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肝特异性非病毒基因治疗载体介导增强型绿色荧光蛋白基因在小鼠肝细胞及肝脏中的表达

中华实验外科杂志 2004年第10期21卷 1163-1164,i001页

作者：解军徐钧于保锋胡晓年程牛亮牛勃山西医科大学生物化学与分子生物学教研室太原030001 山西医科大学第一附属医院普外科协和医科大学基础研究所

目的　观察肝细胞特异性基因治疗载体蛋白介导增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)在体外培养小鼠肝细胞和小鼠肝脏中表达。方法　将基因工程制备的肝细胞特异载体蛋白与真核表达质粒以所带电荷比为 1∶1的比例混合 ,两者结合形成蛋白 DNA复合... 详细信息

目的　观察肝细胞特异性基因治疗载体蛋白介导增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)在体外培养小鼠肝细胞和小鼠肝脏中表达。方法　将基因工程制备的肝细胞特异载体蛋白与真核表达质粒以所带电荷比为 1∶1的比例混合 ,两者结合形成蛋白 DNA复合物 ,将该复合物加入体外培养的小鼠肝细胞培养基中或经门静脉注射小鼠体内 ,用激光共聚焦显微镜观察EGFP在体外培养小鼠肝细胞及活体小鼠肝脏组织中的表达。结果　在体外培养的小鼠肝细胞和小鼠肝脏切片中均可以观察到明显的绿色荧光 ,而对照组未能观察到绿色荧光蛋白。结论　构建的肝细胞特异性载体蛋白可以有效的将真核表达质粒载体pcDNA3 EGFP带入肝细胞和活体肝脏组织。

关键词：肝特异性非病毒基因治疗增强型绿色荧光蛋白基因小鼠肝细胞肝脏表达载体

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腺病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因在大鼠成体肝干细胞中的表达

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世界华人消化杂志 2004年第10期12卷 2341-2344页

作者：钟晓刚何生殷舞邓靖宇陈波四川大学华西医院普外科四川省成都市610041 四川大学华西医院病理科四川省成都市610041

目的:研究腺病毒感染成体肝干细胞介导外源基因表达的可行性及建立稳定表达EGFP的成体肝干细胞.方法:采用细菌同源重组法构建CMV驱动的EGFP报告基因腺病毒载体pAd-CMV-EGFP,在293细胞中包装制备腺病毒,并用重组腺病毒感染体外培养的成... 详细信息

目的:研究腺病毒感染成体肝干细胞介导外源基因表达的可行性及建立稳定表达EGFP的成体肝干细胞.方法:采用细菌同源重组法构建CMV驱动的EGFP报告基因腺病毒载体pAd-CMV-EGFP,在293细胞中包装制备腺病毒,并用重组腺病毒感染体外培养的成体肝干细胞WB-F344,观察腺病毒携带的外源基因EGFP在WB-F344细胞中的表达,及分析病毒对肝干细胞的感染效率.进一步单克隆培养纯化建立稳定表达EGFP的细胞株(WB-EGFP),并采用流式细胞技术、免疫细胞化学技术、诱导分化实验以观察其生物学特性.结果:成功构建腺病毒载体,并包装制备高滴度的重组腺病毒Ad-EGFP.重组腺病毒有效的感染WB-F344细胞,感染率约40-70%.建立WB-EGFP细胞株,持续传代8-9代均较稳定表达EGFP及肝干细胞表面标记,仍保持干细胞样的增生、分化等基本生物学特性.结论:腺病毒可高水平的介导外源基因表达于成体肝干细胞,是有效的基因转移系统.稳定表达EGFP的肝干细胞株观察直观、可连续传代,并保持干细胞的生物学特性,可用于体内外肝细胞研究中的追踪、鉴定.

