检索结果-内蒙古大学图书馆

华南农业大学学报 2021年第5期42卷 60-68页

作者：姚琼全林发聂晶徐淑李文景董易之陈炳旭广东省农业科学院植物保护研究所/广东省植物保护新技术重点实验室广东广州510640

【目的】获得荔枝蒂蛀虫Conopomorpha sinensis 5个化学感受蛋白(Chemosensory proteins,CSPs)基因CsinCSPs的全长序列,并解析除虫脲对其表达的影响。【方法】提取荔枝蒂蛀虫卵总RNA,利用转录组测序结果和cDNA末端快速扩增技术(Rapid am... 详细信息

【目的】获得荔枝蒂蛀虫Conopomorpha sinensis 5个化学感受蛋白(Chemosensory proteins,CSPs)基因CsinCSPs的全长序列,并解析除虫脲对其表达的影响。【方法】提取荔枝蒂蛀虫卵总RNA,利用转录组测序结果和cDNA末端快速扩增技术(Rapid amplification of cDNA ends,RACE)获得5个CsinCSPs基因的全长序列;对序列进行生物信息学分析,用Phyre2在线软件进行同源建模,用AutoDock软件对蛋白与农药分子进行分子对接预测;用荧光定量PCR方法分析在除虫脲处理荔枝蒂蛀虫卵后这5个基因的表达情况。【结果】从荔枝蒂蛀虫卵中克隆了5个CsinCSPs基因的全长序列,序列分析结果表明,这5个基因的编码蛋白具有昆虫化学结合蛋白的典型特征,其保守半胱氨酸位点排布模式均为C1-X6-C2-X18-C3-X2-C4,并分为了包含5个α-螺旋和6个α-螺旋的2个类群。软件模板分析表明,5个CsinCSPs蛋白的三维结构均由α-螺旋、β-折叠和卷曲环组成,且与甘蓝夜蛾Mamestra brassicae CSP2的三维结构相似度最高。分子对接数据表明,5个CsinCSPs与2个菊酯类药剂分子结合亲和力最强,与除虫脲的结合力最弱。亚致死剂量除虫脲处理荔枝蒂蛀虫卵后,CsinCSP3和CsinCSP5分别在处理后6、24 h表达上调超过40余倍,48 h则表达下降。【结论】化学感受蛋白CsinCSPs可能参与农药胁迫下荔枝蒂蛀虫卵的解毒过程。

关键词：荔枝蒂蛀虫化学结合蛋白基因克隆序列分析分子对接除虫脲

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多鳞白甲鱼X型凝集素(OmITLN)基因克隆及在抗菌免疫中的功能研究

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水生生物学报 2023年第6期47卷 874-882页

作者：徐宏洲潘奎全韩喜盼蔡瑛婕闫晨阳刘成嵘王立新刘海侠西北农林科技大学动物科技学院杨陵712100

为探究秦巴山溪半洞穴鱼类——多鳞白甲鱼的先天性免疫因子X型凝集素的免疫功能,研究从多鳞白甲鱼(Onychostoma macrolepis)肝脏转录组数据库筛选出一种Intelectin基因片段,通过克隆鉴定获得Intelectin基因cDNA序列全长,命名为OmITLN;采... 详细信息

为探究秦巴山溪半洞穴鱼类——多鳞白甲鱼的先天性免疫因子X型凝集素的免疫功能,研究从多鳞白甲鱼(Onychostoma macrolepis)肝脏转录组数据库筛选出一种Intelectin基因片段,通过克隆鉴定获得Intelectin基因cDNA序列全长,命名为OmITLN;采用qRT-PCR分析OmITLN基因在健康多鳞白甲鱼8个组织和嗜水气单胞菌感染后两个免疫组织的表达情况;构建OmITLN基因的原核表达载体并在大肠杆菌BL21中诱导表达,获得OmITLN重组蛋白,采用ELISA法以及荧光标记法检测OmITLN对病原菌的凝集效果及糖结合情况。结果显示,OmITLN是一种X型凝集素基因,其cDNA全长960 bp,编码315个氨基酸。OmITLN蛋白含有1个N端的纤维蛋白原相关结构域(Fibrinogen-Related Domain,FReD)和1个C端Intelectin特异性区域,不具有信号肽和跨膜区。系统进化树分析发现,OmITLN与鲫、团头鲂、鳙、草鱼等鲤科鱼类的Intelectin聚为一支,亲缘关系最近。OmITLN基因在所检测组织均有表达,且在脾脏和肝脏中的表达量最高。腹腔注射1.65×107 CFU/尾的嗜水气单胞菌后,OmITLN基因在感染鱼的脾脏和肝脏组织的表达量均呈先上调后下降的趋势,但表达量达到最高值的时间不同,表明其两个组织对嗜水气单胞菌感染均有不同程度的免疫响应。试验利用原核表达系统成功纯化获得体外重组蛋白OmITLN,OmITLN重组蛋白对副溶血弧菌、嗜水气单胞菌、大肠杆菌、无乳链球菌、蜡状芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌均具有不同程度凝集作用。OmITLN重组蛋白对D-乳糖的结合活性最好,木糖、D-半乳糖、蔗糖和D-葡萄糖的结合活性次之,对海藻糖、D-果糖和D-麦芽糖没有结合活性;对肽聚糖(PGN)的结合活性高于脂多糖(LPS)。OmITLN作为重要的模式识别受体,参与了多鳞白甲鱼应答病原菌感染的防御过程。

