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过表达己糖激酶2通过激活JAK/STAT途径促进结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭并调节肿瘤免疫微环境

南方医科大学学报 2025年第3期45卷 542-553页

作者：庆顺杰沈智勇南方医科大学南方医院普通外科广东广州510515

目的探究己糖激酶2(HK2)在结直肠癌组织中的表达,阐明其生物学功能及机制和对免疫微环境的影响。方法使用生物信息学方法分析HK2在结直肠癌组织中的表达水平、预后和对免疫微环境的影响。收集本院8例结直肠癌患者的肿瘤组织及配对癌旁组... 详细信息

目的探究己糖激酶2(HK2)在结直肠癌组织中的表达,阐明其生物学功能及机制和对免疫微环境的影响。方法使用生物信息学方法分析HK2在结直肠癌组织中的表达水平、预后和对免疫微环境的影响。收集本院8例结直肠癌患者的肿瘤组织及配对癌旁组织,利用免疫组化、Western blotting和RT-qPCR实验验证HK2在结直肠癌中的表达水平。筛选出HK2表达量低的结直肠癌细胞系CT26及HCT116进行慢病毒转染过表达HK2,分为空白对照组和HK2过表达组;使用HK2抑制剂3-BP处理HK2表达量高的结直肠癌细胞系MC38及CACO_(2);使用JAK/STAT3通路抑制剂处理结直肠癌细胞HK2过表达组。采用CCK-8、平板克隆形成实验、Transwell和小鼠皮下荷瘤实验探究HK2对结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响。通过Western blotting检测HK2过表达对JAK/STAT信号通路蛋白表达的影响。采用MCPcounter和Timer分析HK2表达与肿瘤免疫细胞浸润水平的相关性,TCGA、GEO数据库分析HK2表达与免疫检查点的相关性。结果癌症公共数据库显示,HK2在结直肠癌组织中的表达水平高于癌旁组织(P<0.001),并且高表达HK2的结直肠癌患者预后更差(P=0.09)。免疫组化、Western blotting和RT-qPCR结果显示结直肠癌组织的HK2表达水平高于癌旁组织(P<0.01)。相较于其他结直肠癌细胞,CT26和HCT116的HK2表达水平最低(P<0.05),HK2过表达组相较于空白对照组的HK2表达水平上调(P<0.01),且过表达组细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著提高(P<0.001)。HK2被抑制后肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力明显被抑制。HK2可促进JAK/STAT信号通路中STAT3磷酸化蛋白的表达,使用JAK/STAT3通路抑制剂能够有效抑制由HK2过表达介导的肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的增强。Timer和MCP counter分析显示HK2表达与多种免疫细胞具有相关性,TCGA和GEO数据库分析显示HK2的表达水平与PDCD1等免疫检查点显著正相关(P<0.05)。结论HK2在结直肠癌中表达上调,可能通过激活JAKSTAT信号通路促进肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,并调节肿瘤免疫微环境。

关键词：结直肠癌己糖激酶2 JAK-STAT信号通路增殖、迁移和侵袭免疫微环境

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ANXA1对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制的初步探讨

ANXA1对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制的初步探讨

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作者：郑露露南华大学

学位级别：硕士

胃癌是全球最为常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率在我国所有恶性肿瘤中均居前列。课题组前期通过免疫组化等实验研究发现ANXA1、S100A9和Vimentin三种蛋白的表达水平可能与胃癌的发生发展、浸润转移等恶性生物学行为相关,并通过统... 详细信息

