检索结果-内蒙古大学图书馆

中国应用生理学杂志 2002年第3期18卷 278-282页

作者：哈小琴王新国吴祖泽北京军事医学科学院放射医学研究所北京100850

目的 :构建一种携带人肝细胞生长因子 (HGF)基因的表达质粒 (pUDKH) ,并对其体外活性进行研究 ,为其体内应用提供依据。方法 :从人胎盘cDNA文库用PCR方法克隆人HGF基因 ,并将其克隆至自行构建的真核表达载体 pUDK上 ,获得表达质粒 pUDK... 详细信息

目的 :构建一种携带人肝细胞生长因子 (HGF)基因的表达质粒 (pUDKH) ,并对其体外活性进行研究 ,为其体内应用提供依据。方法 :从人胎盘cDNA文库用PCR方法克隆人HGF基因 ,并将其克隆至自行构建的真核表达载体 pUDK上 ,获得表达质粒 pUDKH。将pUDKH体外转染原代培养的骨骼肌细胞 ,分析其转染效率及表达上清中HGF、血管内皮生长因子 (VEGF)的表达水平 ,并采用MTT法分析不同剂量HGF表达产物对人脐静脉内皮细胞的作用。结果 :所克隆构建的携带人HGF基因的质粒 pUDKH可有效转染原代培养的骨骼肌细胞 (0 .0 5 7% ) ,并表达HGF(16～ 18ng/ 4× 10 5cells)和VEGF ,其表达产物对人脐静脉内皮细胞具有明显的增殖刺激活性 (P <0 .0 5 ) ,而且有剂量效应关系。结论 :初步证实本研究构建的质粒

关键词：人肝细胞生长因子基因表达质粒构建活性质粒载体表达产物

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GATA-3基因表达质粒的构建及在大鼠脑细胞中的表达

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中山大学学报（医学科学版） 2004年第3期25卷 231-233页

作者：俞琼杨培增黄祥坤李兵纪淑兴张锐中山大学中山眼科中心免疫学实验室广东广州510060

【目的】构建GATA-3基因正义?反义重组质粒,为进一步研究GATA-3在T细胞发育分化中的作用提供基础?【方法】采用PCR技术扩增GATA-3基因,通过酶切?连接?转化等分子生物学技术,将该全长基因亚克隆至表达载体pCDNA3,构建质粒后转染大肠杆... 详细信息

【目的】构建GATA-3基因正义?反义重组质粒,为进一步研究GATA-3在T细胞发育分化中的作用提供基础?【方法】采用PCR技术扩增GATA-3基因,通过酶切?连接?转化等分子生物学技术,将该全长基因亚克隆至表达载体pCDNA3,构建质粒后转染大肠杆菌,并在大肠杆菌中扩增?同时用脂质体法感染大鼠脑细胞?【结果】从大鼠脑细胞中成功地克隆出全长1335 bp的GATA-3基因,并经序列分析筛选证实GATA-3基因以正向?反向重组转染入载体,且在大肠杆菌中得到扩增,同时用RT-PCR方法检测到反义重组体对大鼠脑细胞表达该基因具有抑制作用?【结论】通过基因克隆方法成功构建了GATA-3基因正义?反义表达质粒,并初步证实反义GATA-3具有抑制细胞正常表达作用,为深入研究GATA-3对T细胞发育分化的影响奠定了基础?

关键词： GATA-3基因基因表达质粒大鼠脑细胞 PCR技术分子生物学

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γ干扰素和内皮抑素双基因表达质粒在Lewis肺癌细胞中的辐射诱导表达

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中华放射医学与防护杂志 2005年第3期25卷 210-212页

作者：杨巍朴春姬刘林林田梅潘艳李修义吉林大学公共卫生学院卫生部放射生物学重点实验室长春130021

目的构建双基因表达质粒pEgr-IFNγ-endostatin并检测其在Lewis肺癌细胞中的辐射诱导表达。方法利用基因重组技术构建含Egr-1启动子的IFNγ和endostatin双基因表达质粒,脂质体介导体外转染Lewis肺癌细胞,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测不... 详细信息

目的构建双基因表达质粒pEgr-IFNγ-endostatin并检测其在Lewis肺癌细胞中的辐射诱导表达。方法利用基因重组技术构建含Egr-1启动子的IFNγ和endostatin双基因表达质粒,脂质体介导体外转染Lewis肺癌细胞,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测不同剂量X射线诱导IFNγ和endostatin表达的量效关系和时程。结果酶切鉴定证实Eg-r1启动子、IFNγ和endostatin基因正确插入双基因表达载体pIRES1neo;不同剂量X射线照射转染该重组质粒的Lewis肺癌细胞上清中IFNγ和endostatin表达量明显高于假照组(均P<0.001),其中5Gy照后表达量最高,分别为假照组的4.14倍和2.92倍;2GyX射线照后Lewis肺癌细胞上清中IFNγ和endostatin含量随时间延长而增加,照后36h分别为照射前的3.75倍和3.02倍(均P<0.001)。