关键词： Intelectin基因多鳞白甲鱼基因克隆原核表达免疫功能

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蒺藜苜蓿E3泛素连接酶U-box基因克隆及表达分析

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草业学报 2016年第7期25卷 62-72页

作者：邵麟惠郑兴卫李聪中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

泛素化在植物生长和发育过程中起重要作用,E3泛素连接酶负责对靶蛋白特异性识别,其中U-box结构的E3泛素连接酶具有调控植物生长发育和免疫反应等功能,并在抗逆性方面发挥作用。目前,关于蒺藜苜蓿U-box家族基因的研究尚未见报道。本研究... 详细信息

泛素化在植物生长和发育过程中起重要作用,E3泛素连接酶负责对靶蛋白特异性识别,其中U-box结构的E3泛素连接酶具有调控植物生长发育和免疫反应等功能,并在抗逆性方面发挥作用。目前,关于蒺藜苜蓿U-box家族基因的研究尚未见报道。本研究从蒺藜苜蓿中克隆得到U-box(MtPUB4)基因,该基因cDNA全长2448bp,编码815个氨基酸,包括1个U-box结构(C-X2-H-X7-C-X7-C-X2-C-H-X2-H)和5个ARM结构域,属于U-box/ARM类型E3泛素连接酶。构建原核表达载体pET-MtPUB4,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)表明在大肠杆菌中表达了MtPUB4蛋白。荧光定量PCR分析表明MtPUB4基因在蒺藜苜蓿花中的表达量最高,在根中表达量最低。MtPUB4基因受到NaCl、聚乙二醇、脱落酸诱导,随着诱导时间增加,表达量呈现出增长趋势。这些结果表明,MtPUB4基因在蒺藜苜蓿生长发育和抗逆性中可能起到重要调节作用,但在低温胁迫中表达量稍微下降,变化不明显。本研究成功构建了pBI121-MtPUB4植物表达载体,为进一步转化拟南芥突变体Atpub4奠定了基础。

关键词：蒺藜苜蓿 E3泛素连接酶 U-box 基因克隆表达分析

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三疣梭子蟹aqp2基因克隆及其在蜕皮中的功能

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水生生物学报 2022年第11期46卷 1694-1700页

作者：吴捷吕建建张伟伟李玉坤高保全刘萍上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心上海201306 中国水产科学研究院黄海水产研究所农业农村部海洋渔业可持续发展重点实验室青岛266071 青岛海洋科学与技术国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室青岛266235

为研究水通道蛋白AQP的生理功能,克隆了三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)水通道蛋白2基因(ptaqp2),该基因全长4126 bp,编码522个氨基酸,具有水通道蛋白基因家族的保守结构域及功能结构域;进化树聚类分析结果显示, ptaqp2基因属于... 详细信息

为研究水通道蛋白AQP的生理功能,克隆了三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)水通道蛋白2基因(ptaqp2),该基因全长4126 bp,编码522个氨基酸,具有水通道蛋白基因家族的保守结构域及功能结构域;进化树聚类分析结果显示, ptaqp2基因属于水通道蛋白基因家族C-AQP类基因;组织表达结果显示, ptaqp2呈泛组织表达特征,在眼柄中的表达量最高,在肠和肌肉中也有较高表达,在血淋巴中的表达最低;ptaqp2基因在不同蜕皮时期呈显著差异表达(P<0.05),且在蜕皮前期表达量最高;在蜕皮激素(Molting Hormone简称MH)刺激下,该基因在肌肉、肠及胃中均呈不同程度的上调表达趋势;通过RNAi技术在蜕皮前期敲降ptaqp2的表达,发现能够显著推迟蜕皮过程。研究初步证明了ptaqp2基因在三疣梭子蟹蜕皮中发挥重要作用。

