检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：翟一龙福建农林大学

学位级别：硕士

小菜蛾属鳞翅目菜蛾科,是一种世界性迁飞害虫,严重危害十字花科植物,对全球农业生产造成巨大经济损失。生殖力强是小菜蛾种群快速扩张暴发的重要因素,因此,解析其生殖发育的分子机制对于控制小菜蛾的种群发展具有重要意义。卵壳形成对... 详细信息

小菜蛾属鳞翅目菜蛾科,是一种世界性迁飞害虫,严重危害十字花科植物,对全球农业生产造成巨大经济损失。生殖力强是小菜蛾种群快速扩张暴发的重要因素,因此,解析其生殖发育的分子机制对于控制小菜蛾的种群发展具有重要意义。卵壳形成对昆虫卵子发生与胚胎发育起着至关重要的作用。昆虫卵壳主要分为内层卵壳与外层卵壳。内层卵壳即卵黄膜层,外层卵壳即蜡质层和硬化卵壳组成。相比外层卵壳,内层卵壳的研究相对较少,主要集中在模式昆虫,如果蝇、家蚕中。目前,对于小菜蛾的卵黄膜形成研究仍为空白,明确卵黄膜基因在小菜蛾卵子形成以及胚胎发育中的作用,可为防治小菜蛾提供潜在分子靶标。因此本论文解析了小菜蛾卵黄膜蛋白基因VMP26的分子序列特征及其进化关系,基于mRNA与蛋白水平分析了PxVMP26基因在不同龄期和不同组织间的表达模式,在此基础上运用CRISPR/Cas 9技术成功敲除了PxVMP26基因,通过比较分析敲除前后小菜蛾的卵子形成、产卵量、孵化率、胚胎保水性、卵黄膜形成等生物学特征,鉴定PxVMP26的功能。主要结果如下:PxVMP26基因全长852 bp,是一个单外显子基因,预计编码283个氨基酸,理论蛋白大小为26 k Da。系统进化树的分析显示,小菜蛾PxVMP26基因与家蚕Bm VMP30亲缘关系最接近,但总体来说保守性较低,推测不同物种间卵黄膜蛋白基因的进化速率较高,功能可能也不相同。不同龄期PxVMP26基因的qPCR与Western blot分析结果显示,该基因mRNA与蛋白均只在雌成虫中特异性表达,羽化24 h内开始表达、48 h时达到表达高峰、72 h时表达量逐渐下降。而组织表达结果显示,PxVMP26基因与蛋白均在小菜蛾成虫卵巢中特异性表达,说明PxVMP26基因对小菜蛾雌虫生殖发育具有重要作用。基于CRISPR/Cas 9技术,在PxVMP26基因292-311 bp、320-339 bp区域上设计靶位点,通过体外转录合成sgRNA,与Cas 9蛋白混合后通过显微注射到小菜蛾胚胎中,成功筛选获得8 bp与46 bp的移码突变纯合系。利用免疫荧光与Weatern blot验证敲除效率,结果显示,在突变品系中没有检测到PxVMP26蛋白表达,而在野生型品系中PxVMP26蛋白正常,表明PxVMP26基因被成功敲除。同时,PxVMP26基因敲除后,其mRNA表达水平显著性降低。生物学分析显示,与野生型相比,PxVMP26基因敲除对小菜蛾成虫产卵量无明显影响,但能够显著性降低其卵子孵化率;另外,PxVMP26基因敲除导致小菜蛾卵黄膜形成异常,卵子长度明显缩短,且胚胎过度失水从而导致死亡,说明PxVMP26基因参与了小菜蛾卵子形成与胚胎发育过程。本论文明确了小菜蛾PxVMP26基因的分子特征与表达模式,并首次利用CRISPR/Cas 9技术探讨了PxVMP26基因在小菜蛾卵子形成与胚胎发育中的作用,该结果可为解析小菜蛾雌虫生殖调控机制提供基础数据,有助于筛选基于遗传控制方式防治小菜蛾种群发展的新靶标。

