检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：陈洁张贇毕杨龚敏李廷玉魏小平孙五庆 400014 重庆市渝中区中山二路136号

本发明公开一种白细胞介素6基因重组逆转录病毒载体的构建方法，其步骤如下：(1)白细胞介素6(IL-6)基因片段的扩增；(2)重组pSEB-rIL6逆转录病毒质粒的构建和鉴定；(3)重组pSEB-rIL6逆转录病毒质粒在真核细胞中表达功能的测定。本发明... 详细信息

标准号: CN101948863A

本发明公开一种白细胞介素6基因重组逆转录病毒载体的构建方法，其步骤如下：(1)白细胞介素6(IL-6)基因片段的扩增；(2)重组pSEB-rIL6逆转录病毒质粒的构建和鉴定；(3)重组pSEB-rIL6逆转录病毒质粒在真核细胞中表达功能的测定。本发明所构建的逆转录病毒pSEB-IL6质粒可作为真核表达载体，能够感染多种类型的细胞，既可以应用于体外培养的细胞，也可以用于整体实验动物，应用范围广，感染效率高；所采用的载体-逆转录病毒是改造后的一种安全的病毒，该载体不仅带有组蛋白标签，实时检测表达水平；而且可以整合入宿主细胞中，随着细胞的不断分裂而持续表达；构建过程中所需设备要求不高，逆转录病毒载体的理化性质稳定，在制备、储存和应用过程中简单易行，适合推广应用。

关键词：逆转录病毒质粒白细胞介素6 逆转录病毒细胞简单易行基因重组逆转录病毒逆转录病毒载体载体的构建表达载体蛋白标签多种类型感染效率基因片段理化性质实时检测实验动物宿主细胞体外培养应用过程真核细胞扩增整合质粒病毒储存感染改造

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含抗凋亡基因bol-2重组逆转录病毒重组体的构建及鉴定

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国际眼科杂志 2006年第4期6卷 781-782页

作者：李素芳魏锐利金玲第二军医大学长征医院眼科中国上海市200003

目的：构建并鉴定含鼠bcl-2基因重组逆转录病毒。方法：将抗凋亡基因bcl-2片段从载体pcDNA3．1中切下，定向插入逆转录病毒载体PLNCx2中，酶切鉴定；脂质体法将重组逆转录病毒转入包装细胞系PT67，G418筛选建立稳定表达bcl-2的细胞株。... 详细信息

目的：构建并鉴定含鼠bcl-2基因重组逆转录病毒。方法：将抗凋亡基因bcl-2片段从载体pcDNA3．1中切下，定向插入逆转录病毒载体PLNCx2中，酶切鉴定；脂质体法将重组逆转录病毒转入包装细胞系PT67，G418筛选建立稳定表达bcl-2的细胞株。结果：双酶切鉴定，成功构建重组逆转录病毒载体；重组逆转录病毒转入包装细胞PT67，经G418筛选。形成了抗性克隆，并测得病毒滴度为3×10^11cfu，L提示构建的含鼠bcl-2基因重组逆转录病毒载体及稳定的包装细胞系成功。结论：含抗凋亡基因bcl-2重组逆转录病毒载体构建成功。[著者文摘]

关键词：抗凋亡基因bcl-2 逆转录病毒重组体酶切鉴定基因重组逆转录病毒重组逆转录病毒载体 pcDNA3.1 包装细胞系 bcl-2基因脂质体法稳定表达

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含抗凋亡基因bcl-2重组逆转录病毒重组体的构建及鉴定

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国际眼科杂志 2006年第4期6卷 781-782页

作者：李素芳魏锐利金玲武警上海总队医院眼科中国上海市201103 第二军医大学长征医院眼科中国上海市200003

目的:构建并鉴定含鼠bcl-2基因重组逆转录病毒。方法:将抗凋亡基因bcl-2片段从载体pcDNA3.1中切下,定向插入逆转录病毒载体PLNCX2中,酶切鉴定;脂质体法将重组逆转录病毒转入包装细胞系PT67,G418筛选建立稳定表达bcl-2的细胞株。结果:双... 详细信息

目的:构建并鉴定含鼠bcl-2基因重组逆转录病毒。方法:将抗凋亡基因bcl-2片段从载体pcDNA3.1中切下,定向插入逆转录病毒载体PLNCX2中,酶切鉴定;脂质体法将重组逆转录病毒转入包装细胞系PT67,G418筛选建立稳定表达bcl-2的细胞株。结果:双酶切鉴定,成功构建重组逆转录病毒载体;重组逆转录病毒转入包装细胞PT67,经G418筛选,形成了抗性克隆,并测得病毒滴度为3×1011cfu/L,提示构建的含鼠bcl-2基因重组逆转录病毒载体及稳定的包装细胞系成功。结论:含抗凋亡基因bcl-2重组逆转录病毒载体构建成功。

关键词：抗凋亡基因bcl-2 逆转录病毒重组体酶切鉴定基因重组逆转录病毒重组逆转录病毒载体 pcDNA3.1 包装细胞系 bcl-2基因脂质体法稳定表达

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经典方法与LaSRT法测定绿色荧光蛋白标记重组病毒滴度的研究

