检索结果-内蒙古大学图书馆

电子显微学报 2025年第1期44卷 18-27页

作者：贾旭东李锶铎于宏洋张勤奋何键中山大学生命科学学院广东广州510275 生物岛实验室广东广州510005

塞姆利基森林病毒(Semliki Forest virus,SFV)是一种典型的甲病毒,主要通过节肢动物作为媒介进行传播,对人类及多种哺乳动物构成潜在的感染威胁。然而当前针对SFV的结构生物学研究相对不足,限制了对其在病毒-宿主互作、入侵机制以及病... 详细信息

塞姆利基森林病毒(Semliki Forest virus,SFV)是一种典型的甲病毒,主要通过节肢动物作为媒介进行传播,对人类及多种哺乳动物构成潜在的感染威胁。然而当前针对SFV的结构生物学研究相对不足,限制了对其在病毒-宿主互作、入侵机制以及病毒颗粒组装与成熟过程的认知。本研究采用冷冻电镜技术对SFV成熟颗粒的三维结构进行了高精度解析,并系统分析了囊膜蛋白E1和E2上的N-糖基化位点及二硫键,揭示了这些结构特征在维持病毒蛋白稳定性中的关键作用。这些发现对于阐明SFV的生物学特性、推动抗病毒药物研发及优化疫苗设计都具有重要意义。

关键词：塞姆利基森林病毒甲病毒 N-糖基化二硫键冷冻电镜

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新型受体介导甲病毒跨物种传播的作用机制

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科学通报 2023年第19期68卷 2424-2426页

作者：曹端方马丙婷曹紫怡向烨章新政中国科学院生物物理研究所生物大分子国家重点实验室北京100101 清华大学医学院北京生物结构前沿研究中心北京100084 中国科学院大学北京100049

甲病毒是一类由虫媒传播的正义单链RNA囊膜病毒,在自然界中广泛存在,能够感染人类、家畜、鼠类、鸟类、蛙类以及蠕虫、蚊子等多种物种^([1]).甲病毒感染能够引发多种人类疾病,如感染塞姆利基森林病毒(Semliki forest virus,SFV)、基孔... 详细信息

甲病毒是一类由虫媒传播的正义单链RNA囊膜病毒,在自然界中广泛存在,能够感染人类、家畜、鼠类、鸟类、蛙类以及蠕虫、蚊子等多种物种^([1]).甲病毒感染能够引发多种人类疾病,如感染塞姆利基森林病毒(Semliki forest virus,SFV)、基孔肯雅病毒(Chikungunya virus,CHIKV)和辛德毕斯病毒(Sindbis virus,SINV)等旧大陆甲病毒会引起发热、皮疹和关节炎等病症^([2]);感染东方马脑炎病毒(eastern equine encephalitis virus,EEEV)、委内瑞拉马脑炎病毒(Venezuelan equine encephalitis virus,VEEV)和西方马脑炎病毒(western equine encephalitis virus,WEEV)等新大陆甲病毒可能引发脑炎等神经性疾病,甚至导致死亡^([3]).

关键词：基孔肯雅病毒甲病毒塞姆利基森林病毒神经性疾病 encephalitis 辛德毕斯病毒人类疾病病毒感染

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一种基于甲病毒的嵌合病毒样颗粒的制备体系

一种基于甲病毒的嵌合病毒样颗粒的制备体系

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作者：张守涛马强黄永辉董其胜 215211 江苏省苏州市吴江区黎里镇甘溪路9号2号楼15楼1503-5室

本发明属于生物技术领域，具体公开了一种基于甲病毒的嵌合病毒样颗粒的制备体系。该技术通过将辛德比斯病毒(Sindbis virus；SIN)的包装信号(Packaging Signal；PS)和3’端UTR序列插入塞姆利基森林病毒(Semliki Forest virus；SFV)表... 详细信息