关键词：水通道蛋白基因克隆蜕皮激素 RNA干扰三疣梭子蟹

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番茄叶绿体外膜转运蛋白(TOC复合体)组分鉴定、基因克隆与弱光胁迫下表达分析

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植物生理学报 2022年第2期58卷 294-308页

作者：王琪闫见敏岳江李云洲须文贵州大学农学院贵阳550025 贵州大学蔬菜研究院贵阳550025

叶绿体外膜转运蛋白(translocon of the outer membrane of chloroplasts,TOC)介导了数千种位于细胞质中由细胞核编码的前体蛋白的识别与初始转运,对叶绿体生物合成及正常行使生物学功能具有重要作用。为明确番茄TOC复合体组分及其表达... 详细信息

叶绿体外膜转运蛋白(translocon of the outer membrane of chloroplasts,TOC)介导了数千种位于细胞质中由细胞核编码的前体蛋白的识别与初始转运,对叶绿体生物合成及正常行使生物学功能具有重要作用。为明确番茄TOC复合体组分及其表达特性,本研究基于番茄(Solanum lycopersicum)全基因组数据对番茄TOC复合体进行组分鉴定,并对其染色体定位、基因结构、保守基序、系统进化及弱光胁迫下表达模式等进行了分析。结果表明,番茄基因组中鉴定到10个TOC组分,分布于8条染色体上,分为4个基因家族,同一家族中的成员具有相似的基因结构和基序。e Plant提供的组织表达数据显示,TOC复合体不同组分在番茄中的表达具有组织特异性。qRT-PCR分析发现,番茄果实成熟过程中TOC复合体组分基因表达水平高于叶片组织,在这一过程中SlToc34-1、SlToc159-1和SlToc75表达上调,SlToc34-2、SlToc159-2和SlToc120表达下调;弱光胁迫处理下SlToc159-2、SlToc34-1和SlToc120表达水平均受到抑制,SlToc159-1和SlToc34-2没有明显的变化。研究成功克隆了SlToc159-2、SlToc34-1和SlToc34-2基因的cDNA序列,它们的氨基酸推导序列与拟南芥TOC组分蛋白具有很高的同源性,表明番茄是一种新的研究TOC复合体的有效模式植物。本研究为进一步探究番茄TOC复合体组分的功能提供参考。

关键词：番茄叶绿体外膜转运蛋白 TOC复合体全基因组鉴定基因表达基因克隆

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草鱼AdipoR1-B基因克隆、组织分布及其表达的营养调控

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水产学报 2016年第7期40卷 993-1005页

作者：杨峰秦超彬卢荣华孙君君杨丽萍聂国兴河南师范大学水产学院河南省水产动物养殖工程技术研究中心

为探讨Adipo R1-B在鱼类糖类和脂质代谢中的作用,本实验采用RACE方法获得了草鱼Adipo R1-B的全长c DNA序列(登录号:KP733846),利用生物信息学技术对该基因及其所编码蛋白的结构特征进行了分析;采用实时定量PCR技术,检测了Adipo R1-B在1... 详细信息

为探讨Adipo R1-B在鱼类糖类和脂质代谢中的作用,本实验采用RACE方法获得了草鱼Adipo R1-B的全长c DNA序列(登录号:KP733846),利用生物信息学技术对该基因及其所编码蛋白的结构特征进行了分析;采用实时定量PCR技术,检测了Adipo R1-B在19个不同组织中的表达特性以及高糖(45%)、高脂(8%)和高糖高脂饲喂对草鱼肝脏中该基因表达的影响。结果显示,草鱼Adipo R1-B c DNA全长2186 bp,其中开放读码框为1122 bp,编码373个氨基酸;跨膜结构分析表明草鱼Adipo R1-B为典型的7次跨膜蛋白;同源性分析结果显示,草鱼Adipo R1-B与其他物种的Adipo R1-B高度同源(氨基酸相似度78%以上),并与斑马鱼Adipo R1-B的进化关系最近;组织分布结果显示,Adipo R1-B在草鱼肝脏中表达量最高,中枢神经系统和红肌次之;此外,高脂和高糖高脂饲喂均能够显著提高草鱼肝脏中Adipo R1-B的表达水平。因此,草鱼肝脏中Adipo R1-B的表达水平受到日粮中脂类水平的调控,推测该受体可能在调节鱼类脂质代谢中发挥重要作用。