胃癌是全球最为常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率在我国所有恶性肿瘤中均居前列。课题组前期通过免疫组化等实验研究发现ANXA1、S100A9和Vimentin三种蛋白的表达水平可能与胃癌的发生发展、浸润转移等恶性生物学行为相关,并通过统计学等级相关检验分析发现这三种蛋白的表达水平具有一定的相关性。本研究旨在初步探讨ANXA1对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制,为胃癌远处转移的分子机制提供实验室数据。方法:1.采用Western blot实验检测正常胃黏膜上皮细胞GES-1和胃癌BGC--823、MGC803、SGC7901、HGC27细胞中ANXA1的表达情况。2.构建ANXA1过表达与干扰质粒。3.运用脂质体转染技术,建立ANXA1过量与敲低表达的重组胃癌细胞系(MGC803-ANXA1(+)、BGC823-ANXA1-sh RNA)和相对应的空载体对照细胞系(MGC803-vector、BGC823-scramble)。4.运用RT-q PCR实验、Western blot实验分析检测ANXA1过表达质粒转染组、ANXA1干扰质粒转染组以及相应的过表达和干扰对照组中ANXA1 m RNA和蛋白质的表达情况,并选择ANXA1过表达效果较好的MGC803-ANXA1(+)细胞和ANXA1干扰效果较好的BGC823-ANXA1--sh2与BGC823-ANXA1-sh3细胞进行后续实验。5.采用CCK-8实验、平板克隆形成实验、划痕实验与Transwell迁移侵袭实验,观察ANXA1表达上调或下调对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。6.采用Western blot实验检测胃癌细胞系中ANXA1表达上调和下调对S100A9和Vimentin蛋白表达的影响。结果:*** blot实验检测ANXA1在GES-1细胞和不同胃癌细胞系中的表达情况,结果显示:与GES-1细胞相比,ANXA1在胃癌细胞中低表达(P<0.05),其中,在胃癌BGC823和SGC7901细胞中的表达相对较高,在胃癌MGC803和HGC27细胞中的表达相对较低。2.成功构建ANXA1过表达与干扰质粒。3.瞬时转染ANXA1过表达载体,RT-q PCR及Western blot实验的结果显示:与对照组细胞系MGC803-vector相比,在过表达ANXA1质粒转染组MGC803-ANXA1(+)细胞中,ANXA1 m RNA和蛋白表达的水平明显上调(P<0.01)。4.瞬时转染ANXA1干扰载体,RT-q PCR及Western blot实验的结果显示:与对照组细胞系BGC823-scramble相比,在ANXA1干扰质粒转染组BGC823-ANXA1-sh RNA细胞中,ANXA1 m RNA和蛋白表达的水平明显下调(P<0.0001),其中BGC823-ANXA1-sh2和BGC823-ANXA1-sh3干扰效果最佳。***-8实验、平板克隆形成实验、划痕实验和Transwell迁移侵袭实验分别检测上调或下调ANXA1表达后对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭产生的影响,结果显示:上调ANXA1表达后,胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力均明显减弱(P<0.01),而下调ANXA1表达后,胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力均明显增强(P<0.05)。*** blot检测胃癌细胞系中ANXA1表达上调和下调对S100A9和Vimentin蛋白表达的影响。结果显示:上调ANXA1表达后,S100A9和Vimentin蛋白表达水平降低,而下调ANXA1表达后,S100A9和Vimentin蛋白表达水平升高(P<0.0001)。结论:***1具有抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用。***1影响胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭可能与S100A9和Vimentin蛋白表达有关。

关键词：胃癌 ANXA1 增殖、迁移和侵袭 S100A9 Vimentin

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PDIA6在头颈鳞癌中作用的生物信息学分析及机制的初步研究

PDIA6在头颈鳞癌中作用的生物信息学分析及机制的初步研究

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作者：王吉贵州医科大学

学位级别：硕士

目的: 探究蛋白质二硫键异构酶家族A成员6（Protein disulfide isomerase family 6,PDIA6）在头颈鳞状细胞癌（Head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC）中的作用;验证PDIA6在HNSCC组织中的表达水平,初步探究PDIA6与免疫信号通路CD155/T细胞免疫球蛋白和ITIM结构域（T cell immunoglobulin and ITIM domain,TIGIT）的相关性;探究PDIA6对HNSCC细胞系增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法: 基于美国癌症基因组图谱计划（TCGA）数据库,研究PDIA6 mRNA在多种肿瘤中的表达水平;PDIA6 mRNA表达水平在多种肿瘤患者中与受试者工作曲线（ROC）之间的关系;运用Kaplan-Meier数据库,评估PDIA6与多种肿瘤患者总体生存率（OS）之间的关系。利用TIMER2.0软件分析PDIA6与HNSCC免疫细胞浸润的相关性。Linked Omics数据库探究PDIA6在HNSCC中的共表达基因,GO和KEGG分析PDIA6在HNSCC中可能富集的信号通路。运用STRING数据库,分析与PDIA6表达具有相关性的蛋白之间的相互作用关系。运用实时荧光定量PCR反应（Real-time fluorescent quantitative PCR,RT-qPCR）技术及蛋白质免疫印迹法（Western Blot,WB）检测PDIA6在临床样本HNSCC组织及癌旁正常组织中mRNA及蛋白的表达情况。细胞实验以HNSCC细胞系SCC25、SCC9、FADU、CAL27以及正常口腔角质上皮细胞HOK作为研究对象,RT-qPCR以及Western Blot分别检测细胞株中PDIA6 mRNA和蛋白的表达水平。采用慢病毒感染技术,构建PDIA6过表达及PDIA6敲低的稳定转染细胞株,并利用RT-qPCR技术和Western Blot检测感染效率。Western Blot检测未折叠蛋白反应（unfolded protein response,UPR）中肌醇需要酶1（inositol-requiring enzyme 1,IRE1）和CD155在HNSCC细胞中的表达水平,利用免疫共沉淀实验探究PDIA6与CD155的之间的相互作用关系。流式细胞技术检测HNSCC患者以及正常健康自愿者（healthy donor,HD）外周血中CD8+T和CD4+T细胞表面TIGIT的表达水平,以及CD4+T细胞表面CD155的表达水平。CCK-8实验以及克隆形成实验法用于检测HNSCC细胞的增殖能力,细胞划痕实验以及Transwell迁移实验检测HNSCC细胞的迁移能力,Transwell侵袭实验用于检测HNSCC细胞侵袭的能力。结果: （1）TCGA数据库分析显示PDIA6在HNSCC等多种肿瘤中表达增高（P<0.05）,Kaplan-Meier生存分析提示PDIA6高表达组患者总体生存期（OS）比低表达患者更短（P<0.05）,ROC曲线提示PDIA6诊断HNSCC具有较高特异度和敏感度的。免疫相关性分析提示PDIA6在HNSCC肿瘤的免疫浸润和激活中发挥作用。（2）RT-qPCR以及WB检测发现PDIA6在HNSCC临床组织中的mRNA相对表达量以及蛋白表达量高于癌旁正常组织,在HNSCC细胞系中的mRNA相对表达量也高于正常口腔角质上皮细胞系HOK的相对表达量,并且差异具有统计学意义（P<0.05）。（3）运用慢病毒转染技术在HNSCC细胞系中构建PDIA6敲低（sh-PDIA6）和过表达（OE-PDIA6）的细胞株,RT-qPCR与WB均证实能有效敲低和过表达细胞中PDIA6的表达,且差异具有统计学意义（P<0.05）。（4）WB验证sh-PDIA6组HNSCC细胞株中,肌醇需要酶1（IRE1）表达增高,但CD155表达降低,差异具有统计学意义（P<0.05）;OE-PDIA6组HNSCC细胞株中,IRE1表达降低,CD155表达增加,并且差异具有统计学意义（P<0.05）;免疫共沉淀验证PDIA6与CD155可能具有相互作用的关系。（5）HNSCC患者外周血中CD8+T和CD4+T细胞表面TIGIT的表达水平,以及CD4+T细胞表面CD155的表达水平均高于健康对照组外周血中的表达水平。（6）细胞增殖的相关实验中,CCK-8实验以及克隆形成实验提示OE-PDIA6组细胞的增殖能力增强,sh-PDIA6组能细胞的增殖能力减弱,且实验组与对照组之间差异具有统计学意义（P<0.05）。（7）划痕实验证明sh-NC组细胞的迁移率均大于sh-PDIA6组细胞,OE-PDIA6组细胞的迁移率均大于OE-NC组

