检索结果-内蒙古大学图书馆

中国肺癌杂志 2003年第3期6卷 172-175页

作者：张洪涛汪惠赖百塘张春燕杨学惠北京市结核病胸部肿瘤研究所细胞生物学研究室北京市肿瘤分子生物学重点实验室肺癌分室 101149

目的　克隆野生型 p5 3 (wtp5 3 )影响人大细胞肺癌 80 1 D细胞系顺铂敏感性相关基因片段。方法　采用转基因方法补偿 80 1 D细胞p5 3功能 ,分别提取经IC50 浓度顺铂刺激的转染wtp5 3细胞、空载细胞和未经顺铂作用的转wtp5 3细胞RNA ,... 详细信息

目的　克隆野生型 p5 3 (wtp5 3 )影响人大细胞肺癌 80 1 D细胞系顺铂敏感性相关基因片段。方法　采用转基因方法补偿 80 1 D细胞p5 3功能 ,分别提取经IC50 浓度顺铂刺激的转染wtp5 3细胞、空载细胞和未经顺铂作用的转wtp5 3细胞RNA ,用银染mRNA差异显示方法分离差异表达基因 ,反转录点杂交和巢式PCR进行确证。阳性片段进行克隆及序列分析。结果　获得 6条阳性片段 ,2条含有开放阅读框架(ORF) ,其中 1条片段部分与核糖核苷还原酶α链有 5 6%同源性 ,另一片段D1含有一个长ORF ,与已知cDNA序列同源率低。结论　p5 3对 80 1 D细胞顺铂敏感性的影响有明显的基因水平改变 ,可能诱导了相关基因表达。

关键词：肺肿瘤 p53基因顺铂药物敏感性基因片段克隆肺癌

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EBV、HPV基因片段和PTEN抑癌基因在肺癌发生中的作用

EBV、HPV基因片段和PTEN抑癌基因在肺癌发生中的作用

引用

作者：张蕾中国协和医科大学

学位级别：博士

在我们以往的研究中发现80例不同组织学类型的肺癌标本中EBV感染率40％，120例肺鳞癌标本中HPV检出率达35％。PTEN是新近发现的第一个具磷酸酯酶活性的抑癌基因，在多种肿瘤中均有突变．为了研究EBV、HPV和PTEN在肺癌发生中的作用，我... 详细信息

在我们以往的研究中发现80例不同组织学类型的肺癌标本中EBV感染率40％，120例肺鳞癌标本中HPV检出率达35％。PTEN是新近发现的第一个具磷酸酯酶活性的抑癌基因，在多种肿瘤中均有突变．为了研究EBV、HPV和PTEN在肺癌发生中的作用，我们①将EBV和HPV基因片段以及正义和反义PTEN转染人支气管上皮永生化细胞系TR，观察它们对TR细胞的转化作用；②检测人肺癌中PTEN的杂合性丢失（LOH）和失活：③将PTEN转入PTEN-/-（PTEN纯和性丢失）的小细胞肺癌细胞系，观察转染后癌细胞的生长情况。 ***1和EBNA2是EBV最主要的转化相关基因，将LMP1和EBNA2的真核表达质粒pBS-LMP1-Hyg，pSG5-EBNA2-Hyg用Dosper介导共转染TR细胞，得到抗药性细胞株TR／LMP1-EBNA2。经原位杂交和Western blot证实TR／LMP1-EBNA2中有LMP1和EBNA2在RNA和蛋白水平的共同表达。转化细胞体积变小，折光性增强，生长曲线和MTT值显示生长加快，软琼脂集落形成率增高（TR／LMP1-EBNA2为5.01％，6.82％：TR／Hyg为0.2％，0.3％；TR细胞为0.1％，0.07％）。虽然EB病毒基因可以使永生化支气管上皮细胞向恶性表型转化，但尚不具裸鼠致瘤性。 2．将HPV-16的转化相关片断E6E7构建入逆转录病毒载体pBahe-puro得到质粒pBabe／E6E7，转染TR细胞。Southern，Northern和Western blot证实TR／E6E7中有E6E7的存在和稳定表达。TR／E6E7细胞除在3H-TdR掺入、MTT、生长曲线这些指标上表现出生长加快的特性外，还具较TR／LMP1-EBNA2细胞更高的软琼脂集落形成率（TR／E6E7细胞为9.21％，9.48％），并在裸鼠体内形成肿瘤。因此，HPV在肺癌发生中可能具有较强作用。免疫沉淀-Western blot实验还显示TR／E6E7细胞中与cyclin E／CDK2结合的p27蛋白数量减少，即cyclin E／CDK2活性增强，细胞将从G1