标准号: CN116426569A

本发明属于生物技术领域，具体公开了一种基于甲病毒的嵌合病毒样颗粒的制备体系。该技术通过将辛德比斯病毒(Sindbis virus；SIN)的包装信号(Packaging Signal；PS)和3’端UTR序列插入塞姆利基森林病毒(Semliki Forest virus；SFV)表达载体，同时利用辛德比斯病毒结构基因构建了两个辅助载体，建立了嵌合SFV/SIN病毒样颗粒(VLPs)的包装系统。利用该技术制备的嵌合病毒样颗粒在疫苗研发、基因治疗等领域具备广泛的前景。

关键词：嵌合病毒制备塞姆利基森林病毒病毒结构基因生物技术领域病毒样颗粒包装系统包装信号表达载体辅助载体基因治疗疫苗研发甲病毒构建嵌合病毒

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一种pSFV-flagX-CMV复制子质粒、制备方法和鸡尾酒混合疫苗

一种pSFV-flagX-CMV复制子质粒、制备方法和鸡尾酒混合疫苗

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作者：陈瑞爱黄梅郑航辉方倪冉刘定祥杨小云董楠 510641 广东省广州市天河区五山路483号

本发明属于生物工程技术领域，公开了一种pSFV‑flagX‑CMV复制子质粒，采用含塞姆利基森林病毒复制子的载体，并将p54，p22，p32，p72，pCD2v，M448R，MGF505‑7R和M1249L基因分别插入所述载体而得；所述p54，p22，p32，p72，pCD2v，M448R... 详细信息

标准号: CN115094088A

本发明属于生物工程技术领域，公开了一种pSFV‑flagX‑CMV复制子质粒，采用含塞姆利基森林病毒复制子的载体，并将p54，p22，p32，p72，pCD2v，M448R，MGF505‑7R和M1249L基因分别插入所述载体而得；所述p54，p22，p32，p72，pCD2v，M448R，MGF505‑7R基因序列依次如SEQ ID NO.15‑NO.21所示。该质粒通过插入非洲猪瘟抗原基因(X)，制得的pSFV‑flagX‑CMV复制子质粒在真核细胞能够高效表达ASFV抗原蛋白，有利于非洲猪瘟鸡尾酒DNA疫苗的研制，也有利于通过Flag抗体胶对这些蛋白进行纯化，制取有别于原核表达的，具备翻译后修饰的高质量抗原蛋白；同时，本发明还公开了该质粒的制备方法和鸡尾酒混合疫苗。

关键词：质粒复制子鸡尾酒抗原蛋白猪瘟塞姆利基森林病毒生物工程技术领域翻译后修饰高效表达混合疫苗基因序列抗原基因原核表达真核细胞抗体制取制备蛋白基因

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pSFV-p54复制子颗粒及其制备方法与应用

pSFV-p54复制子颗粒及其制备方法与应用

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作者：方倪冉郑航辉温良海杨斌徐婷 526238 广东省肇庆市肇庆高新区创业路5号肇庆大华农生物药品有限公司动物大楼(生产车间)一楼

本发明属于基因工程技术领域，公开了一种pSFV‑p54复制子颗粒及其制备方法与应用。所述pSFV‑p54复制子颗粒的制备方法，包括以下步骤：(1)以pSFV‑sp6‑EGFP质粒和flag‑p54基因为材料，构建得到pSFV‑sp6‑p54质粒；所述flag‑p54基因如SEQ I... 详细信息