关键词：小菜蛾卵黄膜蛋白基因表达模式 CRISPR/Cas9 卵子形成胚胎发育

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两种麻疯树核糖体失活蛋白基因Curcin和Curcin C在种子萌发过程中的表达模式研究

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四川大学学报（自然科学版） 2021年第1期58卷 149-153页

作者：张敬吉柔风杨千丁蒙蒙陈放徐莺四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室成都610065

为了研究和开发丰富的麻疯树资源,本研究以四川省西昌市金沙江干热河谷地区的麻疯树种子为材料,将种子浸水萌发后收集各组织用于实验.qRT-PCR结果显示胚乳中Curcin、Curcin C基因表达先增加后减少,在子叶中Curcin C基因的表达也是如此.W... 详细信息

为了研究和开发丰富的麻疯树资源,本研究以四川省西昌市金沙江干热河谷地区的麻疯树种子为材料,将种子浸水萌发后收集各组织用于实验.qRT-PCR结果显示胚乳中Curcin、Curcin C基因表达先增加后减少,在子叶中Curcin C基因的表达也是如此.Western Blot结果显示Curcin蛋白在根、下胚轴、真叶、子叶中不表达,Curcin C蛋白在根和下胚轴中也不表达,而在真叶、子叶中表达.生物信息学软件预测及亚细胞定位结果都显示Curcin:GFP和Curcin C:GFP融合蛋白定位在细胞壁上.本研究初步阐明了两种麻疯树核糖体失活蛋白Curcin、Curcin C的表达模式并对其进行了亚细胞定位.

关键词：麻疯树 Curcin Curcin C 基因表达模式

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拟南芥雄性不育基因APAM2和APAM3的鉴定及表达模式研究

拟南芥雄性不育基因APAM2和APAM3的鉴定及表达模式研究

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作者：甘蓓云南师范大学

学位级别：硕士

高等植物雄配子的发育是一个复杂的过程,雄配子体的发育过程在拟南芥中研究较为清楚。已有的研究表明,参与拟南芥雄配子体发育相关的基因数量非常庞大,约有3500个基因在花粉发育过程中表达,其中1400可能在花粉中特异表达或高水平表达。... 详细信息

高等植物雄配子的发育是一个复杂的过程,雄配子体的发育过程在拟南芥中研究较为清楚。已有的研究表明,参与拟南芥雄配子体发育相关的基因数量非常庞大,约有3500个基因在花粉发育过程中表达,其中1400可能在花粉中特异表达或高水平表达。只有少部分基因的功能得到了研究,其原因是突变基因无法通过雄配子体传递给下一代,因此对突变基因功能的分析也十分困难。利用基因陷阱技术,分离到两个Ds插入的雄性不育突变体+/apam2,+/apam3,通过正反交实验这两个突变体由于花粉发育不正常而导致雄性不育。本实验室对这两个突变体进行了表型的观察。同时,利用TAIL-PCR技术定位了这两个突变的基因,分别对应的是At3g50590基因和At2g37690基因。突变体互补分析实验证明,At3g50590和At2g37690基因全长能够很好的互补突变体apam2,apam3的表型。本论文在这些结论的基础上进行了如下研究。将+/apam2,+/apam3分别与qrtl纯合突变体杂交得到+/apam-qrtl和+/apam3-qrtl两个双突变体,发现这两个双突变体四连体花粉中有两个异形的花粉粒,体外萌发实验发现这两个异形的花粉粒不能萌发。RT-PCR实验证明了这两个基因在拟南芥孢子体和配子体组织中都有表达。且GUS组织定位也佐证了这两个基因为广泛表达的基因。通过对突变体进行番红-固绿石蜡切片观察,发现两个突变体在花粉囊发育晚期能观察到花粉异形。其中+/apam2突变体在花粉囊发育的第11期以前小孢子在形态上都正常,花粉囊也无异常。+.apam3突变体在花粉囊发育的第11期就开始出现一部分不正常的小孢子,暗示了这两个基因可能参与小孢子后期成熟过程。为了研究基因在孢子体中的功能,我们利用拟南芥Lensberg erecta野生型花粉的cDNA库扩增到基因At3g50590和At2g37690的cDNA片段。通过构建APAM3超表达载体(CaMV35S promoter::At2g37690cDNA)发现该基因在植株中过量表达并不会产生与野生型有明显差异的表型。同时,我们还构建了APAM3花粉互补载体(花粉特异启动子：：At2g37690 cDNA),结果未能筛选到纯合的转基因植株,说明很可能该基因在孢子体早期发育过程中十分重要。因而,该基因配子体型突变体的纯合体植株在发育早期就已经死亡。通过生物信息学的预测,我们可知APAM3基因编码的蛋白质是催化拟南芥嘌呤从头合成第6步的AIR (Phosphoribosylaminoimidazole)羧化酶,含有两个催化活性中心PurK和PurE。APAM2基因编码一个未知WD40蛋白,含有三个WD40重复区域和异戊烯转移酶结构域。目前,还没有发现与其同源的己知蛋白,只有几个未知蛋白与其在蛋白序列上具有很强的相似性。