关键词： Lewis肺癌细胞基因表达质粒辐射诱导表达内皮抑素 γ干扰素 endostatin基因 Egr-1启动子 pEgr-IFNγ 酶联免疫吸附法双基因表达载体基因重组技术不同剂量细胞上清脂质体介导 X射线诱导 X射线照射体外转染量效关系

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TGF-β_1Ⅱ型受体部分基因表达质粒对实验性大鼠肝纤维化的影响

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中华传染病杂志 2002年第3期20卷 168-171页

作者：汪玲胡国龄谭德明刘双虎中南大学湘雅医院传染病研究所长沙410008

目的　观察缺陷型TGF β1 Ⅱ型受体表达质粒在大白鼠体内阻断TGF β1 的作用后对免疫性大鼠肝纤维化的影响。方法　运用基因重组技术 ,构建人的含有细胞外结合区、跨膜区和少量细胞质区的缺陷型TGF β1 Ⅱ型受体真核细胞表达质粒 ,经脂... 详细信息

目的　观察缺陷型TGF β1 Ⅱ型受体表达质粒在大白鼠体内阻断TGF β1 的作用后对免疫性大鼠肝纤维化的影响。方法　运用基因重组技术 ,构建人的含有细胞外结合区、跨膜区和少量细胞质区的缺陷型TGF β1 Ⅱ型受体真核细胞表达质粒 ,经脂质体包埋后 ,通过腹腔注射将其导入免疫性大鼠肝纤维化模型体内 ,观察其对大鼠肝纤维化的影响。结果　早期接受缺陷型TGF β1 Ⅱ型受体表达质粒治疗的大鼠 ,其血清透明质酸 (HA)、层黏连蛋白 (LN)、Ⅲ型前胶原 (PCⅢ )、Ⅳ型胶原 (Ⅳ C)的水平均比模型组低 (P <0 .0 1) ,晚期组与模型组之间差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;在病理形态学的观察方面 ,早期、晚期运用缺陷型TGF β1 Ⅱ型受体表达质粒进行治疗 ,均可使大鼠肝纤维化程度较模型组减轻 (P <0 .0 1)。结论　在肝纤维化形成的早期应用缺陷型TGF β1 Ⅱ型受体表达质粒进行治疗可以预防肝纤维化的形成 ,而晚期应用只能阻止肝纤维化的进一步发展。

关键词： TGF-β1Ⅱ型受体基因表达质粒大鼠肝纤维化影响基因重组

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Alzheimer病Aβ<,3-10>和CpG基因表达质粒的构建和表达鉴定

Alzheimer病Aβ<,3-10>和CpG基因表达质粒的构建和表达鉴定

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作者：董翔中国医科大学

学位级别：博士

目的：随着人口的老龄化发展，老年性痴呆的代表性疾病——Alzheimer病越来越受到人们的注目。它的发病率在老年性痴呆中占第一位，世界上65岁以上人群中患病率在5～10％。据调查，我国60岁以上老年人已达1.29亿，该人群痴呆的患病率为... 详细信息

