检索结果-内蒙古大学图书馆

PRRSV、CSFV、PRV和PCV2四重实时荧光定量pcr检测方法的建立及应用

动物医学进展 2024年第6期45卷 7-14页

作者：李欣杨莉刘光亮王文秀刘海隆曹宗喜张艳新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052 海南省农业科学院畜牧兽医研究所海南海口571100 海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室海南海口571100 山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600

为建立同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)的四重荧光定量pcr(qpcr)检测方法,针对PRRSV的ORF2基因、CSFV的5′UTR基因、PRV的gB基因、PCV2的ORF2基因设计了引物及Taq Ma... 详细信息

为建立同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)的四重荧光定量pcr(qpcr)检测方法,针对PRRSV的ORF2基因、CSFV的5′UTR基因、PRV的gB基因、PCV2的ORF2基因设计了引物及Taq Man探针,并进行反应体系优化,敏感性、特异性验证,建立了同时检测上述4种病原的四重实时荧光定量pcr。结果显示,所建立的四重荧光pcr扩增效率(E)、相关系数(R^(2))及曲线斜率均在正常范围内,检测PRRSV、CSFV、PRV、PCV2 E值、R^(2)、斜率分别为92.9%、0.998、-3.504,90.7%、0.998、-3.566,94.3%、0.996、-3.466,94.2%、0.997及-3.470。PRRSV、CSFV、PRV、PCV2重组质粒最低检出限分别达到10^(2)、10^(2)、10^(2)、10^(3) copies/μL;四重qpcr反应体系中的多条引物间不发生交叉反应,经评价该方法特异性良好;批内和批间重复性试验结果显示,变异系数(CV)均在1%以下,具有良好的重复性。分别使用该方法和相应的国标荧光定量检测法对采集的298份临床样品进行检测对比,两种方法检测PRRSV、CSFV、PRV、PCV2阳性符合率分别为96.08%、96.38%、100%、94.95%,均在94%以上。结果表明,建立的检测方法方便、灵敏、高效、特异性强,适用于猪呼吸道疾病病原学、流行病学研究以及临床病例的诊断,并为猪呼吸道疾病的预防和控制提供技术支撑。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪瘟病毒猪伪狂犬病病毒猪圆环病毒2型四重实时荧光定量pcr

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四种食源性致病弧菌多重实时荧光定量pcr快速检测体系的建立

引用

微生物学通报 2024年第8期51卷 3179-3188页

作者：马梦洁曹钰佳刘平平许剑锋喻勇新马晨晨上海海洋大学食品学院上海201306 上海市食品研究所上海200235 上海海洋大学农业农村部水产品质量安全贮藏保鲜风险评估实验室上海201306

【背景】弧菌在全球范围内严重威胁人类健康,副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、拟态弧菌(Vibrio mimicus)和创伤弧菌(Vibrio vulnificus)与食用生的或未煮熟的海鲜所引起的胃肠道感染和败血症有关,... 详细信息

【背景】弧菌在全球范围内严重威胁人类健康,副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、拟态弧菌(Vibrio mimicus)和创伤弧菌(Vibrio vulnificus)与食用生的或未煮熟的海鲜所引起的胃肠道感染和败血症有关,因而备受关注。【目的】建立一种实时荧光定量pcr方法,用于检测副溶血性弧菌、霍乱弧菌、拟态弧菌和创伤弧菌,以提高检测效率和准确性。【方法】基于副溶血性弧菌和拟态弧菌的toxR基因、霍乱弧菌的ompW基因、创伤弧菌的vvhA基因设计特异性引物和探针,通过优化反应体系和条件建立四重实时荧光定量pcr体系。【结果】该实时荧光定量pcr方法检测限均为10 copies/µL,扩增效率均在100%左右;在特异性试验中,分别运用多重实时荧光定量pcr和常规pcr对目的菌基因组、非目的菌基因组和空白对照进行扩增,结果均只有目的弧菌扩增明显,表明本方法有良好的特异性;在抗干扰实验中,高浓度弧菌不干扰低浓度弧菌检测;每个浓度梯度进行3次重复实验,每组变异系数均小于1.5%,表明本方法重复性好。【结论】建立的多重实时荧光定量pcr方法可快速、特异地实现对副溶血性弧菌、霍乱弧菌、拟态弧菌和创伤弧菌的检测。

关键词：副溶血性弧菌霍乱弧菌拟态弧菌创伤弧菌四重实时荧光定量pcr

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一种牛肉及其制品掺假的快速鉴定方法

引用

食品科技 2023年第11期48卷 268-275页

作者：李宇时国强柳梦思董振国河北三狮生物科技有限公司河北石家庄050035

建立一种针对生牛肉、深加工牛肉制品等多种牛肉样品进行羊源、鸭源和猪源掺假成分定性、定量检测的四重实时荧光定量pcr方法。以生牛肉、羊肉、鸭肉、猪肉,以及经干、炸、烤、煮、微波处理的肉样为对象,对方法进行特异性、灵敏度、重... 详细信息

建立一种针对生牛肉、深加工牛肉制品等多种牛肉样品进行羊源、鸭源和猪源掺假成分定性、定量检测的四重实时荧光定量pcr方法。以生牛肉、羊肉、鸭肉、猪肉,以及经干、炸、烤、煮、微波处理的肉样为对象,对方法进行特异性、灵敏度、重复性及检出限测试,同时使用GB/T 38164—2019检测方法对14份市售生牛肉及其制品进行平行检测,综合评价该检测方法的检测性能。生肉梯度测试的线性相关系数均大于0.980,重复性测试的变异系数均小于3.000%,最低检出限可达10 fg/μL。各烹饪处理的样品添加比例最低检出限度为0.1%,肉样混合比例对数与Ct值的线性相关系数均在0.980以上。GB/T 38164—2019检测方法与文章检测方法对14份市售生牛肉及其制品的测试结果完全一致。文章研究的检测方法灵敏高效、稳定准确,为牛肉掺假的快速鉴别提供了一种有效技术手段。

关键词：四重实时荧光定量pcr 牛肉烹饪处理掺假

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