检索结果-内蒙古大学图书馆

广藿香Trihelix家族PatASIL2基因克隆、亚细胞定位及表达分析

华北农学报 2025年第1期40卷 104-112页

作者：李俊仁陈秀珍吴带娣广州医科大学附属肿瘤医院广东广州510095 仲恺农业工程学院农业与生物学院广东广州510225 广州中医药大学中药学院广东广州510006

为探究广藿香Trihelix家族基因PatASIL2的序列特征、亚细胞定位及表达模式,以广藿香转录组获得的ASIL2基因序列设计特异性引物,以广藿香cDNA为模板,克隆PatASIL2基因,随后对其进行生物信息学分析;构建PatASIL2-EGFP融合蛋白表达载体并... 详细信息

为探究广藿香Trihelix家族基因PatASIL2的序列特征、亚细胞定位及表达模式,以广藿香转录组获得的ASIL2基因序列设计特异性引物,以广藿香cDNA为模板,克隆PatASIL2基因,随后对其进行生物信息学分析;构建PatASIL2-EGFP融合蛋白表达载体并转化拟南芥原生质体,检测PatASIL2的亚细胞定位;利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析PatASIL2基因在广藿香不同组织、外源茉莉酸甲酯(MeJA)喷施及非生物胁迫(盐胁迫、干旱胁迫、冷胁迫)下的表达情况。结果显示,PatASIL2含长度为1 035 bp的开放阅读框,编码344个氨基酸。PatASIL2不具有跨膜结构和信号肽,属于不稳定的亲水蛋白,含有41个丝氨酸磷酸化位点和1个Myb_DNA-bind_4保守结构域。系统进化分析显示,PatASIL2归类到Trihelix转录因子家族的SIP1亚家族,与芝麻SiASIL2同源性较高。亚细胞定位结果表明,PatASIL2为细胞核定位蛋白。qRT-PCR结果表明,PatASIL2在广藿香的嫩叶、成熟叶、老叶、根和茎中都有表达,尤其在老叶中的表达量最高;在MeJA处理后,PatASIL2基因的表达量在12~24 h显著升高;盐胁迫下,PatASIL2基因的表达量在3~24 h显著升高;在干旱胁迫下,PatASIL2基因的表达量在24 h显著升高;在冷胁迫下,PatASIL2基因在12 h表达量显著升高。

关键词：广藿香 Trihelix ASIL2 基因克隆表达模式亚细胞定位

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紫花苜蓿MsTIFY77基因克隆及表达分析

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草地学报 2025年第3期33卷 719-727页

作者：张岩陈崎代蕊李建伟边林张志强内蒙古农业大学草业学院内蒙古呼和浩特010000 内蒙古农业大学草业学院/国家林业草原北方抗旱耐寒草品种育繁工程技术研究中心内蒙古呼和浩特010000

TIFY家族蛋白是一类在植物中广泛存在的转录因子,该家族蛋白含有一个高度保守的TIFY结构域,通过参与植物内部的多种信号途径,对植物的生长发育、逆境响应以及防御机制进行调节。本研究从‘草原4号’紫花苜蓿(MedicagosativaL.)中克隆得... 详细信息

TIFY家族蛋白是一类在植物中广泛存在的转录因子,该家族蛋白含有一个高度保守的TIFY结构域,通过参与植物内部的多种信号途径,对植物的生长发育、逆境响应以及防御机制进行调节。本研究从‘草原4号’紫花苜蓿(MedicagosativaL.)中克隆得到MsTIFY77基因并对其进行生物学信息分析以及表达模式分析,探究MsTIFY77基因在胁迫应答中的功能。结果发现,该基因全长1101 bp,开放阅读框(Open reading frame,ORF)编码367个氨基酸,含有TIFY和CCT-2结构域。氨基酸序列分析表明MsTIFY77蛋白为不稳定蛋白,通过系统发育树分析表明紫花苜蓿MsTIFY77蛋白与蒺藜苜蓿(Medicago truncatula),豌豆(Pisum sativum),红三叶(Trifolium pratense),毛苕子(Vicia villosa),鹰嘴豆(Cicer arietinum)和白车轴草(Trifolium repens)的TIFY蛋白亲缘关系较近。亚细胞预测MsTIFY77蛋白定位于细胞核。qRT-PCR结果显示,低温和干旱胁迫诱导该基因的表达,而脱落酸胁迫对该基因表达有抑制作用。研究结果为MsTIFY77基因的功能提供参考。