目的：随着人口的老龄化发展，老年性痴呆的代表性疾病——Alzheimer病越来越受到人们的注目。它的发病率在老年性痴呆中占第一位，世界上65岁以上人群中患病率在5～10％。据调查，我国60岁以上老年人已达1.29亿，该人群痴呆的患病率为0.5～5.6％，在全部痴呆患者中阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)占50％。因此探讨阿尔茨海默病的发病机制、诊断以及防治具有重要的意义。AD是好发于中老年人的一种神经系统退行性疾病，其临床症状主要表现为认知行为能力下降和行为异常，显著的病理学特征是脑内出现神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles)和β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein，Aβ)沉积形成老年斑(老年斑是老年性痴呆特征性病理改变，β-淀粉样是其主要成分)，已有研究发现β-淀粉样蛋白沉积、聚集形成老年斑是AD病理的中心环节，对AD的治疗热点在于脑内Aβ斑块的清除。尽管象AD等神经退行性疾病不被认为是经典的炎症或者免疫系统介导的疾病，但在一定程度上免疫系统对这一退变过程起重要作用。将Aβ作为疫苗对动物进行免疫，有明显抑制转基因小鼠脑内Aβ的沉积，清除原有斑块的作用，从而减少异常AB沉积对认知功能的损害。1999年Schenk等人首次用Aβ<,1-42>免疫治疗AD转基因动物模型，结果显示免疫不仅产生了特异性的Aβ<,1-42>抗体，阻止和减少了淀粉样斑块的形成，而且提高鼠的认知能力，但在临床Ⅱ期实验中，出现了副作用，约有5％的AD病人疫苗接种后出现了脑膜脑炎，实验被迫停止。在尸检中发现患者的脑膜中有T细胞和巨噬细胞的浸润。因此如何降低疫苗接种时T细胞的反应性，是减少其副作用的有效手段。研究者目前将目光转向小分子的Aβ的N末端抗原表位的应用，认为以此免疫动物能有效地清除斑块，并能避免炎症反应。基于这些考虑构建Aβ亚单位疫苗，这些疫苗在设计上减少了T细胞的抗原决定簇，保留了B细胞抗原决定簇，避免Aβ的毒性片断。AD的免疫治疗引起了世人的关注，尽管它遭受了挫折，但经过研究者的不懈努力，AD免疫治疗重现希望之光。疫苗没有引起针对动物自身抗原的免疫反应，对中枢神经系统的正常功能也没有明显的损害。近年来研究发现，普遍存在于细菌DNA中非甲基化的CpG基序有强烈的免疫刺激效应。CpG ODN是指含有胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤基序(CpG DNA)的寡脱氧核苷酸。人工合成的含CpG基序的寡核苷酸(CpG ODN)能够模拟细菌DNA中CpG基序的免疫刺激特性，并且能诱导Th1型为主的免疫应答。CpG ODN与蛋白类抗原联合应用可以有效地诱导机体产生免疫应答，具有潜在的免疫佐剂效应。鉴于目前基因疫苗的一个普遍的缺点是其免疫原性较弱，为了提高重组体的免疫原性，我们在实验中同时应用免疫佐剂CpG DNA，以提高重组体对动物的免疫效果。为寻找更安全、有效、廉价的治疗方案，我们构建Alzheimer病Aβ<,3-10>和CpG基因表达质粒，探讨其作为Alzheimer病特异性疫苗的可能性，为进一步研究Aβ主动免疫清除老年斑的作用机理和DNA疫苗的研制奠定了基础。方法：在GenBank中查到Aβ<,3-10>的cDNA序列，人工基因合成Aβ<,3-10>基因片段和Aβ<,3-10>-CpG基因片段(上游含有HindⅢ酶切位点，下游含有EcoRI酶切位点)，以限制性内切酶HindⅢ和EcoRI双酶切，将Aβ<,3-10>和Aβ<,3-10>-CpG目的基因片段克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)，构建pcDNA3.1(+)-Aβ<,3-10>和pcDNA3.1(+)-Aβ<,3-10>-CpG真核表达载体，转化感受态菌DH5α，提取质粒，以pcDNA3.1(+)通用引物进行PCR，挑取阳性克隆，酶切鉴定重组子，然后测序验证，与NCBI BLAST对比目的基因相符，载体构建成功。小量抽提质粒，脂质体试剂Lipofectamine 2000体外转染Cos-7细胞系，用Western-blot方法鉴pcDNA3.1(+)-Aβ<,3-10>和pcDNA3.1(+)-Aβ<,3-10>-CpG能在该细胞中表达。结果：构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-Aβ<,3.10>及pcDNA3.1(+)-Aβ<,3.10>-CpG，经测序验证。经NCBI BLAST软件比对，与目的片段无误。并且在转化此质粒的Cos-7细胞系中测出了Aβ<,3-10>和Aβ<,3-10>-CpG的表达。结论：成功构建了重组

关键词： Alzheimer病 β-淀粉样蛋白基因表达质粒 CpG基序老年性痴呆病理学

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幽门螺杆菌BabA2／UreI融合基因表达质粒的构建

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第9期26卷 799-799页

作者：曹俊谢勇周南进刘东升江西九江学院医学院九江332005 南昌大学第一附属医院 330006 江西省医学科学研究所

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）疫苗被认为是控制Hp感染有效的方法之一。本研究联合应用Hp BabA2和UreI基因作为构建Hp DNA疫苗的目的基因，成功构建了pcDNA3．1／BabA2/UreI真核表达质粒。

关键词：基因表达质粒 BabA2 幽门螺杆菌 pcDNA3.1 DNA疫苗 Hp感染真核表达质粒目的基因

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rep基因表达质粒，RBE顺式元件定点整合体系及其制备方法和应用

rep基因表达质粒，RBE顺式元件定点整合体系及其制备方法和应用

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作者：冯登敏朱焕章陈金中贾韦国薛京伦 200433 上海市邯郸路220号

本发明属生物技术和基因治疗技术领域，具体为一种rep基因表达质粒，RBE顺式元件定点整合体系及其制备方法和在基因治疗中的应用。该定点整合体系为由携带有RBE顺式元件及EGFP报告基因的表达质粒与rep基因表达质粒共同作用构成，或者由... 详细信息