关键词：拟南芥雄性核不育基因基因表达模式 AIR羧化酶 wD40蛋白

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一个光敏色素B调控的水稻NBS-LRR基因的表达模式分析

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山东农业科学 2011年第6期43卷 1-9页

作者：杨慧薛彦久王莹莹马汇泉谢先芝山东理工大学生命科学学院山东淄博255049 山东省农业科学院高新技术研究中心山东济南250100 农业部黄淮海作物遗传改良与生物技术重点实验室山东济南250100

利用水稻基因芯片比较野生型、phyA和phyB突变体受连续红光照射后的基因表达图谱,从中筛选到一个受光敏色素B(phyB)介导的红光信号特异诱导的、编码NBS-LRR类蛋白的基因,命名为PB-LRR(phyB-regu lated NBS-LRR)。为了揭示PB-LRR基因在... 详细信息

利用水稻基因芯片比较野生型、phyA和phyB突变体受连续红光照射后的基因表达图谱,从中筛选到一个受光敏色素B(phyB)介导的红光信号特异诱导的、编码NBS-LRR类蛋白的基因,命名为PB-LRR(phyB-regu lated NBS-LRR)。为了揭示PB-LRR基因在水稻生长发育中的作用,对该基因表达的器官特异性及其对不同激素的应答反应进行了分析。结果表明,PB-LRR基因在叶中表达水平最高,在茎中最低。光对PB-LRR基因表达的诱导是由phyB调控的,与phyA无关。此外PB-LRR基因的表达受外源ABA的抑制,并且受环境因子的调控。构建PB-LRR启动区∶GUS植物表达载体,转化至野生型和phyB突变体中,GUS染色结果表明,在phyB突变体转基因植株中的GUS活性明显低于野生型,而且GUS活性主要出现在叶片上部。这表明PB-LRR基因的表达不仅受phyB介导的光信号调控,而且受发育调控。本研究结果为进一步分析PB-LRR基因在phyB介导的光反应和水稻抗病反应中的作用奠定了基础。

关键词：水稻光敏色素 NBS-LRR 基因表达模式抗病性

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希金斯炭疽菌效应子基因的表达模式分析及效应子ChEP85功能的初步分析

希金斯炭疽菌效应子基因的表达模式分析及效应子ChEP85功能的初步...

