检索结果-内蒙古大学图书馆

食品与发酵工业 2023年第23期49卷 33-40页

作者：周丽亚张悦刘瑞琪陈佳立刘运亭姜艳军马丽河北工业大学化工学院天津300000

肌酐酶(creatininase,CA)是一种应用于体外检测试剂的重要工具酶,目前主要由微生物法生产,存在产量低和活性差的问题,限制了其实际应用。该研究通过全基因合成和异源表达构建了重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET28a-CA,获得了高性能CA。通过单... 详细信息

肌酐酶(creatininase,CA)是一种应用于体外检测试剂的重要工具酶,目前主要由微生物法生产,存在产量低和活性差的问题,限制了其实际应用。该研究通过全基因合成和异源表达构建了重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET28a-CA,获得了高性能CA。通过单因素试验和响应面设计分析确定最优培养基组成,并系统地优化了发酵条件,从而提高了CA表达量。培养基优化实验结果表明,最优培养基各组分为:葡萄糖10.33 g/L、酵母浸粉21.80 g/L、磷酸盐137.63 mmol/L和胰蛋白胨15.60 g/L。经过5 L发酵罐发酵工艺优化,极大地提高了CA的活力,在接种量4%、诱导温度25℃、诱导时间18 h、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷浓度0.2 mmol/L、溶氧值30%条件下,其活力达到470.24 U/mL,比酶活力为367.38 U/mg。该研究为CA的生产和工业化应用提供了理论基础和技术支持。

关键词：肌酐酶外源表达发酵优化大肠杆菌响应面法

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水稻抗褐飞虱基因Bph3调控蛋白B8AK41的外源表达、纯化及亚细胞定位

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西南农业学报 2025年第1期38卷 107-114页

作者：卿冬进卢柏亦彭宇婧戴高兴陈韦韦李经成周维永黄所生潘英华黄娟邓国富广西农业科学院水稻研究所/广西水稻遗传育种重点实验室南宁530007 广西农业科学院植物保护研究所南宁530007

【目的】外源表达获得B8AK41蛋白,并检测B8AK41蛋白亚细胞定位,为研究该蛋白在水稻抗褐飞虱上的生物学功能提供基础。【方法】对B8AK41蛋白序列进行跨膜区预测,构建原核表达载体诱导外源蛋白表达,纯化目标蛋白并鉴定蛋白多肽序列;构建... 详细信息

【目的】外源表达获得B8AK41蛋白,并检测B8AK41蛋白亚细胞定位,为研究该蛋白在水稻抗褐飞虱上的生物学功能提供基础。【方法】对B8AK41蛋白序列进行跨膜区预测,构建原核表达载体诱导外源蛋白表达,纯化目标蛋白并鉴定蛋白多肽序列;构建双元表达载体并转入水稻原生质体检测蛋白亚细胞定位。【结果】通过对B8AK41蛋白的跨膜结构域分析,发现该蛋白第47~99位氨基酸区域可能存在跨膜结构域,因此选取第100~374位氨基酸进行外源表达蛋白片段。通过SDS-PAGE电泳分析外源表达的B8AK41蛋白,结果显示B8AK41蛋白在28℃IPTG诱导下成功表达,采用亲和层析方法可纯化得到分子量在35~40 kD的His6-B8AK41-His6融合蛋白。通过质谱分析纯化得到的蛋白,其中有3条属于B8AK41蛋白的肽段,证明外源表达纯化的B8AK41蛋白完全正确。采用荧光共聚焦显微镜观察到B8AK41蛋白定位在细胞内质网上。【结论】水稻抗褐飞虱基因Bph3的正调控蛋白B8AK41的非跨膜区能够在大肠杆菌中表达,通过亲和层析方法纯化得到融合蛋白His6-B8AK41-His6,后续可将B8AK41蛋白用于抗体制备。B8AK41蛋白定位在水稻细胞内质网上,为研究蛋白功能提供基础。

关键词：水稻褐飞虱 Bph3基因 B8AK41蛋白外源表达亚细胞定位

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水稻冷胁迫响应蛋白OsCML16的外源表达、纯化及质谱验证

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西南农业学报 2023年第6期36卷 1150-1156页

作者：卿冬进邓国富戴高兴潘英华陆春菊李经成周维永陈韦韦梁海福陈荣林广西农业科学院水稻研究所/广西水稻遗传育种重点实验室南宁530007 广西农业科学院南宁530007