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第一军医大学学报 2003年第10期23卷 1101-1103页

作者：江千里王健民江汕温丽敏周虹第二军医大学长海医院血液科上海200433 南京医科大学病理教研室江苏南京210029

目的以带有绿色荧光蛋白(GFP)标记基因的重组逆转录病毒为例,对经典方法与批量快速病毒滴度法(LaSRT)测定病毒滴度进行比较研究。方法(1)经典方法:于6孔培养板分别接种NIH3T3细胞2×105/孔,培养12 h 后分别以0.5 ml、50 μl和5 μl... 详细信息

目的以带有绿色荧光蛋白(GFP)标记基因的重组逆转录病毒为例,对经典方法与批量快速病毒滴度法(LaSRT)测定病毒滴度进行比较研究。方法(1)经典方法:于6孔培养板分别接种NIH3T3细胞2×105/孔,培养12 h 后分别以0.5 ml、50 μl和5 μl带有GFP 标记基因的病毒感染,聚凝胺终浓度为8 μg/ml,48 h后以流式细胞仪检测细胞eGFP+率。病毒滴度(TU/ml)=(2×105×细胞eGFP+率)/病毒原液体积。(2)LaSRT法:NIH3T3 细胞以5 000/孔接种于96 孔板,12 h后更换成完全培养液90 μl/孔,以8孔为一组,第1 孔中加入病毒液10 μl,此后每孔依次10∶1 倍比稀释,聚凝胺终浓度为8 μg/ml,48 h后以浓度自高到低的方向,在荧光倒置显微镜下确定计量孔(第n孔),计数孔中的阳性细胞数m。病毒滴度(TU/ml)=m×10n+1。(3)对7批病毒以LaSRT法研究,探讨冻存/复苏过程对重组病毒滴度的影响。结果经典方法测定的重组病毒滴度为(1.54±0.38)×106 TU/ml,LaSRT法测定的病毒滴度为(1.33±0.57)×106 TU/ml,两者无统计学差异(P>0.05)。LaSRT法可以大批量、快速地测定以GFP为标记基因的重组病毒滴度。单次冻存/复苏后的病毒滴度为冻存前的(18.1±9.9)%(n=7)。结论LaSRT法和经典方法测定以GFP为标记基因的重组病毒滴度,结果无统计学差异;

关键词：经典方法 LaSRT法测定绿色荧光蛋白病毒滴度测定法基因重组逆转录病毒

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基因重组BDNF感染脊髓神经干细胞及其表达

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中国矫形外科杂志 2005年第17期13卷 1326-1328页

作者：曹延林罗卓荆叶正旭第四军医大学西京医院全军骨科研究所西安710032

[目的]探讨脊髓神经干细胞(NSC)被重组逆转录病毒感染后目的基因的表达。[方法]用人脑源性神经生长因子(hBDNF)基因重组逆转录病毒上清液感染脊髓NSCs,取感染后的NSCs培养液(BDNF条件培养液)培养背根神经结(DRG)和小鼠嗜铬瘤细胞(PC12细... 详细信息

[目的]探讨脊髓神经干细胞(NSC)被重组逆转录病毒感染后目的基因的表达。[方法]用人脑源性神经生长因子(hBDNF)基因重组逆转录病毒上清液感染脊髓NSCs,取感染后的NSCs培养液(BDNF条件培养液)培养背根神经结(DRG)和小鼠嗜铬瘤细胞(PC12细胞)检测培养液中BDNF活性;酶联免疫吸附反应(ELISA)检测培养液中BDNF浓度;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测BDNFmRNA。[结果]感染hBDNF基因重组逆转录病毒的NSCs上清中有BDNF的表达,经hBDNF条件培养液培养的PC12细胞,数量增多,突起明显变长。经hBDNF条件培养液培养背根神经结,神经元突起伸出,逐渐增多,长度大于神经节直径。[结论]脊髓NSC可直接作为基因靶细胞,被BDNF基因重组逆转录病毒有效感染而表达和分泌有生物学活性的BDNF。

关键词：脊髓神经干细胞脑源性神经生长因子基因转染表达基因重组逆转录病毒脊髓神经干细胞 hBDNF 病毒感染后神经干细胞(NSC)

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抗肿瘤多肽及其基因治疗载体组合物

抗肿瘤多肽及其基因治疗载体组合物

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作者：韩忠朝李妍涵 300020 天津市南京路288号中国医学科学院血液学研究所

本发明涉及一种含53个氨基酸的多肽(简称p53)及其基因重组逆转录病毒载体，提供了一种病毒载体介导的抗肿瘤p53基因治疗组合物，具有靶向性抗肿瘤组织中血管新生，抑制肿瘤的生长和转移的作用。

标准号: CN1161378C

关键词：抗肿瘤基因重组逆转录病毒病毒载体基因治疗血管新生组合物氨基酸靶向多肽肿瘤生长转移

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