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中国植物病理学会2019年学术年会

作者：刘艳潇皮磊祝一鸣舒灿伟周而勋华南农业大学植物病理学系广东省微生物信号与作物病害重点实验室

希金斯炭疽菌（Colletotrichum higginsianum）是一种重要的半活体型营养植物病原真菌,引起的炭疽病是十字花科蔬菜生产上最常见和最严重的病害之一,为害区域分布广泛,华南地区有利的气候条件使病害发生更加严重。效应子是由病原菌分泌... 详细信息

希金斯炭疽菌（Colletotrichum higginsianum）是一种重要的半活体型营养植物病原真菌,引起的炭疽病是十字花科蔬菜生产上最常见和最严重的病害之一,为害区域分布广泛,华南地区有利的气候条件使病害发生更加严重。效应子是由病原菌分泌的、可以改变寄主植物细胞的结构和代谢途径,从而促进对寄主植物成功侵染或者触发寄主防卫反应的外泌型蛋白分子。作为研究病原菌与寄主互作的一种模式病原菌,希金斯炭疽菌的致病机制尚不清楚。本研究基于本实验室前期研究的基础,首先对筛选出的10个候选效应子基因进行表达模式分析,然后选出其中一个引起烟草坏死的关键效应子进行功能分析,以期更好地了解效应子在病原菌致病过程中发挥的具体作用。一方面,制备希金斯炭疽菌分生孢子悬浮液,对拟南芥叶片喷雾接种后Oh、6h、12h、24h、36h、48h、60h定点采样,提取拟南芥叶片总RNA,反转录为cDNA,利用实时荧光定量RCR技术分析炭疽菌侵染拟南芥后不同阶段效应子基因的表达情况;另一方面,构建含有效应子基因的植物表达高效载体并进行烟草瞬时表达,筛选引起烟草坏死的关键效应子。研究结果表明,在10个候选效应子中,效应子ChEP85能稳定引起烟草叶片明显的过敏性坏死反应,且在接种后24h的病原菌侵染的活体营养阶段高度表达。为了研究效应子ChEP85的功能,去除其信号肽序列,构建表达载体以研究信号肽的作用,探究去除信号肽的效应子是否还能引起烟草叶片坏死的现象;同时构建荧光表达载体研究信号肽对效应子亚细胞定位的影响;进一步构建效应子ChEP85基因的敲除载体,通过ATMT转化获得基因敲除突变体,从而深入研究其功能。本研究通过对希金斯炭疽菌效应子功能的研究,探索病原菌效应子发挥作用的机制及其关键途径,并为病原菌与寄主互作的分子机制提供重要依据。

关键词：希金斯炭疽菌分泌蛋白基因表达模式效应子功能分析

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姜荷花苞片实时荧光定量PCR内参基因筛选

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广东农业科学 2025年第2期52卷 108-116页

作者：谭健俊黄李珊周熠玮徐晔春叶远俊广东省农业科学院环境园艺研究所/广东省园林花卉种质创新与利用重点实验室广东广州510640

[目的]筛选适用于姜荷花苞片组织qRT-PCR分析的内参基因,为苞片颜色相关基因功能研究奠定理论基础。[方法]以9个不同颜色的姜荷花品种为试材,根据姜荷花基因组数据选择常用的内参基因,包括甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、18S核糖体RNA(18S... 详细信息

[目的]筛选适用于姜荷花苞片组织qRT-PCR分析的内参基因,为苞片颜色相关基因功能研究奠定理论基础。[方法]以9个不同颜色的姜荷花品种为试材,根据姜荷花基因组数据选择常用的内参基因,包括甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、18S核糖体RNA(18S rRNA)、蛋白磷酸酶2A(PP2A)、泛素蛋白(UBQ)、苹果酸脱氢酶(MDH)、肌动蛋白(Actin)、微管蛋白(TUB)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)8个看家基因,使用ΔCt、geNorm、NormFinder和BestKeeper 4种分析方法评估基因表达的稳定性,通过RefFinder程序综合评价以筛选出姜荷花苞片组织的最佳内参基因。[结果]8个内参基因均扩增出单一主峰,引物标准曲线相关系数R~(2 )≥ 0.98,扩增效率为99.5%~125.0%,PCR产物经1%琼脂糖电泳检测显示条带清晰单一,表明引物设计特异性好。4种不同的算法分析获得的结果排名有差异,其中MDH在ΔCt、geNorm和NormFinder分析中为表达最稳定的内参基因,18S rRNA在BestKeeper分析中为表达最稳定的内参基因。利用RefFinder程序综合评价得出候选内参基因稳定性综合排名,排序依次为MDH>Actin>TUB>18S rRNA>PP2A>GAPDH>UBQ>PAL,表明不同品种姜荷花苞片最佳内参基因是MDH,其次为Actin和TUB,PAL稳定性最差、不适合作为姜荷花苞片组织的内参基因。[结论]MDH可作为不同品种姜荷花苞片组织的稳定内参基因,为后续深入开展姜荷花苞片颜色合成相关基因的表达模式分析提供参考。