关键词：紫花苜蓿 TIFY77基因基因克隆表达分析

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松墨天牛GST基因克隆及高温胁迫下的表达特性分析

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南京林业大学学报(自然科学版) 2025年第1期49卷 28-36页

作者：李子纯郝德君李慧李长燕许丹雯仪杨华磊赵培渊南京林业大学林草学院南方现代林业协同创新中心

【目的】克隆松墨天牛(Monochamus alternatus)谷胱甘肽S转移酶(glutathione S-transferases, GST)相关基因，明确GST基因在松墨天牛响应高温胁迫中的效用，为探究亚热带地区松墨天牛的耐热分子机制提供理论依据。【方法】克隆3条松墨天... 详细信息

【目的】克隆松墨天牛(Monochamus alternatus)谷胱甘肽S转移酶(glutathione S-transferases, GST)相关基因，明确GST基因在松墨天牛响应高温胁迫中的效用，为探究亚热带地区松墨天牛的耐热分子机制提供理论依据。【方法】克隆3条松墨天牛GST基因，结合DNAMAN 9.0、I-TASSER等软件分析松墨天牛GST基因的结构特征；利用qRT-PCR技术测定分析松墨天牛成虫和4龄幼虫在不同高温、不同处理时长后GST基因的相对表达量；通过纸盘扩散法验证3条松墨天牛GST基因在保护机体免受氧化应激中的作用。【结果】克隆3条松墨天牛GST基因的cDNA序列，分别命名为MaltGSTe1、MaltGSTe2和MaltGSTt1。MaltGSTe1与MaltGSTe2均属于GST的Epsilon家族，MaltGSTt1属于GST的Theta家族。3条GST基因三维蛋白结构具有指示性结构特征，属于胞质型GST。松墨天牛4龄幼虫在高温胁迫下MaltGSTe1、MaltGSTe2和MaltGSTt1的相对表达量均出现显著变化，MaltGSTe2相对表达水平上调幅度最大；MaltGSTt1在松墨天牛雄虫体内相对表达量出现明显下调；异源表达3条GST基因蛋白的大肠杆菌表现出较强的抗氧化能力，其中，MaltGSTe2具有更强的抗氧化能力。【结论】克隆获得3条松墨天牛GST基因，发现高温胁迫可诱导GST基因表达量上调；纸盘扩散分析结果表明异源表达GST基因蛋白具有抗氧化能力，推测GST基因具有通过保护机体免受氧化应激来参与松墨天牛幼虫的高温胁迫响应机制。

关键词：松墨天牛高温胁迫谷胱甘肽S转移酶 GST基因氧化应激基因克隆表达分析生物信息学

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蒺藜苜蓿MtBMI1基因克隆及抗旱性分析

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草业学报 2025年第6期34卷 139-153页

作者：赵媛媛蒲小剑徐成体王伟傅云洁青海大学畜牧兽医科学院农业农村部西北耕地保育及边际土地改良企业重点实验室

干旱不利于植物的正常生长、发育及繁殖，是造成农作物及饲草产量降低的重要因素之一。BMI1蛋白作为PcG蛋白复合体中唯一介导组蛋白泛素化的成员，在参与植物对外界非生物胁迫响应的表观遗传调控中发挥重要的作用。以蒺藜苜蓿为材料，... 详细信息

