抗在Western blot中应用，为Western blot中一抗的获得提供了一种新的途径。研究工作分为以下三个部分： (1)在大肠杆菌BL21(DE3)中以低温诱导获得了BLyS<,134-285>的可溶性表达，经过Ni-NTA树脂纯化表达产物，纯度达到80％左右；分离小鼠脾脏B细胞，用MIT法测定BLyS<,134-285>对其的增殖情况，证实了BLyS<,134-285>的活性。以BLyS<,134-285>为靶蛋白对噬菌体展示随机12肽库进行了筛选。经过3轮淘洗，噬菌体产出与投入的比值逐轮升高，表明与BLyS<,134-285>特异性结合的噬菌体得到了富集。在洗脱时我们采用了酸洗脱与受体竞争洗脱相结合的形式，最后从第3轮高浓度受体洗脱下的噬菌体中，随机挑选20个克隆用ELISA测定结合活性，并将强阳性信号的克隆送出测序，多个克隆在测序后得到了同一个小肽序列(T1)。将T1与GST融合，在大肠杆菌获得高表达，目的蛋白表达量占菌体总蛋白50％，用Glutathione-agarose纯化后纯度高达95％。ELISA实验进一步确证了融合表达的T<,1>与BLyS<,134-285>的结合活性。(2)利用Vector NTI软件将T1与BCMA胞外区氨基酸序列进行比对，得到与T1最为相似的位点：Gln<'25>、Leu<'26>、Arg<'27>和Thr<'32>。用定点突变的方法构建了4株BCMA的突变体(mBCMA)： Q25D/R27Y、126G、R27Y以及Q25D，并分别将各个突变体与IgGlFc融合(mBCMA-FC1)，在大肠杆菌中获得了高效可溶表达，表达产物经Protein A-Sepharose纯化后，4株mBCMA-Fc1的纯度均在95％以上。最后通过ELISA检测证实突变体Q25D／R27Y、Q25D以及R27Y，同BLyS<,134-285>的结合活性较突变前变化较大，结合能力降低；突变体L26G同BLyS<,134-285>的结合活性较突变前变化较小。因此Gln<'25>，Arg<'27>氨基酸为与配体结合的关键区域，Len<'26>对BCMA同配体的结合影响较小。 (3)以BLyS<,134-285>和即248为靶分别对噬菌体展示scFv文库进行筛选，各进行4轮淘洗后，特异性结合靶蛋白的噬菌体均得到富集，BLyS<,134-285>与FP248筛选的第4轮产率分别是第一轮的10<'4>及10<,2>倍。从第四轮洗脱的噬菌体中各随机挑选20个克隆用ELISA鉴定它们与BLyS<,134-285>的结合活性。在获得各自高亲和力噬菌体克隆的基础上，考察抗体噬菌体可否作为抗靶蛋白的第一抗体用于Western blot。结果显示，抗体噬菌体作为一抗在Western blot中能够特异地检测出相应抗原，并且抗体噬菌体的稀释倍数同其与抗原之间的亲和力成正相关。为Western blot检测中一抗的获得提供一种新的途径。

关键词： B淋巴细胞刺激因子噬菌体展示系统受体突变体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：