关键词：头颈鳞癌 PDIA6 CD155/TIGIT 免疫浸润增殖、迁移和侵袭

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LncRNA UCA1通过调节miR-206/PTP1B轴影响宫颈癌细胞增殖迁移及侵袭

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西部医学 2021年第9期33卷 1276-1283页

作者：冯艳孙延霞贺晶李红霞延安大学附属医院妇科陕西延安716000

目的探讨LncRNA UCA1通过miR-206/PTP1B轴对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法将细胞培养后随机分为对照组、si-NC组(转染si-NC)、si-UCA1组(转染si-UCA1)、si-PTP1B组(转染si-PTP1B)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-206组(转染miR-206)、anti-miR-206组(转染anti-miR-206)、miR-NC+si-NC组(转染miR-NC和si-NC)、miR-206+si-NC组(转染miR-206和si-NC)、anti-miR-206+si-NC组(转染anti-miR-206和si-NC)、anti-miR-206+si-UCA1组(转染anti-miR-206和si-UCA1)、miR-NC+si-PTP1B组(转染miR-NC和si-PTP1B)、anti-miR-206+si-PTP1B组(转染anti-miR-206和si-PTP1B)。qRT-PCR检测宫颈癌细胞UCA1和miR-206的表达;Western blot检测宫颈癌细胞PTP1B的表达;荧光素酶报告基因实验验证UCA1与miR-206、miR-206与PTP1B的靶向关系;CCK-8检测宫颈癌细胞活力;流式细胞术检测宫颈癌细胞凋亡;Transwell实验检测宫颈癌细胞迁移和侵袭能力。结果与人正常宫颈上皮细胞相比,宫颈癌细胞中UCA1表达显著升高(P<0.01),miR-206表达显著降低(P<0.05)。与si-NC组相比,si-UCA1组细胞UCA1表达、细胞活力、迁移和侵袭能力均显著降低(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01)。UCA1和miR-206间存在相互调控作用;与miR-NC+si-NC组相比,miR-206+si-NC组细胞活力、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.01),anti-miR-206+si-NC组则呈现相反变化;与anti-miR-206+si-NC组相比,anti-miR-206+si-UCA1组细胞活力、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01)。miR-206靶向调控PTP1B;与miR-NC+si-NC组相比,anti-miR-206+si-NC组细胞活力、迁移和侵袭能力显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05),miR-NC+si-PTP1B组则呈现相反变化;与anti-miR-206+si-NC组相比,anti-miR-206+si-PTP1B组细胞活力、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。结论LncRNA UCA1通过调节miR-206/PTP1B轴促进宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭。

关键词： LncRNA UCA1 宫颈癌增殖、迁移和侵袭 miR-206 PTP1B

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