检索结果-内蒙古大学图书馆

果树学报 2010年第4期27卷 551-555页

作者：童和林冯素萍陈友陈业渊孙光明武耀廷海南大学农学院海口570228 中国热带农业科学院热带作物生物技术研究所农业部热带作物生物技术重点开放实验室海口571101 琼州大学海南五指山572200 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所海南儋州571737 中国热带农业科学院南亚热带作物研究所广东湛江524091

实验采用SAM法,以"台农17号"菠萝作为开发基因组ssr分子标记的植物材料,并对开发获得的ssr标记在16个菠萝品种中进行了验证。利用两对锚定引物和12对接头引物筛选菠萝基因组SAM文库,从中开发得到86条含有ssr位点的序列,对这8... 详细信息

实验采用SAM法,以"台农17号"菠萝作为开发基因组ssr分子标记的植物材料,并对开发获得的ssr标记在16个菠萝品种中进行了验证。利用两对锚定引物和12对接头引物筛选菠萝基因组SAM文库,从中开发得到86条含有ssr位点的序列,对这86条序列用MISA软件搜索后得到94个ssr位点,其中单核苷酸重复3个,二核苷酸重复91个。二核苷酸重复仅有2种重复单元,一种是GA/CT,占二核苷酸重复总数的57.14%(52/91),另一种是AC/GT,占二核苷酸重复总数的42.86%(39/91)。研究未发现三核苷酸及以上的重复单元。36对ssr引物对16个材料的扩增结果显示,24对引物能够扩增出清晰、重复性好且符合预期大小的条带,其中13对引物具有多态性,可成为下一步构建菠萝指纹图谱、遗传多样性分析及基因定位等研究中有用的ssr标记。

关键词：菠萝基因组ssr标记开发验证

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常绿杜鹃种质遗传多样性分析及ssr指纹图谱构建

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园艺学报 2025年第2期52卷 380-394页

作者：张露张平萍解玮佳许凤彭绿春宋杰杜光辉李世峰云南省农业科学院花卉研究所国家观赏园艺工程技术研究中心云南省花卉育种重点实验室昆明650205 云南大学资源植物研究院昆明650504

利用马缨杜鹃(Rhododendron delavayi Franch.)基因组测序数据进行genomic-ssr的分布特征分析和多态性ssr引物开发,并对61份常绿杜鹃种质进行亲缘关系分析和指纹图谱构建,以实现种质间亲缘关系聚类及其亲本来源推测。开发出了15对多态... 详细信息

利用马缨杜鹃(Rhododendron delavayi Franch.)基因组测序数据进行genomic-ssr的分布特征分析和多态性ssr引物开发,并对61份常绿杜鹃种质进行亲缘关系分析和指纹图谱构建,以实现种质间亲缘关系聚类及其亲本来源推测。开发出了15对多态性高、稳定性好、亚属间通用性强的ssr引物,在61份种质中共检测到等位基因位点126个,每对引物的平均等位基因数(N_(a))为8.400,平均有效等位基因数(N_(e))为3.4681,平均观测杂合度(H_(o))和期望杂合度(H_(e))分别为0.3421和0.5347,平均多态信息含量(PIC)为0.6338。群体遗传结构分析结果将61份常绿杜鹃种质分成3个亚类群,与亲缘关系聚类结果基本一致,结合已知谱系资料推测所引进日本品种的祖先亲本来源于两个不同的分布地,且包括自育品种在内的所有品种均是以常绿杜鹃亚属(***)常绿杜鹃组(***)内物种为亲本的杂交种。利用5个ssr标记成功构建出61份常绿杜鹃种质的指纹图谱。

关键词：常绿杜鹃基因组ssr标记遗传多样性指纹图谱

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毛竹镁原卟啉甲酯环化酶基因研究及ssr标记开发应用

毛竹镁原卟啉甲酯环化酶基因研究及SSR标记开发应用

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作者：杨丽中国林业科学研究院

学位级别：博士

光合作用是生物界获取能量、食物以及氧气的根本途径，而叶绿素是植物光合作用吸收光能的主要载体，其生物合成需要15步反应，涉及15种酶，其中镁原卟啉单酯环化酶（MPEC）在叶绿素生物合成的碳环形成过程中发挥着重要的作用，如果将编... 详细信息