【目的】在大肠杆菌中过表达、纯化水稻冷胁迫响应蛋白OsCML16,同时制备OsCML16蛋白抗体提供抗原,为采用该抗体研究水稻OsCML16蛋白的生物学功能提供参考依据。【方法】采用TMHMM 2.0在线分析软件对目的蛋白OsCML16进行跨膜区分析,利用... 详细信息

【目的】在大肠杆菌中过表达、纯化水稻冷胁迫响应蛋白OsCML16,同时制备OsCML16蛋白抗体提供抗原,为采用该抗体研究水稻OsCML16蛋白的生物学功能提供参考依据。【方法】采用TMHMM 2.0在线分析软件对目的蛋白OsCML16进行跨膜区分析,利用高保真PCR扩增目的基因片段,以基因重组方法构建原核表达载体pET30a-OsCML16,并将重组质粒转入大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中;通过IPTG诱导OsCML16蛋白表达,然后采用亲和层析方法纯化获得目的蛋白,最后运用质谱验证法分析验证蛋白序列的真实性。【结果】通过对OsCML16蛋白跨膜区分析,发现该蛋白不包含跨膜结构,适合外源表达全长蛋白。将OsCML16基因链接至pET30a载体能成功构建原核表达载体pET30a-OsCML16,目的基因序列无突变位点,可用于表达目标蛋白。外源表达的OsCML16蛋白经过SDS-PAGE电泳分析,结果表明,OsCML16蛋白在28℃下可诱导表达,采用亲和层析方法纯化融合蛋白His6-OsCML16-His6,能成功获得分子量约30 kD的目的蛋白。对纯化的蛋白进行质谱验证分析,结果鉴定到3条多肽属于OsCML16蛋白,表明外源表达的蛋白即为OsCML16蛋白。【结论】采用原核表达方法将水稻冷胁迫响应基因OsCML16在大肠杆菌中表达,运用亲和层析技术根据融合蛋白携带组氨酸标签纯化获得融合表达蛋白His6-OsCML16-His6,并以蛋白质谱技术验证该蛋白的序列完全正确,后续可将水稻OsCML16蛋白用于抗体制备及蛋白功能研究。

关键词：水稻冷胁迫 OsCML16蛋白外源表达纯化

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蒙古黄芪病程相关蛋白AmPR-10及其突变体的外源表达和活性测定

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山西中医药大学学报 2022年第2期23卷 111-115页

作者：王珏吴娜张育敏翟丽娟胡丽丽山西中医药大学基础医学院山西晋中030619

目的:蒙古黄芪病程相关蛋白(Astragalus membranaceus pathogenesis-related protein-10,AmPR-10)具有核酸酶活性,对黄芪生长发育的抗病过程有重要作用。为进一步提高野生型AmPR-10的活性,设计了相应突变体,并分析其表达量和活性较野生... 详细信息

目的:蒙古黄芪病程相关蛋白(Astragalus membranaceus pathogenesis-related protein-10,AmPR-10)具有核酸酶活性,对黄芪生长发育的抗病过程有重要作用。为进一步提高野生型AmPR-10的活性,设计了相应突变体,并分析其表达量和活性较野生型的变化。方法:通过理性分析发现野生型AmPR-10的Ser(84)、Gly(140)、Glu(141)突变后会影响目标蛋白的空间结构、降低底物单核苷酸的对接自由能,据此设计合成了两个突变体M1:S84D+G140V、M2:S84D+G140V+E141M,并对野生型AmPR-10与M1、M2分别进行外源低温诱导表达,同时测定了他们的核酸酶活性和抗菌抑菌作用。结果:突变体M1、M2经诱导后表达量和核酸酶活性皆高于野生型,其中M1、M2核酸酶活性分别为野生型的1.46倍及1.45倍;突变体M1可对金黄色葡萄球菌产生抑菌作用,抑菌环大小约为5 mm。结论:AmPR-10突变体的活性较野生型有所提高,这一结果有利于深入探讨AmPR-10的相关活性机制,为抗病黄芪的育种奠定理论依据。