干旱不利于植物的正常生长、发育及繁殖，是造成农作物及饲草产量降低的重要因素之一。BMI1蛋白作为PcG蛋白复合体中唯一介导组蛋白泛素化的成员，在参与植物对外界非生物胁迫响应的表观遗传调控中发挥重要的作用。以蒺藜苜蓿为材料，克隆得到PcG家族成员MtBMI1，该基因全长5386 bp，编码429个氨基酸，具有zfC3HC4和RAWUL两个保守的功能结构域。系统进化树分析表明该基因与菜豆PvBMI1-1和大豆GmBMI1-1亲缘关系更接近。烟草表皮亚细胞定位结果表明该基因编码的蛋白定位在细胞核上。GUS化学染色结果表明在成熟的拟南芥花序及柱头、花茎和果柄中具有较强的MtBMI1启动子表达活性。将MtBMI1在拟南芥中过表达进行功能分析，结果表明转基因拟南芥H2AK119ub组蛋白含量相比野生型显著（P<0.05）升高，同时干旱处理后的转基因株系相比野生型产生明显的失水表型，且根长、根鲜重和地上鲜重显著（P<0.05）低于野生型，丙二醛含量显著（P<0.05）高于野生型。以上结果表明MtBMI1在蒺藜苜蓿干旱胁迫响应中发挥负调控作用，该研究可为进一步揭示蒺藜苜蓿响应干旱胁迫的表观遗传调控机制提供理论依据。

关键词：蒺藜苜蓿 MtBMI1 基因克隆抗旱性

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九龙牦牛ELOVL3基因克隆、真核表达载体构建及组织表达谱分析

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华北农学报 2025年第02期 201-209页

作者：司比努尔·牙生江者玉琦钟金城武志娟柴志欣青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省重点实验室四川省青藏高原草食家畜工程技术中心

极长链脂肪酸延伸酶3(ELOVL3)主要参与合成极长链脂肪酸(VLCFA),在脂肪酸代谢过程中扮演重要角色。旨为克隆九龙牦牛ELOVL3基因的蛋白编码序列，构建ELOVL3基因真核表达载体，并预测分析其生物学功能，通过PCR技术扩增九龙牦牛ELOVL3基... 详细信息

极长链脂肪酸延伸酶3(ELOVL3)主要参与合成极长链脂肪酸(VLCFA),在脂肪酸代谢过程中扮演重要角色。旨为克隆九龙牦牛ELOVL3基因的蛋白编码序列，构建ELOVL3基因真核表达载体，并预测分析其生物学功能，通过PCR技术扩增九龙牦牛ELOVL3基因的CDS区序列，并通过同源重组将其插入到pcDNA3.1载体中以构建重组质粒。采用限制性酶切及PCR技术验证重组质粒，结合测序结果，利用在线预测软件分析其蛋白编码序列的生物学功能。另外，针对ELOVL3基因在mRNA水平和蛋白水平的表达量，进行qPCR和Western Blot检测。结果表明：九龙牦牛ELOVL3基因的蛋白编码序列全长813 bp,共编码270个氨基酸；酶切、PCR及测序鉴定，确认成功构建pcDNA3.1-ELOVL3真核表达载体。生物信息学分析结果显示，ELOVL3基因编码蛋白属于疏水性蛋白，共有6个跨膜结构域及27个磷酸化位点。系统发育树显示，与九龙牦牛亲缘关系最近的是普通牛，最远的是原鸡。此外，ELOVL3基因在九龙牦牛肺脏组织中表达量最高。

关键词：牦牛 ELOVL3基因基因克隆真核表达载体构建

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长牡蛎(Crassostrea gigas)环GMP-AMP合酶(cyclic GMP-AMP synthase,cGAS)的基因克隆与功能研究

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热带海洋学报 2025年第1期44卷 24-34页

作者：白晶毛帆刘客林宋菁晨喻子牛张扬暨南大学广东广州510632 中国科学院热带海洋生物资源与生态重点实验室中国科学院南海海洋研究所广东广州510301

环GMP-AMP合酶(cyclic GMP-AMP synthase,cGAS)是一种关键的细胞内传感器,能够识别细胞质内异常存在的DNA并触发免疫反应。为了揭示cGAS在软体动物先天性免疫调控中的重要作用,本研究成功克隆了长牡蛎中的cGAS基因(CgcGAS),其开放阅读框... 详细信息