关键词：草鱼脂联素受体基因克隆组织分布营养调控

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穗醋栗MYB10基因克隆结构分析及功能验证

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生物工程学报 2022年第1期38卷 275-286页

作者：冯秋影刘学杨琳琳付泽元徐启江东北林业大学生命科学学院东北盐碱植被恢复与重建教育部重点实验室黑龙江哈尔滨150040

为探究花色苷合成相关转录因子MYB10在不同颜色穗醋栗果实着色差异的分子机理,通过cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends, RACE)法从果实花青素含量有较大差异的黑穗醋栗(Ribes nigrum L.)、红穗醋栗(Ribes rubrum L.... 详细信息

为探究花色苷合成相关转录因子MYB10在不同颜色穗醋栗果实着色差异的分子机理,通过cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends, RACE)法从果实花青素含量有较大差异的黑穗醋栗(Ribes nigrum L.)、红穗醋栗(Ribes rubrum L.)和白穗醋栗(Ribes album L.)中分别克隆出MYB10基因,分别命名为RnMYB10 (KY786107)、RrMYB10 (KY786108)和RaMYB10(MW660848)。系统发育分析表明,RnMYB10和RrMYB10在进化上具有同源性。实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)结果表明:黑穗醋栗各时期果实中MYB10表达量均高于红穗醋栗且远远高于白穗醋栗。随着果实直径加大颜色加深,RnMYB10和RrMYB10表达量呈现先上升后下降的趋势(在果实转色程度75%时达到最大值),RaMYB10表达量极低,几乎无表达。过表达RnMYB10和RrMYB10的拟南芥呈现紫色叶柄和叶片,过表达RaMYB10的拟南芥无明显变化。说明MYB10基因在穗醋栗果实呈色中发挥重要作用。

关键词：穗醋栗 MYB10 基因克隆表达量功能验证

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山羊CIDE家族基因克隆分析及互作蛋白预测鉴定

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华北农学报 2022年第1期37卷 211-221页

作者：李琪杨昌恒王永林亚秋向华朱江江青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省重点实验室西南民族大学四川成都610041 青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室西南民族大学四川成都610041

旨在获得CIDEB、CIDEC基因的CDS,检测该家族基因在山羊不同组织中的表达量,预测其互作蛋白,为进一步揭示CIDE家族基因在脂代谢中的调控网络提供参考。主要利用RT-PCR克隆获得山羊CIDEB、CIDEC基因序列并利用在线工具分析CIDE家族蛋白的... 详细信息

旨在获得CIDEB、CIDEC基因的CDS,检测该家族基因在山羊不同组织中的表达量,预测其互作蛋白,为进一步揭示CIDE家族基因在脂代谢中的调控网络提供参考。主要利用RT-PCR克隆获得山羊CIDEB、CIDEC基因序列并利用在线工具分析CIDE家族蛋白的生物学特性,并预测其互作蛋白。利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测了CIDE家族基因在山羊不同组织中的表达水平,并检测各互作蛋白在其表达水平最高的组织中的表达量,利用SPSS分析其表达量之间的相关性。克隆获得了CIDEB基因CDS区660 bp,共编码219个氨基酸,CIDEC基因CDS区714 bp,编码237个氨基酸。进化树分析显示,山羊CIDEA、CIDEB、CIDEC均与绵羊亲缘关系最近。RT-qPCR检测发现CIDEA、CIDEB、CIDEC基因分别在山羊瘤胃、肝脏、小肠中表达量最高。CIDEA与DFFB和ELOVL3在瘤胃中的表达量具有极显著相关性(P<0.01),与DIO2、TMEM26、PRDM16、PLIN1具有显著相关性(P<0.05)。CIDEB与DFFA和SDR39U1在肝脏中的表达量具有显著相关性(P<0.05)。CIDEC与PLIN2、GPLD1、ADIPOQ在小肠中的表达量具有显著相关性(P<0.05)。通过分析发现了与CIDE家族表达量具有相关性的基因,可为进一步揭示CIDE基因在脂质代谢中的作用及其调控网络提供理论基础,且CIDE家族蛋白均为脂滴相关蛋白,也可为进一步研究精确的脂滴形成机制提供参考。

关键词：山羊 CIDE家族 RT-qPCR 脂滴基因克隆

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油菜FBA基因克隆、表达分析及其与抗旱性的关系

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生态学报 2020年第16期40卷 5708-5717页