关键词：实时荧光定量PCR 姜荷花内参基因苞片颜色 MDH 基因表达模式

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微芯片在组织病理学中的应用和肿瘤的“核心血清反应基因”表达模式

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中华病理学杂志 2004年第4期33卷 398-398页

作者：周桥四川大学华西医院病理科成都610041

中国病理主任联会(ADPC)第五届会议于2004年7月3～8日在广州和香港两地举行.会议邀请的大会报告之一,美国斯坦福大学医学中心病理学系M van de Rijn教授介绍微芯片技术在组织病理学中的应用,特别是在乳腺癌研究方面的一些最新进展.

关键词：微芯片组织病理学肿瘤核心血清反应基因基因表达模式

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芹菜AgDREBA6b基因的克隆及非生物胁迫响应分析

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江苏农业科学 2025年第4期53卷 233-241页

作者：谢芳杰胡锦凤张文佳王欣茹周守航杨桂臻吕瑞恒塔里木大学园艺与林学学院新疆阿拉尔843300 南疆设施农业兵团重点实验室新疆阿拉尔843300

为研究DREBA6b基因在芹菜非生物胁迫中的作用机制,从转录组数据中筛选出芹菜DREBA6b基因参考序列并设计引物从津南实芹中克隆到该基因全长cDNA,并命名为AgDREBA6b,对该基因结构、序列特征及系统进化等进行生物信息分析,并利用qPCR检测... 详细信息

为研究DREBA6b基因在芹菜非生物胁迫中的作用机制,从转录组数据中筛选出芹菜DREBA6b基因参考序列并设计引物从津南实芹中克隆到该基因全长cDNA,并命名为AgDREBA6b,对该基因结构、序列特征及系统进化等进行生物信息分析,并利用qPCR检测该基因在非生物胁迫下的表达模式。结果表明:(1)理化性质表明,AgDREBA6b含1个长度为1023 bp的开放阅读框,编码340个氨基酸,含有典型的AP2转录因子保守结构域;AgDREBA6b蛋白是亲水性蛋白,不具有信号肽和跨膜结构。(2)同源序列比对显示,AgDREBA6b蛋白与其他植物DREB蛋白具有高度保守性,与天竺葵和胡萝卜亲缘关系最近。启动子分析发现含13种顺式元件,其中2种植物生长发育元件、6种激素响应元件和5种胁迫响应元件。(3)qPCR分析显示,AgDREBA6b基因在低温、高温、干旱、高盐等逆境胁迫诱导下具有不同的表达模式,在低温、干旱和盐胁迫诱导后先上调再下调,然而高温下随着时间的增加呈现持续上升趋势,说明AgDREBA6b基因受非生物胁迫诱导表达,尤其高温响应更为显著。

关键词：芹菜 AgDREBA6b 克隆基因表达模式表达分析

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应用水稻基因组阵列法研究耐旱QTL分离水稻的表达模式

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作物育种信息 2006年第3期 18-18页

植物通过改变其基因表达模式来对干旱进行应答。这些转录变化有时成功地适应了环境条件，从而就具有耐性，而有时植物最终没有能适应胁迫条件，就称之为对该种条件敏感。为了研究胁迫调节基因表达变化与控制渗透调节（OA，一个与耐旱相... 详细信息