环GMP-AMP合酶(cyclic GMP-AMP synthase,cGAS)是一种关键的细胞内传感器,能够识别细胞质内异常存在的DNA并触发免疫反应。为了揭示cGAS在软体动物先天性免疫调控中的重要作用,本研究成功克隆了长牡蛎中的cGAS基因(CgcGAS),其开放阅读框(open reading frame,ORF)全长1623bp,编码540个氨基酸,理论相对分子质量为62.3kDa,并具有保守的Mab21结构域。系统进化分析表明了CgcGAS为软体动物cGAS家族中的一员。定量逆转录聚合酶链式反应(qRTPCR)结果显示CgcGAS广泛表达于各组织,并在消化腺的相对表达量最高。亚细胞定位实验观察到CgcGAS蛋白在细胞核和细胞质中都有分布,主要定位于细胞核,提示其可能在细胞核内的DNA感应以及细胞质内的DNA结合和信号传递中发挥作用。另外,双荧光素酶报告基因系统和RNA干扰实验结果显示,CgcGAS能够显著激活核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)和干扰素刺激性反应元件(interferon-sensitive response element,ISRE)信号通路,及其下游的炎症相关因子干扰素诱导病毒抑制蛋白(virus inhibitory protein endoplasmic reticulum-associated interferon-inducible,viperin)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)及转录因子干扰素调节因子2/8(interferon regulatory factor 2/8,IRF2/8)的表达。综上所述,CgcGAS在长牡蛎的先天性免疫反应中的信号传递过程中发挥了关键作用。

关键词：长牡蛎先天性免疫环GMP-AMP合酶基因克隆功能

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羚牛IFN-γ基因克隆、生物信息学分析与原核表达

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西北农业学报 2025年第2期34卷 319-328页

作者：柳丽姚宇航刘晨阳张文涛马俊杰昝林森成功西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100 西北农林科技大学国家肉牛改良中心陕西杨凌712100

旨在研究羚牛γ干扰素(IFN-γ)基因结构与功能,为进一步增强羚牛的免疫调节能力提供理论依据。通过RT-PCR方法克隆羚牛IFN-γ基因,并运用多种生物信息学分析工具对其结构与功能进行深入研究。将IFN-γ基因序列连入原核表达载体,并转化... 详细信息

旨在研究羚牛γ干扰素(IFN-γ)基因结构与功能,为进一步增强羚牛的免疫调节能力提供理论依据。通过RT-PCR方法克隆羚牛IFN-γ基因,并运用多种生物信息学分析工具对其结构与功能进行深入研究。将IFN-γ基因序列连入原核表达载体,并转化大肠杆菌诱导表达。结果显示,羚牛IFN-γcDNA序列全长501 bp,编码166个氨基酸。蛋白高级结构预测结果显示,二级结构以α螺旋为主,存在13个磷酸化修饰位点,并含有1个信号肽、1个低度复杂区、1个跨膜结构域及1个IFN-γ结构域,其中IFN-γ结构域位于胞外区。序列比对分析发现其与绵羊、山羊、家牛、水牛、人、黑猩猩、小鼠、鸡的核苷酸序列同源性分别为99.0%、98.8%、97.2%、96.2%、75.8%、75.4%、64.1%、54.1%,氨基酸序列同源性分别为99.4%、99.4%、95.8%、95.8%、62.7%、62.7%、43.9%、33.5%。系统进化树分析结果显示,羚牛与山羊、绵羊的亲缘关系最近。经SDS-PAGE和Western-blot检测发现,重组IFN-γ蛋白以可溶性形式大量表达,分子质量约为34 ku。通过密码子优化及不同浓度IPTG诱导表达等原核表达优化策略发现,密码子优化能促进重组蛋白的高效表达,且最佳诱导浓度为0.9 mmol·L^(-1)。

关键词：羚牛 IFN-γ 基因克隆生物信息学分析原核表达 IPTG诱导

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棉蚜AgosOBP5基因克隆、表达纯化及结合特性研究

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应用昆虫学报 2025年第1期 123-133页

作者：王铁矿李峰奇刘思雨李增凤李秋荣青海大学农林科学院青海省农业有害生物综合治理重点实验室农业农村部西宁作物有害生物科学观测实验站贵州大学绿色农药全国重点实验室精细化工研究开发中心都兰林晟防沙治沙有限责任公司