作者：谢小玉何巧丽侯爽张小短马仲炼西南大学农学与生物科技学院重庆400715

为了解果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(fructose-1,6-bisphosphate aldolase,FBA)在油菜抗旱中的作用,揭示油菜干旱胁迫下FBA基因表达量、光合指标、产量等之间的关系,为油菜等作物抗旱性鉴定和抗旱性改良提供依据。以抗旱性强的甘蓝型油菜9400... 详细信息

为了解果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(fructose-1,6-bisphosphate aldolase,FBA)在油菜抗旱中的作用,揭示油菜干旱胁迫下FBA基因表达量、光合指标、产量等之间的关系,为油菜等作物抗旱性鉴定和抗旱性改良提供依据。以抗旱性强的甘蓝型油菜94005为材料,在初花期进行干旱胁迫处理,以正常浇水作为对照;测定叶片光合参数和FBA酶活性,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析FBA基因的表达量;采用RACE方法对FBA基因进行全长克隆,并对测序结果进行生物信息学分析;复水后生长至成熟期测定产量,分析产量、光合指标、FBA基因表达量等之间的关系。结果表明,随着干旱的加剧,油菜叶片的净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)、蒸腾速率(Tr)、产量均下降,FBA活性和FBA基因的表达量上升。在轻度、中度和重度干旱胁迫下,油菜叶片胞间CO2浓度(Ci)显著下降,水分利用率(WUE)上升;极度胁迫下,Ci上升,WUE下降;油菜产量、净光合速率与FBA活性和FBA表达量呈显著负相关。FBA基因全长序列1440bp,ORF(开放阅读框)位于60—1172区域,编码370个氨基酸;蛋白分子量为38.51 KDa,等电点6.92;同源性对比显示,甘蓝型油菜FBA基因与拟南芥FBA基因的一致性在87%以上。二级结构预测结果表明FBA蛋白由α-螺旋、无规则卷曲、延伸链以及β-转角组成,4种二级结构元件所占比例分别为43.85%、31.28%、17.60%、7.26%。因此,干旱胁迫下油菜的净光合速率下降、产量降低,随着胁迫的加剧,降低幅度增大。FBA基因与干旱胁迫密切相关,干旱胁迫下,FBA基因主要通过抑制光合、降低蒸腾、促进糖酵解和有氧呼吸等途径来提高植物对干旱胁迫的适应性。

关键词：甘蓝型油菜干旱胁迫光合果糖-1 6-二磷酸醛缩酶(FBA) 基因克隆表达分析

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薏苡3-酮酯酰-CoA合酶基因克隆和生物信息学分析

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药学学报 2021年第2期56卷 610-617页

作者：魏小艳李勇郭娟王雅南黄璐琦江西中医药大学院士工作站江西南昌330004 中国中医科学院中药资源中心道地药材国家重点实验室培育基地北京100700

3-酮酯酰-CoA合酶(3-ketoacyl-CoA synthase,KCS)基因是调控长链脂肪酸生物合成过程中的关键基因,在薏苡的生长发育过程中起着重要的调控作用。本文以薏苡(Coix lacryma-jobi L.)作为实验材料,根据转录组测序数据,从薏苡的cDNA中克隆出... 详细信息

3-酮酯酰-CoA合酶(3-ketoacyl-CoA synthase,KCS)基因是调控长链脂肪酸生物合成过程中的关键基因,在薏苡的生长发育过程中起着重要的调控作用。本文以薏苡(Coix lacryma-jobi L.)作为实验材料,根据转录组测序数据,从薏苡的cDNA中克隆出KCS基因,并对其进行生物信息学分析。结果表明,薏苡KCS基因的cDNA全长序列为1548 bp,编码515个氨基酸,生物信息学预测结果显示该基因编码蛋白质为碱性亲水不稳定蛋白,分子质量为58608.12 Da,等电点为9.20,含有2个跨膜螺旋结构域,不含信号肽剪切位点,亚细胞定位主要在质体膜。多序列比对和进化树分析结果显示薏苡KCS与玉米、水稻、节节麦、高粱和小米等单子叶植物的同种基因具有3个相同的保守位点,而且亲缘关系更近,由此证明该基因在这些同科植物间的进化是保守的。此外,基因的表达分析结果显示KCS基因在不同油脂含量的薏苡资源中有明显的差异变化。本实验对KCS基因的克隆及其结构、性质等的研究有利于深入研究该蛋白在脂肪酸合成过程中的调控机制。

关键词：薏苡 3-酮酯酰-CoA合酶基因克隆生物信息学分析

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