标准号: CN113652405A

本发明属于基因工程技术领域，公开了一种pSFV‑p54复制子颗粒及其制备方法与应用。所述pSFV‑p54复制子颗粒的制备方法，包括以下步骤：(1)以pSFV‑sp6‑EGFP质粒和flag‑p54基因为材料，构建得到pSFV‑sp6‑p54质粒；所述flag‑p54基因如SEQ ID NO：1所示；(2)分别将SFV‑helper辅助质粒和所述pSFV‑sp6‑p54质粒线性化并进行体外转录，将所得mRNA共电转入BHK细胞或Vero细胞中，得到pSFV‑p54复制子颗粒。本发明通过以塞姆利基森林病毒为载体，插入非洲猪瘟p54基因，所制得的pSFV‑p54复制子颗粒能够高效表达非洲猪瘟病毒p54蛋白，且具有较高的生物安全性，可应用于研制非洲猪瘟相关疫苗。

关键词：复制子颗粒猪瘟质粒制备塞姆利基森林病毒非洲猪瘟病毒基因工程技术生物安全性质粒线性化辅助质粒高效表达体外转录基因共电构建应用蛋白疫苗转入

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pSFVCs-EGFP和pSFV-EGFP病毒样颗粒及其制备方法、应用

pSFVCs-EGFP和pSFV-EGFP病毒样颗粒及其制备方法、应用

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作者：方倪冉黄梅温良海徐婷杨斌 526238 广东省肇庆市肇庆高新区创业路5号肇庆大华农生物药品有限公司动物大楼(生产车间)一楼

本发明公开了一种pSFVCs‑EGFP病毒样颗粒及其制备方法，包括：设计与合成引物：构建得到复制子质粒pSFVCs‑sp6‑EGFP；将复制子质粒pSFVCs‑sp6‑EGFP进行体外转录；再将其体外转录的mRNA共电转入BHK细胞中，得到pSFVCs‑EGFP病毒样颗粒。... 详细信息

标准号: CN113637647A

本发明公开了一种pSFVCs‑EGFP病毒样颗粒及其制备方法，包括：设计与合成引物：构建得到复制子质粒pSFVCs‑sp6‑EGFP；将复制子质粒pSFVCs‑sp6‑EGFP进行体外转录；再将其体外转录的mRNA共电转入BHK细胞中，得到pSFVCs‑EGFP病毒样颗粒。相应的，本发明在pSFVCs‑EGFP病毒样颗粒基础上构建了去除病毒衣壳蛋白结构的复制子质粒pSFV‑sp6‑EGFP，进而制备出病毒样颗粒pSFV‑EGFP。实施本发明，所述病毒样颗粒pSFV‑EGFP增强了EGFP蛋白的表达，成功建立了一种以塞姆利基森林病毒为载体高效表达其它重要外源蛋白的平台，为后续RNA疫苗研制奠定实验基础。

关键词：病毒样颗粒复制子质粒体外转录构建制备塞姆利基森林病毒病毒衣壳蛋白高效表达合成引物实验基础外源蛋白共电去除蛋白转入成功

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基于Semliki Forest甲病毒复制子的弓形虫NTPase-Ⅱ核酸疫苗的免疫保护性研究

基于Semliki Forest甲病毒复制子的弓形虫NTPase-Ⅱ核酸疫苗的免...

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作者：郑丽娜温州医科大学

学位级别：硕士

弓形虫（Toxoplasma gondii）是一种常见的机会性致病原虫，普遍寄生于人和多种动物的有核细胞内，可引起人兽共患弓形虫病，对孕妇或免疫缺陷患者（如器官移植、艾滋病及恶性肿瘤患者）造成严重的威胁。研制安全、高效、廉价的疫苗被... 详细信息