【目的】棉蚜Aphis gossypii是枸杞Lycium chinense、棉花Gossypium herbaceum等作物上的一种成灾性害虫。明确气味结合蛋白与气味分子的结合特征及其在棉蚜嗅觉识别过程中发挥的作用，可为今后利用化学挥发物制作诱芯防治棉蚜提供理论... 详细信息

【目的】棉蚜Aphis gossypii是枸杞Lycium chinense、棉花Gossypium herbaceum等作物上的一种成灾性害虫。明确气味结合蛋白与气味分子的结合特征及其在棉蚜嗅觉识别过程中发挥的作用，可为今后利用化学挥发物制作诱芯防治棉蚜提供理论依据。【方法】基于转录组数据对棉蚜气味结合蛋白（OBPs）AgosOBP5基因进行全长克隆并开展生物信息学分析；构建原核表达载体并用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测；利用荧光竞争结合实验研究AgosOBP5重组蛋白与水杨酸甲酯、苯乙醇、苄醇、壬醛、1-辛烯-3-醇、棕榈酸这6种植物源气味分子的结合特征。【结果】棉蚜AgosOBP5基因全长为675 bp，编码224个氨基酸，含有12个保守半胱氨酸，预测理论相对分子量为54.50 kD。序列比对和系统进化树分析表明，棉蚜AgosOBP5氨基酸序列与大豆蚜Aphis glycines AglyOBP5同源性最高。经异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷（IPTG）诱导和SDS-PAGE检测，证明了AgosOBP5重组蛋白是可溶性蛋白，能够在上清液中表达。6种气味分子均可将AgosOBP5与N-苯基-1-萘胺（1-NPN）荧光探针体系的荧光强度值降到50%以下，不同的是水杨酸甲酯、2-苯乙醇、苄醇、壬醛、1-辛烯-3-醇这5种化合物从初始滴加，荧光值即开始下降，随后一直保持不断下降的趋势，而棕榈酸在浓度低于96μmol·L-1时荧光值呈升高趋势，随自身浓度不断升高后转为下降趋势。【结论】本研究明确了棉蚜AgosOBP5基因的核苷酸及其编码氨基酸序列，根据AgosOBP5与植物源挥发物水杨酸甲酯、2-苯乙醇、苄醇、壬醛、1-辛烯-3-醇的良好结合能力，推断AgosOBP5蛋白可能在棉蚜的嗅觉信息识别中起着重要的作用。

关键词：棉蚜气味结合蛋白基因克隆表达纯化荧光竞争结合

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鸡Fnip1基因克隆、组织表达及生物信息学分析

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江苏农业学报 2025年第1期41卷 119-125页

作者：黄正洋孔令琳王钱保李春苗吴兆林黄华云赵振华江苏省家禽科学研究所江苏扬州225125

为了明确鸡卵泡素相互作用蛋白1基因(Fnip1)特征及其表达规律,本研究选择苏禽3号黄羽肉鸡为试验材料,运用分子克隆技术扩增了鸡Fnip1基因CDS区序列全长,对其序列特性进行了生物信息学分析,构建了系统进化树;利用RT-qPCR方法检测了Fnip1... 详细信息