植物通过改变其基因表达模式来对干旱进行应答。这些转录变化有时成功地适应了环境条件，从而就具有耐性，而有时植物最终没有能适应胁迫条件，就称之为对该种条件敏感。为了研究胁迫调节基因表达变化与控制渗透调节（OA，一个与耐旱相关性状）QTL的关系，我们检测了表型趋异水稻材料和其超亲分离体大约半数基因的表达情况。在亲本品系中，共有662个转录子为差异表达。在半干旱胁迫水平下，低OA亲本CT9993中仅诱导了12个基因，而在高OA亲本IR62266中诱导了200多个基因。高和低OA亲本对干旱胁迫几乎具有完全不同的转录反应，这说明在CT9993中完全缺乏恰当的应答反应而不是应答反应较慢。在全部高OA品系中共有69个基因在起调节作用，在低OA品系中有9个上述基因未被诱导。对这些基因中蔗糖合成酶、多孔蛋白（Poreprotein）、热休克（heat shock）和LEA蛋白的注解说明了它们在保持高OA和膜稳定性方面的作用。在3954套与QTL间隔相应的探针中，极少数具有高OA和低OA品系间差异表达模式，这说明了它们在导致表型变异方面的作用。然而，对包括snRNP附属因子、LEA蛋白、蛋白磷酸酶ZC和Sarl同源物在内的5个QTL都鉴别出了几个有希望的候选者。

关键词：水稻基因组基因表达模式 QTL 分离体耐旱 LEA蛋白亲本品系应答反应阵列应用

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杜仲ARF基因家族全基因组鉴定和表达分析

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林业科学 2021年第3期57卷 170-180页

作者：刘闵豪李龙叶靖周轩辕李周岐范睿深徐郡儡西北农林科技大学林学院杨凌712100

【目的】杜仲是我国特有的传统药用和胶用木本植物,其生长发育相关基因研究对杜仲育种有重要意义。生长素响应因子(ARF)是生长素信号转导途径中重要的转录因子,了解ARF在杜仲器官发育中的作用具有重要的理论和实际应用价值。【方法】利... 详细信息

【目的】杜仲是我国特有的传统药用和胶用木本植物,其生长发育相关基因研究对杜仲育种有重要意义。生长素响应因子(ARF)是生长素信号转导途径中重要的转录因子,了解ARF在杜仲器官发育中的作用具有重要的理论和实际应用价值。【方法】利用杜仲全基因组测序数据鉴定杜仲ARF基因,并对这些基因进行生物信息学分析;根据杜仲EuARFs与拟南芥、水稻和欧美杨ARF蛋白的序列比对,构建系统进化树;根据转录本全长测序数据分析杜仲叶片不同生长时期的ARF基因表达谱,并利用qRT-PCR分析杜仲ARF基因与调控ARF基因的miRNA在不同器官不同发育时期的表达模式。【结果】共鉴定出18个杜仲ARF基因,根据系统进化树可以将EuARFs分为5类;miRNA靶位点分析表明eu-miR160s调控Ⅱ亚族的EuARFs,eu-miR167s调控除了EuARF8.2的V亚族的EuARFs。表达谱结果显示EuARFs在叶片不同生长时期的表达不同,其中V亚族EuARFs与Ⅵ亚族EuARF19.2在3 cm长的生长叶和完全展开的幼叶中表达量较高。qRT-PCR试验结果显示,EuARFs在正常生长条件下不同发育阶段(幼嫩和成熟)的器官(根、茎和叶)中均有表达,在根中表现为在成熟阶段上调表达,叶和茎段中表现为在成熟的器官中下调表达;eu-miR160s主要在幼嫩的根中表达,eu-miR167s则主要在成熟的叶片中表达。【结论】共鉴定出18个杜仲ARF基因,这些EuARFs在正常生长条件下不同发育阶段(幼嫩和成熟)的器官(根、茎和叶)中均有表达,根据表达量可以预测V亚族的EuARFs对幼苗的生长发育具有调控作用,EuARF19.2对杜仲叶片生长具有重要调控作用。

关键词：杜仲生长素响应因子基因表达模式 miRNA调控

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