关键词：腺病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因大鼠成体肝干细胞表达流式细胞技术免疫细胞化学技术

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增强型绿色荧光蛋白基因在人胎盘间充质干细胞中的表达

增强型绿色荧光蛋白基因在人胎盘间充质干细胞中的表达

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第九届全国实验血液学会议

作者：吴英张毅江小霞张双喜唐佩弦毛宁军事医学科学院基础医学研究所军事医学科学院基础医学研究所军事医学科学院基础医学研究所军事医学科学院基础医学研究所军事医学科学院基础医学研究所军事医学科学院基础医学研究所

目的我们自起源于胚胎发育期胚外中胚层的胎盘分离获得MSC,并将增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)导入其中,为进一步探讨胎盘MSC体内造血调控机制奠定基础。材料与方法采用基因重

关键词：增强型绿色荧光蛋白基因 MSC 人胎盘间充质干细胞

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亚非马蜂溶血肽基因与增强型绿色荧光蛋白基因融合在昆虫细胞中的表达

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农业生物技术学报 2006年第1期14卷 102-106+152页

作者：施婉君杨章女张传溪程家安上海201101 浙江大学应用昆虫学研究所杭州310029上海交通大学资源环境科学系浙江大学应用昆虫学研究所

构建亚非马蜂(Polisteshebraeus)溶血肽基因重组转移载体pBacHT-GFPTPhMT,转化含穿梭载体Bacmid的受体菌Escherichiacoli(DH10Bac)中,得重组穿梭载体Bacmid-GFPTPhM,再用Lipofectin介导其DNA转染粉纹夜蛾(Trichoplusiani)细胞系Tn。SDS-PAGE分析表明,感染Bacmid-GFPTPhM的Tn-5B1-4细胞的表达产物在约为34kD处出现特异性条带,表达量约占细胞总蛋白的3%。Westernblot显示表达产物具有良好的免疫活性。感染Bacmid-GFPTPhM的细胞表达时相动态分析进一步表明,与增强型绿色荧光基因融合的亚非马蜂溶血肽基因的重组病毒已在昆虫细胞中进行了成功地表达,感染后72h表达量可达最高水平。

关键词：亚非马蜂蜂毒溶血肽增强型绿色荧光蛋白基因表达

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含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的家蚕同源重组质粒载体的构建

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厦门大学学报（自然科学版） 2002年第5期41卷 628-633页

作者：桂慕燕叶向群吴春旭熊秀芳厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建厦门361005

以含家蚕丝心蛋白重链基因同源片段的质粒pG35 0为出发质粒 ,插入增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)基因 ,构建成以EGFP为报告基因的同源重组质粒载体 pMD Fib IE EGFP ,通过PCR及酶切鉴定表明EGFP以正确的方式插入到原始质粒中 ,通过脂质体介... 详细信息

以含家蚕丝心蛋白重链基因同源片段的质粒pG35 0为出发质粒 ,插入增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)基因 ,构建成以EGFP为报告基因的同源重组质粒载体 pMD Fib IE EGFP ,通过PCR及酶切鉴定表明EGFP以正确的方式插入到原始质粒中 ,通过脂质体介导法转染胃癌细胞能发出很强的绿色荧光 ,表明该质粒能够在真核细胞中表达。

关键词： EGFP 家蚕同源重组质粒载体增强型绿色荧光蛋白基因转基因蚕载体构建基因表达

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超顺磁氧化铁、绿色荧光蛋白双标胶质细胞源性神经营养因子基因修饰中脑神经前体细胞的建立

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中华实验外科杂志 2008年第8期25卷 964-966,1089页

作者：刘如恩邓兴力郭京冯忠堂王武雷德强李红艳陈志华中日友好医院神经外科北京100029 昆明医学院第一附属医院神经外科中日友好医院放射诊断科华中科技大学同济医学院附属协和医院神经外科中日友好医院临床医学研究所

目的建立超顺磁氧化铁（SPIO）、绿色荧光蛋白（EGFP）双标胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）基因修饰中脑神经干细胞。方法以质粒pEGFPN1-GDNF转染大鼠胚胎中脑神经干细胞，SPIO标记细胞。荧光显微镜、免疫细胞化学和Western blot鉴定E... 详细信息