标准号: CN100503833C

本发明属生物技术和基因治疗技术领域，具体为一种rep基因表达质粒，RBE顺式元件定点整合体系及其制备方法和在基因治疗中的应用。该定点整合体系为由携带有RBE顺式元件及EGFP报告基因的表达质粒与rep基因表达质粒共同作用构成，或者由携带有RBE顺式元件及人凝血因子IX的表达质粒与rep基因表达质粒共同作用构成。该定点整合系统可用于在人类细胞株中导入外源基因，制备程序简单，与其他治疗基因联合运用，可以适用于多种疾病的基因治疗。

关键词：基因表达质粒定点整合基因治疗质粒基因治疗技术报告基因联合运用人类细胞外源基因制备程序制备方法治疗基因因子IX 导入生物技术疾病

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利用肿瘤特异性启动子介导的PE38KDEL基因表达质粒的构建方法及应用

利用肿瘤特异性启动子介导的PE38KDEL基因表达质粒的构建方法及应...

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作者：施维郭琼吴江 130000 吉林省长春市前进大街2699号吉林大学生命科学楼250

本发明提供了利用肿瘤特异性启动子介导的PE38KDEL基因表达质粒的构建方法及应用，属于基因靶向治疗肿瘤技术领域，所述PE38KDEL基因具有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。本发明提供了一种含有所述PE38KDEL基因的重组质粒，所述重组质粒... 详细信息

标准号: CN109207488B

本发明提供了利用肿瘤特异性启动子介导的PE38KDEL基因表达质粒的构建方法及应用，属于基因靶向治疗肿瘤技术领域，所述PE38KDEL基因具有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。本发明提供了一种含有所述PE38KDEL基因的重组质粒，所述重组质粒以pGL3‑Basic为原始质粒，在pGL3‑Basic的多克隆位点插入肿瘤特异性启动子，并利用PE38KDEL基因替换原荧光素酶基因；所述肿瘤特异性启动子为SERPINB3启动子或CEACAM6启动子。本发明的重组质粒能够靶向性抑制和杀伤肿瘤细胞，从而可以应用于肿瘤靶向基因治疗药物的制备，能够为肿瘤靶向基因治疗提供一种新的手段。

关键词：肿瘤特异性启动子重组质粒肿瘤靶向基因启动子基因靶向治疗基因表达质粒杀伤肿瘤细胞荧光素酶基因多克隆位点核苷酸序列基因替换原始质粒治疗药物基因靶向性构建介导制备应用肿瘤治疗

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利用肿瘤特异性启动子介导的PE38KDEL基因表达质粒的构建方法及应用

利用肿瘤特异性启动子介导的PE38KDEL基因表达质粒的构建方法及应...

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作者：施维郭琼吴江 130000 吉林省长春市前进大街2699号吉林大学生命科学楼250

标准号: CN109207488A

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甲基转移酶1表达质粒对结肠癌细胞错配修复基因甲基化及其表达的影响

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中华医学杂志 2004年第12期84卷 1014-1017页

作者：陆嵘房静远朱红音陈萦晅程中华李恩灵上海第二医科大学附属仁济医院上海市消化疾病研究所 200001

目的　分析DNA甲基转移酶 1(Dnmt1)基因的真核表达质粒对人结肠癌细胞错配修复基因甲基化及其转录水平和微卫星不稳定性 (MSI)的影响。方法　分别构建含有人的正义Dnmt1(HMT)和反义Dnmt1(THM)的真核表达质粒 ,将其转染入结肠癌SW1116细... 详细信息

目的　分析DNA甲基转移酶 1(Dnmt1)基因的真核表达质粒对人结肠癌细胞错配修复基因甲基化及其转录水平和微卫星不稳定性 (MSI)的影响。方法　分别构建含有人的正义Dnmt1(HMT)和反义Dnmt1(THM)的真核表达质粒 ,将其转染入结肠癌SW1116细胞 ,以Western印迹实验分析各组细胞Dnmt1蛋白的表达情况。定量PCR检测hMLH1、hMSH2基因的表达。甲基化特异性PCR分析hMLH1、hMSH2启动子区甲基化情况 ,银染法研究其对微卫星不稳定性的影响。结果　转染正义Dnmt1质粒的细胞hMLH1、hMSH2的启动子甲基化水平升高 ,基因mRNA表达降低。转染反义Dnmt1质粒可使细胞中hMSH2启动子呈非甲基化状态 ,基因表达增强。未发现转染正义和反义Dnmt1基因的SW1116细胞存在MSI的变化。结论　重组Dnmt1表达质粒可通过调控人结肠癌细胞中错配修复基因的甲基化影响基因的表达。

关键词：甲基转移酶1 基因表达质粒结肠癌细胞错配修复基因甲基化基因成分

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