光合作用是生物界获取能量、食物以及氧气的根本途径，而叶绿素是植物光合作用吸收光能的主要载体，其生物合成需要15步反应，涉及15种酶，其中镁原卟啉单酯环化酶（MPEC）在叶绿素生物合成的碳环形成过程中发挥着重要的作用，如果将编码MPEC的基因敲除，植物会出现致死现象。毛竹（Phyllostachys edulis）基因组草图的发布为基因功能的研究，分子标记的开发与应用奠定了基础。本研究以重要经济竹种毛竹为材料，从中分离MPEC同源基因，研究其时空表达模式，通过转基因技术验证其功能。然后根据毛竹基因组数据，搜索与毛竹光合作用途径相关基因中搜索ssr位点，开发ssr分子标记，对刚竹属植物的遗传多样性分析。主要结果如下： 1基因获得采用同源比对方法从毛竹全长cDNA文库中得到1个MPEC基因同源序列（Genbank：FP092998），命名为PeMPEC。该基因全长1474bp，5′和3′非编码区分别长23bp和206bp，编码区为1248bp，编码415个aa，推断其分子量为49.3kD。PeMPEC编码区对应的基因组序列为1864bp，其中含有5个外显子和4个内含子。蛋白结构分析表明，PeMPEC基因编码的蛋白具有两个拷贝的EXnDEXRH和一个亮氨酸拉链结构，该蛋白序列与拟南芥（Arabidopsis thaliana）中MPEC的同源性为73.6%，与水稻（Oryza sative）等禾本科植物的MPEC同源性均在85.0%以上，进化上具有较高的保守性。 2基因时空表达特异性半定量PCR检测表明， PeMPEC基因主要在毛竹光合器官叶片中表达，而根中检测不到表达。qRT-PCR结果表明，黑暗条件可诱导PeMPEC基因的表达，随着光照强度的增强（100-1500μmol m-2s-1）基因的表达受到抑制;高温（42℃）抑制基因的表达，而短时间内（0.5h）基因表达受低温（4℃）的诱导，随着低温处理时间增加，基因表达受到抑制;PeMPEC基因在毛竹黄化苗中仅检测到微弱表达，随着光照（200μmol m-2s-1）时间延长，基因表达量逐渐上升，8h的表达量上升为对照的80%。 3基因在拟南芥中异位表达构建PeMPEC正、反义植物表达载体，分别转化拟南芥。表型分析显示，正义转基因植株与野生型拟南芥表型没有明显的区别;反义转基因植株则生长缓慢，叶片出现叶绿素缺乏症状，呈浅黄色。半定量RT-PCR结果表明，PeMPEC基因在5个转基因株系中均有表达，其中在正义转基因株系S-5中最高，反义转基因株系A-4中最低。色素含量分析表明，正义转基因株系叶绿素含量比野生型增加了20%以上，而反义转基因株系叶绿素含量降低，其中A-2株系的叶绿素含量仅为野生型的58%。叶绿素荧光参数测定结果显示，与野生型相比反义转基因株系A-1和A-2的Fv/Fm、Y(Ⅱ)和ΔI/I值均显著下降（p<0.05），而转正义基因株系虽有所增加，但差异不显著。由此表明，转基因植株叶绿素的含量受到了的影响，PeMPEC基因对叶绿素的生物合成具有调控作用。 4基因功能互补实验在拟南芥T-DNA插入Crd1突变体（SALK-024716C）中过量表达PeMPEC基因，获得了恢复到野生型表型的转基因植株。半定量结果表明，PeMPEC基因在转基因植株中均有表达，其中转在基因株系M-4中表达量最高，M-1中最低。叶绿素含量测定结果表明，转基因植株的总叶绿素含量比突变体的高22-50%，比野生型的高7-20%左右。叶绿素荧光参数测定结果显示，转基因植株的Fv/Fm、Y(Ⅱ)和ΔI/I值比突变体显著增加（p<0.05），而与野生型植株相近。证明PeMPEC基因的过量表达可以提高叶绿素的含量，对维持PSⅠ和PSⅡ的稳定具有重要的作用。 5Western Blotting检测构建PeMPEC基因的原核表达载体，转化大肠杆菌表达菌株（Rosetta-gamin B (DE3)）感受态细胞，并进行诱导表达。通过条件优化，在28℃条件下用0.4mmol·L-1IPTG诱导4h，获得了表达丰度较高的可溶蛋白。蛋白纯化结果表明，在大肠杆菌中分离出一个60kDa的重组蛋白，并利用该蛋白制备多克隆抗体。分别提取毛竹根、茎、叶鞘和叶片组织的总蛋白，SDS-PAGE电泳后，以PeMPEC的多克隆抗体为探针进行杂交。Western Blotting结果表明，PeMPEC主要于叶片组织中积累。 6毛竹基因组ssr特点对毛竹全基因组数据进行ssr搜索，共筛选出302615个ssr位点，平均1Mb序列中出现147.5个ssr，其中单核苷酸和二核苷酸重复类型为主，占总ssr的87.33%。在单核苷酸重复单元中，以A/T的单核苷酸重复占主导地位，占单核苷酸重复总数的72.00%，;二核苷酸重复基序中AG/CT重复类型占得比例

关键词：毛竹叶绿素生物合成镁原卟啉单酯环化酶基因功能分析基因组ssr标记聚类分析

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大豆对大豆花叶病毒抗性遗传、抗性基因精细定位及表达分析

大豆对大豆花叶病毒抗性遗传、抗性基因精细定位及表达分析

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作者：王大刚南京农业大学

学位级别：博士

大豆花叶病毒（Soybean mosaic virus, SMV）病是世界大豆产区分布最广的病毒病害之一,在我国各大豆产区均有发生,严重影响大豆的产量与品质。培育和种植抗病品种是防治该病害最经济、安全、有效的途径,而抗病育种的关键是具备优异抗源... 详细信息