目的建立超顺磁氧化铁（SPIO）、绿色荧光蛋白（EGFP）双标胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）基因修饰中脑神经干细胞。方法以质粒pEGFPN1-GDNF转染大鼠胚胎中脑神经干细胞，SPIO标记细胞。荧光显微镜、免疫细胞化学和Western blot鉴定EGFP、GDNF表达；普鲁土蓝染色、透射电镜鉴定SPIO标记率；诱导分化后免疫细胞化学鉴定其分化能力。结果基因转染12h后EGFP开始表达；免疫细胞化学、Western blot表明GDNF能正确表达；普鲁土蓝染色示SPIO标记率达100％，透射电镜示SPIO颗粒位于吞饮小泡和胞质内；体外诱导分化研究表明SPIO、EGFP双标记不影响其分化。结论成功建立SPIO、EGFP双标GDNF基因修饰中脑神经干细胞。

关键词：超顺磁氧化铁增强型绿色荧光蛋白基因胶质细胞源性神经营养因子中脑神经干细胞

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利用柞蚕核型多角体病毒表达载体系统在柞蚕蛹中表达增强型绿色荧光蛋白

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蚕业科学 2010年第5期36卷 792-799页

作者：王林美张波叶博赵振军李树英李文利岳冬梅范琦辽宁省农业科学院大连生物技术研究所辽宁省野蚕重点实验室辽宁大连116024

为了探讨外源蛋白在柞蚕蛹-柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)表达系统的表达水平和稳定性,将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因克隆到柞蚕核型多角体病毒转移表达载体pApM748BE中,获得重组质粒DNA,与ApNPV DNA共转染樗蚕(Phi-losamia cynthiam)培... 详细信息

为了探讨外源蛋白在柞蚕蛹-柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)表达系统的表达水平和稳定性,将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因克隆到柞蚕核型多角体病毒转移表达载体pApM748BE中,获得重组质粒DNA,与ApNPV DNA共转染樗蚕(Phi-losamia cynthiam)培养细胞Pc-01后,用末端稀释法筛选获得重组病毒ApNPV-Δph/egfp+。将该重组病毒感染柞蚕蛹,采用SDS-PAGE和Western blot方法检测EGFP在柞蚕蛹中的表达,结果显示:在柞蚕蛹感染重组病毒ApNPV-Δph/egfp+后6 d,EG-FP就有明显的表达;感染后12～18 d,蛹体液中的EGFP含量保持较高水平,以EGFP标准样品定量分析EGFP在柞蚕蛹体液中的表达水平高于1 mg/mL;感染后30～39 d仍可以检测到蛹体液中EGFP的表达,而且蛋白稳定。研究结果表明,利用柞蚕核型多角体病毒作表达载体,可在柞蚕蛹中高效稳定地表达EGFP,并且EGFP在雌雄蛹间的表达水平无明显差异。

关键词：柞蚕蛹核型多角体病毒表达载体系统增强型绿色荧光蛋白基因樗蚕培养细胞

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根癌农杆菌介导的巨大口蘑遗传转化体系的构建

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菌物学报 2020年第10期39卷 1897-1904页

作者：查丽燕宋舒晴王越文华枢莫美华华南农业大学食品学院广东广州510642

以巨大口蘑菌丝为受体材料,利用含有双元质粒plasmid4的根癌农杆菌EHA105介导,首次成功建立了巨大口蘑的遗传转化体系。通过潮霉素抗性筛选、PCR鉴定和绿色荧光蛋白的检测,表明潮霉素抗性基因(Hyg)已经整合到巨大口蘑基因组中,增强型绿... 详细信息

以巨大口蘑菌丝为受体材料,利用含有双元质粒plasmid4的根癌农杆菌EHA105介导,首次成功建立了巨大口蘑的遗传转化体系。通过潮霉素抗性筛选、PCR鉴定和绿色荧光蛋白的检测,表明潮霉素抗性基因(Hyg)已经整合到巨大口蘑基因组中,增强型绿色荧光蛋白基因(eGFP)在巨大口蘑菌丝中获得表达,并能够稳定遗传。本研究建立了农杆菌介导的巨大口蘑遗传转化体系,为今后巨大口蘑的基因功能研究奠定了基础。