关键词：小细胞肺癌 HPV 肺癌细胞系抑癌基因 EBV 基因片段

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青岛文昌鱼NADH脱氢酶亚基I基因片段的克隆

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山东大学学报（理学版） 2002年第1期37卷 88-90,94页

作者：梁恺龙张晓辉张红卫山东大学生命科学学院济南250100

NADH脱氢酶亚基I是细胞电子传递链的主要成员之一 .采用简并引物PCR方法获得青岛文昌鱼NADH脱氢酶亚基I基因片段 ,将其氨基酸序列与其他生物如佛罗里达文昌鱼 ,斑马鱼 ,爪蟾等无脊椎和脊椎动物NADH脱氢酶亚基I基因相应片段进行了同源性... 详细信息

NADH脱氢酶亚基I是细胞电子传递链的主要成员之一 .采用简并引物PCR方法获得青岛文昌鱼NADH脱氢酶亚基I基因片段 ,将其氨基酸序列与其他生物如佛罗里达文昌鱼 ,斑马鱼 ,爪蟾等无脊椎和脊椎动物NADH脱氢酶亚基I基因相应片段进行了同源性分析 ,均显示较高的同源性 .研究结果证实青岛文昌鱼作为脊索动物的代表之一 ,与脊椎动物有着较近的亲缘关系。

关键词：青岛文昌鱼 NADH脱氢酶亚基I 基因片段基因克隆脊索动物同源性分析线粒体

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EB病毒基因片段的生物学活性——Ⅰ、基因片段转染、细胞转化与裸鼠成瘤的研究

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癌症 1989年第1期8卷 9-12页

作者：陈剑经胡利富陈小君姚进陈系古蒋金荃高宏光李晓林徐雪芳顾健人中山医科大学肿瘤研究所上海市肿瘤研究所

过去有人提出EBV—DNA是通过病毒颗粒感染,或者是携带EBV基因的细胞与宿主细胞融合这两种途径之一,导致病毒基因转输入宿主细胞DNA。近年我们注意到:基因片段转染,是基因转移和导致细胞转化的一种重要形式。本实验应用DNA介导的基因转... 详细信息

过去有人提出EBV—DNA是通过病毒颗粒感染,或者是携带EBV基因的细胞与宿主细胞融合这两种途径之一,导致病毒基因转输入宿主细胞DNA。近年我们注意到:基因片段转染,是基因转移和导致细胞转化的一种重要形式。本实验应用DNA介导的基因转移的钙沉淀改良法,在体外培养将EBV重复序列区的BamHl—W及其相邻片段转染宿主细胞(大鼠成纤维细胞,Rat—1),3周内出现转化灶,经半固体培养基进行转化选择,从而获得多株高效转化克隆,其中W_4和W_(10)通过裸鼠体内接种与鼠间移植,最后建立高移植成功率(94—100％)的可移植性裸鼠瘤(CH—1,CH—2)。经SP6/T7RNA多聚酶诱导RNA探针、缺口翻译DNA探针和亚细胞定位的原位杂交探针综合应用,测知经EBV基因片转转染后多次传代的转化细胞(W_(10),W_4)和多次移植的裸鼠瘤(CH—1,CH—2)DNA中存在着EBV基因片段。另一方面,测知人类的鼻咽癌组织和Burkitt淋巴瘤细胞株以及绒猴的EBV转化细胞株中,恒定地整合着该基因片段。因此,EBV基因片段的活性及其在癌变过程中的作用,与癌基因激活等问题值得进一步研究。

关键词： EB病毒基因片段转染转化

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人甲状腺乳头状癌高表达基因片段筛选与克隆

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中华内分泌代谢杂志 2004年第5期20卷 464-466页

作者：王红卫洪涛刘江华曹仁贤文格波南华大学附属第一医院临床医学研究所衡阳421001

应用抑制性消减杂交技术构建人甲状腺乳头状癌cDNA消减文库 ,并从中克隆了 3个cDNA片段 ,通过测序 ,同源性分析 ,表明这些片段与来自恶性肿瘤相关基因片段具有同源性 ,提示他们可能在甲状腺癌的发生发展中起到某种重要作用。