大豆花叶病毒（Soybean mosaic virus, SMV）病是世界大豆产区分布最广的病毒病害之一,在我国各大豆产区均有发生,严重影响大豆的产量与品质。培育和种植抗病品种是防治该病害最经济、安全、有效的途径,而抗病育种的关键是具备优异抗源,并阐明大豆对SMV的抗性遗传规律。进一步对抗性基因标记定位、对分子标记辅助选择以及抗性基因克隆、明确抗性基因作用也有重要意义。因此,本研究针对新鉴定的部分SMV株系,筛选抗源、研究抗性遗传并精细定位抗性基因,为抗SMV育种提供抗性种质和技术支撑。利用实时荧光定量PCR（Quantitative real-time polymerase chain reaction, QRT-PCR）技术对抗性基因目标区段内的候选基因进行定量表达分析研究,进一步确定抗性品种抗病的关键基因,以阐明其抗病的分子机制,为大豆抗性基因的图位克隆和利用转基因技术提高大豆的抗病性奠定基础。同时采用分子标记辅助选择（Marker assisted selection, MAS）的方法,验证利用抗性相关的分子标记对SMV抗性基因聚合的可行性。主要研究结果如下： 1.抗源筛选为抗SMV育种筛选优异抗源,本研究对新育成的参加2004-2007年国家及江苏、北京和山东等省市大豆区试的品种在接种我国大豆产区主要流行SMV株系SC3和SC7的条件下分别进行抗性评价,结果表明：在抗SMV鉴定的334个品种中,对SC3抗性较好（高抗和抗病）的品种数有148个,占参试品种数的44.31%；对SC7抗性较好的有71个,占参试品种数的21.26%；同时对两个株系抗性表现较好的有55个,占参试品种数的16.47%。这些抗性较好的品种既可用于大豆生产,也可作为抗源用于抗病品种选育和与抗性相关的研究。研究还显示,来自于西北和黄淮海大豆产区的参试品种一般抗性较好。 2.抗性遗传和抗性基因的等位性分析利用在我国长江流域和北方大豆产区广分布的SMV株系SC8对部分抗病品种与感病品种的杂交后代进行鉴定,发现F1均表现抗病,F2分离结果经卡方测验符合3抗：1感分离比例,F2：3家系符合1抗：2分离：1感的分离比例,结果表明：科丰1号、PI96983、齐黄1号、大白麻、晋大74、汾豆56、中作229和NY58对SC8株系的抗性受1对显性基因控制。齐黄22x南农1138-2和其反交南农1138-2×齐黄22的F1均表现抗病、F2表现为3抗：1感的分离比例,F2：3家系符合1抗：2分离：1感的分离比例,结果表明齐黄22对SC8的抗性是由1对显性基因控制,且抗性基因是由细胞核遗传,无细胞质效应。抗抗组合的等位性测验显示抗病品种晋大74x汾豆56的F1表现抗病,F2和F2：3家系未发现感病株,表明晋大74与汾豆56携带对SC8株系的抗性基因是等位的或紧密连锁的。研究还显示齐黄1号与科丰1号、大白麻与汾豆56携带抗SC8的基因是不等位的,而且独立遗传。大白麻×南农1138-2和南农1138-2x大白麻的F1、F2和F2：3接种SC4株系的鉴定结果表明,F1植株均表现抗病；经卡方测验,F2群体分离比例符合3抗：1感的比率；F2：3纯合抗病家系、抗感分离家系和纯合感病家系的比率符合1：2：1,表明大白麻对SC4的抗性是受细胞核遗传的1对显性基因控制,无细胞质效应。研究结果还显示：冀LD42、科丰1号、徐豆1号、晋大74、PI96983、齐黄22、跃进4号和汾豆56与感病品种杂交的F1均表现抗病,F2均符合3抗：1感分离比例,F2：3家系符合1抗：2分离：1感的分离比例,证明它们对SC4株系的抗性均各有1对基因控制,且抗病表现为显性。抗抗组合的等位性测验结果表明大白麻与汾豆56、科丰1号、齐黄1号早熟18四个品种携带抗SC4的基因是不等位的,冀LD42与汾豆56是不等位的,晋大74与中作229是不等位的,而且独立遗传。 3.抗性基因的精细定位以抗病品种科丰1号和感病品种南农1138-2为亲本构建的F2群体（156个F2单株）,重组自交家系群体（184个家系）和次级F2群体（181个单株）为材料,利用SNP和基因组ssr标记将科丰1号对SC8株系的抗性基因Rsc8精细定位在大豆的2号染色体上,Rsc8两侧最近的基因组ssr标记（BARCSOYssr020610和BARCSOYssr020616）之间的遗传距离为0.32cM,在大豆基因组上的物理距离不足200kb。利用1047株大白麻×南农1138-2的F2作图群体,采用分离群体分组分析法,将对SC4株系表现抗病的大豆品种大白麻携带的抗性基因Rsc4定位在大豆的14号染色体上,连锁最紧密的基因组ssr标记是BARCSOYssr141413和B

关键词：大豆大豆花叶病毒抗性遗传精细定位基因组ssr标记候选基因基因聚合

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