为了明确鸡卵泡素相互作用蛋白1基因(Fnip1)特征及其表达规律,本研究选择苏禽3号黄羽肉鸡为试验材料,运用分子克隆技术扩增了鸡Fnip1基因CDS区序列全长,对其序列特性进行了生物信息学分析,构建了系统进化树;利用RT-qPCR方法检测了Fnip1基因在鸡不同组织中的表达。结果获得鸡Fnip1基因CDS区,序列开放阅读框为3474 bp,位于第13号染色体16191415 bp至16251731 bp之间,编码1157个氨基酸。生物信息学分析结果显示,Fnip1基因有20个外显子,FNIP1蛋白含有FNIP_N、FNIP_M和FNIP_C等3个结构域;进化树显示,鸡先与鸟类聚为一类,再与哺乳动物聚为一支,在禽类上序列保守。FNIP1蛋白为亲水性蛋白,相对分子量为128310,理论等电点为5.25。蛋白质二级结构由α-螺旋(34.40%)、β-折叠(4.06%)、延伸链(13.74%)、无规则卷曲(47.80%)组成。表达分析结果显示,Fnip1基因在鸡的胸肌和腿肌中表达量显著高于其他组织。综上所述,本研究获得了鸡Fnip1基因CDS区序列全长,发现其在鸡肌肉组织中有较高表达。本研究结果可为进一步研究Fnip1基因在鸡肌肉生长发育中的分子机制研究奠定数据支撑。

关键词：鸡 Fnip1 基因克隆表达分析生物信息学分析

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刺参TRAF7基因克隆及其响应高温胁迫下的表达特征分析

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渔业科学进展 2025年第1期46卷 149-160页

作者：赵岩峰廖梅杰葛建龙王锦锦王印庚荣小军李彬谭颜廷上海海洋大学水产与生命学院上海201306 中国水产科学研究院黄海水产研究所农业农村部海洋渔业与可持续发展重点实验室山东青岛266071 青岛海洋科技中心海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室山东青岛266071

肿瘤坏死因子受体相关因子7 (tumor necrosis factor receptor associated factor 7, TRAF7)作为一种细胞内蛋白,参与信号转导,并介导宿主应激防御调控过程。为研究TRAF7在刺参(Apostichopus japonicus)高温胁迫中的作用,本研究利用c DN... 详细信息

肿瘤坏死因子受体相关因子7 (tumor necrosis factor receptor associated factor 7, TRAF7)作为一种细胞内蛋白,参与信号转导,并介导宿主应激防御调控过程。为研究TRAF7在刺参(Apostichopus japonicus)高温胁迫中的作用,本研究利用c DNA末端快速扩增技术(RACE)和实时荧光定量PCR技术(RT-qPCR),克隆了刺参TRAF7(Aj TRAF7)全长c DNA序列,分析了其结构特征和在基因组中的分布,并检测了该基因在刺参不同组织和高温胁迫过程中体壁组织中的表达变化情况。结果显示,AjTRAF7全长2 576 bp,开放阅读框(ORF)长1 770 bp,5'UTR长345 bp,3'UTR长461 bp,编码589个氨基酸,预测蛋白分子量为65.6 kDa,理论等电点(p I)为7.52。蛋白序列包含1个RING finger结构域、1个Coiled coil结构域和6个WD40结构域,N端包含1个螺旋区域。该基因预测蛋白包含41个丝氨酸磷酸化位点、20个苏氨酸磷酸化位点和3个酪氨酸磷酸化位点,蛋白N端具有3个天冬酰胺糖基化位点。刺参基因组中比对到2个AjTRAF7基因拷贝,第一个拷贝包含18个外显子和15个内含子,第二个拷贝包含17个外显子和14个内含子。系统进化学分析表明,刺参TRAF7氨基酸序列与蝠海星(Patiria miniata)和紫色球海胆(Strongylocentrotus purpuratus)相似性较高,分别为40.58%和38.37%,刺参与蝠海星和紫色球海胆聚在一支。RT-qPCR结果显示,Aj TRAF7在健康刺参各组织中均有表达,其在雌性性腺中表达量最高,体腔细胞中表达量次之,在呼吸树、体壁、肠道、雄性性腺和纵肌中表达量依次降低,各组织间表达量差异显著(P<0.05)。在响应高温胁迫的过程中,与对照组相比,体壁组织中AjTRAF7基因表达量在第2天和第4天显著上升(P<0.05),第6天基因表达开始下降。综上,AjTRAF7基因可能参与刺参应对高温胁迫的表达调控过程,相关结果将为解析刺参应对高温胁迫的分子机制提供科学依据。

关键词：刺参 TRAF7 高温胁迫基因克隆表达特征

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