关键词： AmPR-10 突变体外源表达活性测定

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重组角蛋白和类角蛋白多肽的外源表达及其可纺性研究

重组角蛋白和类角蛋白多肽的外源表达及其可纺性研究

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作者：汤傲东华大学

学位级别：硕士

角蛋白来源于羽毛、羊毛以及人发等天然可再生资源,价格低廉且具有良好的生物学特性,被广泛应用于生物医学研究领域。角蛋白由于其高含量的二硫键以及复杂的三维结构,提取时的化学条件通常较为苛刻,无法工业规模化;此外,化学法提取的角... 详细信息

角蛋白来源于羽毛、羊毛以及人发等天然可再生资源,价格低廉且具有良好的生物学特性,被广泛应用于生物医学研究领域。角蛋白由于其高含量的二硫键以及复杂的三维结构,提取时的化学条件通常较为苛刻,无法工业规模化;此外,化学法提取的角蛋白存在以下诸多问题也使其难以在医药行业应用:动物来源的角蛋白引起了免疫不耐受以及跨物种疾病传播的风险,人发角蛋白由于频繁烫染而质量急剧下降,以及不同来源或同一来源不同批次间角蛋白性质差异显著。这些问题严重阻碍了角蛋白基材料研究前进的步伐。利用DNA重组技术对蛋白质一级序列、链长以及立体化学的精确控制可以解决角蛋白化学制备的不足。本论文采用分子生物学手段,通过基因水平分子设计构建重组质粒,并采用异源宿主诱导表达,进一步对其鉴定以及分离纯化,最终获得了具有定制序列的重组蛋白质,为涉及角蛋白的后续可纺性研究打下了良好的基础。类弹性蛋白多肽ELP是受哺乳动物弹性蛋白原启发而制备的一类经典基因工程重组多肽聚合物,五肽重复序列Val-Pro-Gly-XaaGly的组成(其中Xaa可以是除Pro以外的任何一种氨基酸)赋予其温度响应性可逆相变性质。NCBI查询I型和II型人发角蛋白序列,生信分析并模拟构建类人发角蛋白多肽序列HHK。通过融合类弹性蛋白多肽ELP与类人发角蛋白多肽HHK,以期基于ELP的温度响应性可逆相变性质特异性纯化ELP—HHK融合体。采用大肠杆菌*** BL21(DE3)作为异源表达宿主,分子生物学手段酶切酶连,特异性构建p ET-28a(+)-ELP—HHK重组质粒载体,热激转化将其导入大肠杆菌*** BL21(DE3)感受态细胞,并进一步利用抗性筛选标记鉴定阳性菌落。基于T7启动子负调控诱导表达类型,采用IPTG诱导表达ELP—HHK,并尝试可逆相变循环特异性纯化ELP—HHK。结果显示,类人发角蛋白多肽HHK中丰富的自由巯基在融合体发生温度响应性相变过程中,形成了疏水核心分子间二硫键交联,导致即使在还原剂存在的条件下相变依旧不可逆。本论文同时优化了另一重组角蛋白FKeratin外源表达条件,采用Dot Blotting优化诱导温度、诱导时间以及诱导剂的浓度,并在诱导温度为37℃、诱导时间为10 h以及IPTG浓度为0.75 m M的条件下获得最大可溶性重组角蛋白FKeratin表达量。Bradford法检测最终获得的FKeratin浓度为41.97 mg/L发酵液并表征了其基本理化参数。通过初步尝试,以期寻找一套适合重组角蛋白和类角蛋白多肽的静电纺丝工艺。结果表明,当外源蛋白单独存在时,通过静电纺丝方法不能形成成型纤维,但通过与高分子聚合物等混纺,可得到成型良好、表面形态光滑的纤维丝。

关键词：重组角蛋白外源表达分离纯化静电纺丝

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产褐藻胶裂解酶交替单胞菌的发酵优化及alg2951的外源表达

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基因组学与应用生物学 2020年第5期39卷 2088-2095页

作者：李双王碧盈鲍时翔刘敏胡永华孙冬梅黄惠琴黑龙江八一农垦大学生命学院大庆163000 中国热带农业科学院热带生物技术研究所海口571101

褐藻胶裂解酶是制备生物活性寡糖的重要功能酶,在食品、农业、工业等行业中具有重要应用价值。本研究以交替单胞菌属新种HB161718为出发菌株,在单因素实验基础上,通过Box-Behnken设计及响应面法优化获得该菌的最佳产酶培养基:海藻酸钠7.... 详细信息