弓形虫（Toxoplasma gondii）是一种常见的机会性致病原虫，普遍寄生于人和多种动物的有核细胞内，可引起人兽共患弓形虫病，对孕妇或免疫缺陷患者（如器官移植、艾滋病及恶性肿瘤患者）造成严重的威胁。研制安全、高效、廉价的疫苗被认为是弓形虫防治的重要措施。核酸疫苗作为第三代疫苗，具有制备简单、能诱导体液免疫和细胞免疫应答等优势。基于甲病毒复制子设计的核酸疫苗，包括自主复制型RNA疫苗和自杀性DNA疫苗，利用甲病毒复制子的自主复制功能，在宿主细胞中高水平表达插入的外源抗原基因，而且能够宿主细胞的凋亡，呈现出比常规的核酸疫苗更好的应用前景。弓形虫核苷三磷酸脱氢酶Ⅱ(nucleosidetriphosphate hydrolaseⅡ，NTPase-Ⅱ)是分布于弓形虫速殖子表面的一种主要特异性抗原，对虫体在宿主细胞内的寄生和繁殖都具有重要的作用。本研究构建基于Semliki Forest Virus(SFV)甲病毒复制子的弓形虫NTPase-Ⅱ自主复制型RNA疫苗和自杀性DNA疫苗，评价它们在小鼠体内诱导的体液免疫应答和细胞免疫应答及其抗弓形虫的免疫保护作用，为弓形虫新型核酸疫苗的研制提供新型载体。　　目的：　　1.制备基于SFV甲病毒复制子的弓形虫NTPase-Ⅱ自主复制型RNA疫苗和自杀性DNA疫苗;2.评价弓形虫NTPase-Ⅱ自主复制型RNA疫苗和自杀性DNA疫苗诱导的免疫反应和免疫保护性，为弓形虫核酸疫苗的研制提供新型载体。　　方法：　　1.弓形虫NTPase-Ⅱ自主复制型RNA疫苗和自杀性DNA疫苗的制备　　从弓形虫RH株基因组中扩增到NTPase-Ⅱ基因，分别插入到两个基于SFV甲病毒复制子疫苗载体pRREP-eGFP和pDREP-eGFP构建重组质粒pRREP-NTPase-Ⅱ和pDREP-NTPase-Ⅱ。将pRREP-NTPase-Ⅱ质粒体外转录和加帽制备弓形虫NTPase-Ⅱ自主复制型RNA疫苗，大量提取pDREP-NTPase-Ⅱ质粒并纯化制备弓形虫NTPase-Ⅱ自杀性DNA疫苗。　　2.弓形虫NTPase-Ⅱ自主复制型RNA疫苗和自杀性DNA疫苗的体外鉴定　　采用脂质体转染法，将制备的弓形虫NTPase-Ⅱ自主复制型RNA疫苗和自杀性DNA疫苗分别转染人源胚胎肾细胞293T，经间接免疫荧光技术IFA检测插入的抗原基因NTPase-Ⅱ能否在293T细胞中的表达。　　3.弓形虫NTPase-Ⅱ自主复制型RNA疫苗和自杀性DNA疫苗对小鼠的免疫保护作用及其机制研究　　将制备的弓形虫NTPase-Ⅱ自主复制型RNA疫苗pRREP-NTPase-Ⅱ和自杀性DNA疫苗pDREP-NTPase-Ⅱ，采用肌肉注射联合瞬时电穿孔的方式分别免疫BALB/c小鼠，以pRREP-eGFP和pDREP-eGFP分别作为各自的疫苗对照，以PBS作为空白对照。ELISA法检测免疫小鼠血清中特异性的总IgG抗体及IgG1和IgG2a抗体亚类，评价诱导的体液免疫反应水平;CCK-8法检测免疫小鼠脾淋巴细胞增殖，ELISA法检测小鼠脾淋巴细胞分泌的4种细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10的含量，流式细胞术检测小鼠脾淋巴细胞中CD4+T细胞和CD8+T细胞的百分数，评价诱导的细胞免疫反应;对免疫小鼠腹腔注射弓形虫强毒株RH株速殖子进行急性攻击感染记录各组小鼠的生存时间，对免疫小鼠灌胃感染弓形虫成囊株Pru株进行慢性感染5周后计算各组小鼠脑组织中的包囊数，来评价疫苗对免疫小鼠抗弓形虫感染的免疫保护作用。　　结果：　　1.从弓形虫RH株基因组中扩增到NTPase-Ⅱ基因，经测序鉴定成功构建了两个基于SFV甲病毒复制子的弓形虫NTPase-Ⅱ核酸疫苗载体pRREP-NTPase-Ⅱ和pDREP-NTPase-Ⅱ，制备了弓形虫NTPase-Ⅱ自主复制型RNA疫苗和自杀性DNA疫苗;2.将制备的弓形虫NTPase-Ⅱ自主复制型RNA疫苗pRREP-NTPase-Ⅱ和自杀性DNA疫苗pDREP-NTPase-Ⅱ分别转染293T细胞，用NTPase-Ⅱ单抗经IFA检测NTPase-Ⅱ蛋白的表达。与对照组相比，转染NTPase-Ⅱ核酸疫苗的细胞检测到特异性的绿色荧光，表明制备的弓形虫NTPase-Ⅱ核酸疫苗能够介导外源插入的NTPase-Ⅱ抗原基因在哺乳动物细胞中表达成蛋白;3.将弓形虫NTPase-Ⅱ自主复制型RNA疫苗pRREP-NTPase-Ⅱ和自杀性DNA疫苗pRREP-NTPase-Ⅱ分别免疫BALB/c小鼠。与对照组相比，ELISA法检测到免疫组小鼠血清中IgG抗体及IgG1和IgG2a显著升高，且IgG2a/IgG1＞1，pDREP-NTPase-Ⅱ比pRREP-NTPase-Ⅱ诱导了更高水平的体液免疫应答;ELISA法检测到免