关键词：甲状腺乳头状癌高表达克隆基因片段消减文库发生发展抑制性消减杂交技术 DNA片段测序同源性分析

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利用mRNA差异显示技术分离和克隆玉米抗大斑病相关基因片段

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植物病理学报 2005年第5期35卷 463-465页

作者：谷守芹范永山韩建民董金皋河北农业大学真菌毒素实验室保定071000

玉米大斑病是由玉米大斑病菌（Setosphaeria mrcica)引起的玉米叶部主要病害。在玉米的搞病反应中玉米与大斑病菌间存在着复杂的互作关系。要阐明玉米与搞病过程中抗病基因、参与信号转导基……

关键词： mRNA差异显示技术玉米大斑病菌基因片段技术分离克隆抗病反应抗病相关基因抗病过程基因表达互作关系

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SARS冠状病毒S1基因片段真核表达载体的构建及其活性测定

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第9期25卷 716-717页

作者：蔡恒玲吴移谋万艳平肖建华杨秋林尹卫国陈丽丽南华大学病原微生物学研究所衡阳421001 南华大学寄生虫教研室南华大学公共卫生学院

严重急性呼吸综合征（severe acute respiratory syndrome,SARS）病原体是SARS冠状病毒（SARSCoV）,研究开发安全有效的SARS-CoV疫苗以控制SARS成为热点.经过对12株SARS冠状病毒基因序列比较,发现S蛋白的氨基酸突变率仅为0.23%,其较高... 详细信息

严重急性呼吸综合征（severe acute respiratory syndrome,SARS）病原体是SARS冠状病毒（SARSCoV）,研究开发安全有效的SARS-CoV疫苗以控制SARS成为热点.经过对12株SARS冠状病毒基因序列比较,发现S蛋白的氨基酸突变率仅为0.23%,其较高的保守性为疫苗研究奠定了良好的基础,由此,S蛋白成为候选疫苗的重要靶位.pcDNA3.1（＋）是一种高效率的质粒型真核表达载体.本研究将SARS-CoV的S1基因片段连至真核表达载体pcDNA3.1（＋）,构建重组pcDNA3.1（＋）/S1并初步研究其免疫效果.[第一段]

关键词： SARS冠状病毒真核表达载体基因片段活性测定 pcDNA3.1(+) SARS-CoV 严重急性呼吸综合征 syndrome 控制SARS

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弓形虫表面抗原SAG3基因片段克隆及序列测定

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中国人兽共患病杂志 2003年第3期19卷 28-30,54页

作者：周永安余新炳吴忠道郑焕钦徐劲中山大学中山医学院寄生虫学研究所广州510089

目的　克隆弓形虫ZS2及RH株SAG3表面抗原基因片段 ,并进行序列分析。方法　设计合成引物 ,从弓形虫ZS2、RH及ZS1株基因组DNA中分别特异扩增出编码SAG3抗原的基因片段。扩增的目的片段经纯化后用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后 ,克隆到原核表达... 详细信息

目的　克隆弓形虫ZS2及RH株SAG3表面抗原基因片段 ,并进行序列分析。方法　设计合成引物 ,从弓形虫ZS2、RH及ZS1株基因组DNA中分别特异扩增出编码SAG3抗原的基因片段。扩增的目的片段经纯化后用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后 ,克隆到原核表达质粒 pGEX - 4T - 2中 ,转化入大肠杆菌JM10 9,用PCR初筛 ,将PCR扩增阳性的重组子用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切鉴定 ,并进行序列的测定。结果　从弓形虫ZS2、RH和ZS1株DNA中扩增出 1176bp的SAG3基因 ,构建重组质粒 pGEX - 4T - 2 -SAG3(pGEX -SAG3) ,酶切产物的大小分别与预期相符。结论　成功地对弓形虫ZS2、RH和ZS1株SAG3基因进行体外扩增及构建原核表达重组质粒 pGEX -SAG3,并经酶切及序列分析所验证 ,为弓形虫SAG3表面抗原的表达、体外诊断研究做好准备。

关键词：弓形虫表面抗原 SAG3 基因片段克隆序列测定

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太平洋牡蛎核糖体DNA转录间隔子和线粒体基因片段序列测定(英文)