关键词：巨大口蘑根癌农杆菌遗传转化潮霉素增强型绿色荧光蛋白基因

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携带bcl-2基因慢病毒感染人原代卵巢颗粒细胞的凋亡

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中国组织工程研究 2013年第28期17卷 5209-5215页

作者：王雪峰谭峰陈燕英刘木彪何援利南方医科大学附属珠江医院妇产科广东省广州市510282

背景:慢病毒可以感染分裂及非分裂细胞,对于较难转染的原代卵巢颗粒细胞,慢病毒能否成功进行感染?目的:探讨携带bcl-2基因的慢病毒感染原代人卵巢颗粒细胞的效率及对细胞凋亡的影响。方法:利用分子生物学技术,构建携带bcl-2基因慢病毒载... 详细信息

背景:慢病毒可以感染分裂及非分裂细胞,对于较难转染的原代卵巢颗粒细胞,慢病毒能否成功进行感染?目的:探讨携带bcl-2基因的慢病毒感染原代人卵巢颗粒细胞的效率及对细胞凋亡的影响。方法:利用分子生物学技术,构建携带bcl-2基因慢病毒载体,包装成高滴度慢病毒,将重组慢病毒在体外分别以不同感染复数(10,50,100,200,400)感染人卵巢原代颗粒细胞,感染24,48,72,96h后观察感染效率及细胞增殖情况,同时采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,利用反转录聚合酶链反应检测bcl-2基因的转录情况。结果与结论:原代培养人卵巢颗粒细胞24h即贴壁,集落样生长,呈多角形或梭形;当感染复数为100时,细胞的形态和生长不受影响,且感染效率较高,感染后72h达高峰,其在颗粒细胞中的阳性率达60%;携带bcl-2基因的慢病毒感染原代培养的人卵巢颗粒细胞,可以过度分泌Bcl-2蛋白,能抑制卵巢颗粒细胞的凋亡。

关键词：组织构建组织构建细胞学实验 bcl-2基因慢病毒卵巢颗粒细胞细胞凋亡基因转染载体构建卵巢早衰增强型绿色荧光蛋白基因国家自然科学基金

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反转录病毒载体RCASBP介导的EGFP基因在DF-1细胞中的表达

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中国畜牧兽医 2015年第10期42卷 2538-2543页

作者：秦建如黎娜铭许长剑廖明曹伟胜华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室广州510642

为建立反转录病毒载体RCASBP介导的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在DF-1细胞中的表达体系,本研究将PCR获得的EGFP基因插入反转录病毒载体RCASBP,构建重组反转录病毒载体RCASBP-EGFP,之后将重组载体转染DF-1细胞;用基于禽白血病病毒(ALV)... 详细信息

为建立反转录病毒载体RCASBP介导的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在DF-1细胞中的表达体系,本研究将PCR获得的EGFP基因插入反转录病毒载体RCASBP,构建重组反转录病毒载体RCASBP-EGFP,之后将重组载体转染DF-1细胞;用基于禽白血病病毒(ALV)p27抗原的ELISA检测盲传至第4代的细胞上清,ELISA阳性结果说明重组病毒拯救成功;荧光显微镜观察发现80%以上DF-1细胞都有明显的绿色荧光信号,证明DF-1细胞表达绿色荧光蛋白;对DF-1细胞基因组进行特异性PCR检测,扩增出特异性条带说明重组反转录病毒载体RCASBP-EGFP携带的EGFP基因整合到DF-1细胞的基因组中。本研究建立的RCASBP介导反转录病毒表达体系为研究ALV基因的结构和功能奠定了基础。

关键词：禽白血病病毒反转录病毒载体RCASBP 增强型绿色荧光蛋白基因 DF-1细胞

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