关键词：弓形虫核酸疫苗核苷三磷酸水解酶Ⅱ 塞姆利基森林病毒

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塞姆利基森林病毒翻译增强序列对HIV Gag DNA疫苗抗原表达和免疫原性的调节

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第8期25卷 672-676页

作者：张玉伟周克民李鼎锋李海山范文玲徐建青孙茂盛刘勇邵一鸣中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心北京100050 中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所

目的研究塞姆利基森林病毒(Semliki forest virus,SFV)衣壳蛋白5′翻译增强区对基于该病毒复制子的HIVGagDNA疫苗抗原表达水平和免疫原性的影响。方法将SFV衣壳蛋白(capsid,C蛋白)基因的5′端102bp翻译增强区插入到SFV复制子DNA疫苗载体... 详细信息

目的研究塞姆利基森林病毒(Semliki forest virus,SFV)衣壳蛋白5′翻译增强区对基于该病毒复制子的HIVGagDNA疫苗抗原表达水平和免疫原性的影响。方法将SFV衣壳蛋白(capsid,C蛋白)基因的5′端102bp翻译增强区插入到SFV复制子DNA疫苗载体pCMVRep的SFV亚基因启动子下游,得到DNA疫苗载体pCMVRepC。将删除ATG的HIV1gag基因插入pCMVRepC,使gag编码区与翻译增强区融合,得到DNA疫苗质粒pCMVRepCgag。同时,构建携带未融合翻译增强序列的DNA疫苗质粒pCMVRepgag。Westernblot检测翻译增强序列对Gag表达水平的影响。用上述两种DNA疫苗分别免疫BALBc雌性小鼠,ELISA检测Gag特异的抗体反应,ELISPOT和细胞内因子染色技术检测细胞免疫应答。结果衣壳蛋白5′翻译增强区增强了Gag表达水平,对体液免疫应答没有显著影响,但显著增强了特异性细胞免疫应答水平。结论SFVC蛋白翻译增强区能显著提高SFV复制子DNA疫苗的抗原表达和抗原特异性细胞免疫反应。

关键词：塞姆利基森林病毒翻译增强区 DNA疫苗 DNA疫苗载体 HIV-1 抗原表达免疫原性 Gag 特异性细胞免疫应答翻译

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基于SFVRNA复制子核酸疫苗pIRSFV-HN的构建及其体内外抑瘤作用