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中国水产科学 2002年第4期9卷 304-308页

作者：孔晓瑜张留所喻子牛刘亚军王清印青岛海洋大学教育部海水养殖重点实验室山东青岛266003 中国水产科学研究院黄海水产研究所山东青岛266071

以相应引物经PCR扩增了太平洋牡蛎 (Crassostreagigas)的核糖体转录间区域 (ITS 1和ITS 2 )及线粒体 16SrDNA和COI基因片段。PCR产物经T 载体连接后进行克隆和测序 ,分别得到长度为 5 4 3、791、5 30和 70 0bp的核苷酸序列。 4个DNA片段... 详细信息

以相应引物经PCR扩增了太平洋牡蛎 (Crassostreagigas)的核糖体转录间区域 (ITS 1和ITS 2 )及线粒体 16SrDNA和COI基因片段。PCR产物经T 载体连接后进行克隆和测序 ,分别得到长度为 5 4 3、791、5 30和 70 0bp的核苷酸序列。 4个DNA片段的A、T、G和C碱基含量分别为 2 3.5 7%、2 0 .0 7%、2 9.4 7%和 2 6 .89% (ITS 1) ,2 7.4 3%、19.2 2 %、2 7.0 5 %和2 6 .30 % (ITS 2 ) ,2 9.2 5 %、2 9.2 5 %、2 3.0 2 %和 18.4 9% (16SrDNA) ,2 2 .71%、39.4 3%、2 0 .4 3%和 17.4 3% (COI)。实验证明ITS 1和ITS 2引物在贝类中通用性良好。文中同时讨论了

关键词：太平洋牡蛎核糖体 DNA转录间隔子线粒体基因片段序列测定

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丙型肝炎病毒基因变异及不同基因片段抗原的反应性研究

丙型肝炎病毒基因变异及不同基因片段抗原的反应性研究

引用

作者：张庶民北京医科大学北京大学

学位级别：博士

为了探讨HCV基因变异和不同基因片段抗原在HCV诊断中的作用,研究小组从以下几方面进行了研究.一.HCV5'非编码区和核心区基因变异研究.通过比较不同时点分离的HCV5'非编码区和核心区序列发现,二者除由于型别转换而发生... 详细信息

为了探讨HCV基因变异和不同基因片段抗原在HCV诊断中的作用,研究小组从以下几方面进行了研究.一.HCV5'非编码区和核心区基因变异研究.通过比较不同时点分离的HCV5'非编码区和核心区序列发现,二者除由于型别转换而发生明显差异外,同一基因型的该两个区段序列相对保守,除核心区发生1-2个核苷酸的沉默变异外,5'非编码区无变异,其保守性大于核心区.二.HCV膜区基因的变异研究.研究结果显示,HCV膜区基因随着时间的推移而变异,时间越长,变异越大;在两个HCV基因型转换期存在混合感染现象.三.单片段抗-HCV抗体EIA检测法的建立及应用.该研究建立了HCV不同基因片段抗原抗-HCV EIA法,并用其检测丙型肝炎病人的系列血清及各类HCV感染病人.结果发现,核心和NS<,3>抗原在早期检测和检出率上都优于其它抗原.但NS<,4>抗原的检测作用不容忽视.用大肠杆菌表达的E<,1>、E<,2>抗原检测各类血清标本的阳性率虽较低,但有1例病人的系列血清中抗-E抗体首先阳转.在HCV RNA阳性标本中,抗-E<,1>、E<,2>抗体的阳性率显著低于其它区段抗体阳性率.四.HCV抗原质量评价.对国内外几种核心和NS<,3>抗原初步分析表明,某些国产核心抗原的质量已达到或超过国外抗原,而国产NS<,3>抗原相对较差,主要原因是:(1)抗原位点覆盖不够;(2)抗原纯度较低.五.新型丙型肝炎国产诊断试剂与第三代进口试剂的比较.用国产新伟凯公司产品与国外同代HCV EIA试剂比较结果显示,国产新一代HCV诊断试剂与国外第三代试剂相比,在供血员和肝炎病人中检出率比较接近.但特异性略逊于国外两种主流试剂.国产试剂应在以下两个方面进行改进:(1)NS<,5>抗原的检测作用;(2)进一步提高原料抗原纯度,减少非特异性.

关键词：丙型肝炎病毒基因变异基因片段

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