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中国肿瘤生物治疗杂志 2008年第1期15卷 20-24页

作者：张钰金宁一李霄朱继红陈漉刘立明李昌佟敬山李群陈勇志军事医学科学院全军基因工程重点实验室吉林大学第一临床医院长春130021 吉林农业大学动物科学技术学院长春130118 吉林大学畜牧兽医学院长春130062

目的:构建基于塞姆利基森林病毒(Semliki forest virus,SFV)RNA复制子和新城疫病毒HN基因的核酸疫苗pIRSFV-HN,并探讨其体内外的抑瘤作用。方法:基于SFV RNA复制子和新城疫病毒HN基因构建核酸疫苗pIRSFV-HN,pIRSFV-HN转染人结肠癌细胞HC... 详细信息

目的:构建基于塞姆利基森林病毒(Semliki forest virus,SFV)RNA复制子和新城疫病毒HN基因的核酸疫苗pIRSFV-HN,并探讨其体内外的抑瘤作用。方法:基于SFV RNA复制子和新城疫病毒HN基因构建核酸疫苗pIRSFV-HN,pIRSFV-HN转染人结肠癌细胞HCT-116,以Western blotting检测转染后HCT-116细胞HN的表达水平,以AO/EB双荧光染色检测肿瘤细胞的凋亡,以MTT法检测疫苗对HCT-116细胞增殖的抑制。构建C57BL/6小鼠右后肢皮下荷H22腹水瘤细胞模型,瘤体内注射pIRSFV-HN(共3次),检测该小鼠血清IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ水平和特异性CTL活性。结果:成功构建基于SFV RNA复制子和新城疫病毒HN基因的核酸疫苗pIRSFV-HN。结肠癌细胞HCT-116被疫苗转染后可有效表达HN蛋白,对照细胞则无表达;转染后HCT-116细胞出现凋亡的征象;该细胞的增殖受到明显抑制,最大抑制率达55.34%。移植瘤体内注射疫苗后,荷瘤小鼠血清IL-2、IFN-γ水平显著升高(P<0.05),其CTL活性也显著升高(P<0.01)。结论:基于SFVRNA复制子和新城疫病毒HN基因的核酸疫苗pIRSFV-HN在体外可有效地抑制肿瘤细胞;在体内可促使免疫趋向Th1优势,提高其抑瘤免疫水平。

关键词：塞姆利基森林病毒 RNA复制子新城疫病毒核酸疫苗结肠癌抑瘤作用细胞毒性T淋巴细胞

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猪2型圆环病毒ORF2基因在塞姆利基森林病毒RNA复制子衍生的新型真核表达载体中的表达

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生物工程学报 2004年第6期20卷 948-952页

作者：罗玉子仇华吉刘建华韩凌霞李娜张守发童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 延边大学农学院龙井133400

猪 2型圆环病毒 (porcinecircovirus 2 ,PCV2 )是断乳仔猪多系统衰竭综合征 (postweaningmultisystemicwastingsyndrome,PMWS)的原发性病原。PCV2的ORF2编码病毒唯一的结构蛋白Cap。根据GenBank中公布的PCV2JXL株的序列设计一对引物 ,应用PCR方法从该毒株感染的PK 15细胞中扩增出完整的ORF2基因 ,将此基因克隆于本实验室此前构建的塞姆利基森林病毒 (SemlikiForestvirus,SFV)RNA复制子衍生的新型真核表达载体pSFV1CS中的BamHⅠ位点 ,获得重组质粒pSFV1CS Cap。用pSFV1CS Cap分别转染BHK 2 1细胞和 2 93T细胞 ,经间接免疫荧光试验检测表明 ,PCV2ORF2基因在转染细胞中得到表达。小鼠接种试验表明。

关键词：断乳仔猪多系统衰竭综合征猪2型圆环病毒塞姆利基森林病毒 RNA复制子

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