褐藻胶裂解酶是制备生物活性寡糖的重要功能酶,在食品、农业、工业等行业中具有重要应用价值。本研究以交替单胞菌属新种HB161718为出发菌株,在单因素实验基础上,通过Box-Behnken设计及响应面法优化获得该菌的最佳产酶培养基:海藻酸钠7.23 g/L,蛋白胨7 g/L,NaCl 23.11 g/L,K2HPO40.1 g/L,MgSO40.1 g/L,优化条件下酶活力为(54.28±3.47)U/mL,达到优化前的1.59倍。为进一步提高酶活性,通过分子生物学方法实现了褐藻胶裂解酶alg2951在大肠杆菌中的外源表达,纯化后的酶活性为636 U/mL,达到原始菌株酶活的18.6倍。本研究为褐藻胶裂解酶的工业生产提供了新的来源。

关键词：交替单胞菌褐藻胶裂解酶发酵优化响应面法外源表达

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一种利用酵母表达系统外源表达黑水虻抗菌肽的方法

一种利用酵母表达系统外源表达黑水虻抗菌肽的方法

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作者：姚槐应夏静王存文葛超荣 430074 湖北省武汉市洪山区雄楚大街693号

本发明提供了一种利用酵母表达系统外源表达黑水虻抗菌肽的方法，将含有黑水虻抗菌肽编码核苷酸序列的重组表达载体转入酵母细胞，在黑水虻抗菌肽以分泌的形式表达的条件下培养所述酵母细胞，并自培养基中提取所述黑水虻抗菌肽，所述黑... 详细信息

标准号: CN118086356A

本发明提供了一种利用酵母表达系统外源表达黑水虻抗菌肽的方法，将含有黑水虻抗菌肽编码核苷酸序列的重组表达载体转入酵母细胞，在黑水虻抗菌肽以分泌的形式表达的条件下培养所述酵母细胞，并自培养基中提取所述黑水虻抗菌肽，所述黑水虻抗菌肽为源自黑水虻的抗菌肽Hi5，所述抗菌肽Hi5的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明的方法可以得到高效表达、高浓度的抗菌肽Hi5，且其抑菌效果好。

关键词：抗菌肽黑水虻酵母细胞编码核苷酸序列酵母表达系统重组表达载体氨基酸序列高效表达外源表达形式表达培养基抑菌分泌转入

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一种外源表达丙氨酸消旋酶的重组菌及其应用

一种外源表达丙氨酸消旋酶的重组菌及其应用

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作者：刘磊刘树蓬张大伟马祥亮 231131 安徽省合肥市双凤工业区凤锦路32号

本发明提供了一种外源表达丙氨酸消旋酶的重组菌及其应用，该外源表达丙氨酸消旋酶的重组菌为表达丙氨酸消旋酶的枯草芽孢杆菌，丙氨酸消旋酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；通过构建含丙氨酸消旋酶编码基因的重组表达载体转化至枯草... 详细信息

标准号: CN116410906A

本发明提供了一种外源表达丙氨酸消旋酶的重组菌及其应用，该外源表达丙氨酸消旋酶的重组菌为表达丙氨酸消旋酶的枯草芽孢杆菌，丙氨酸消旋酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；通过构建含丙氨酸消旋酶编码基因的重组表达载体转化至枯草芽孢杆菌中得到，丙氨酸消旋酶编码基因具有如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；该重组菌可用于制备含丙氨酸消旋酶的发酵液。经过诱导表达的重组菌的发酵液或含丙氨酸消旋酶的发酵液可用于催化L‑丙氨酸合成DL‑丙氨酸，L‑丙氨酸转化率高，副产物少，发酵时间短，成本低等，适用于工业化生产。

关键词：丙氨酸消旋酶重组菌丙氨酸发酵液枯草芽孢杆菌编码基因外源表达可用重组表达载体氨基酸序列核苷酸序列诱导表达副产物构建催化制备发酵合成转化应用

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一种在大肠杆菌中外源表达来自季也蒙毕赤酵母的短链脱氢酶及其应用

一种在大肠杆菌中外源表达来自季也蒙毕赤酵母的短链脱氢酶及其应...

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作者：杨其亚张钰张红印 212013 江苏省镇江市京口区学府路301号

本发明属于生物防治技术领域，具体涉及一种在大肠杆菌中外源表达来自季也蒙毕赤酵母的短链脱氢酶及其应用。所述短链脱氢酶是由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；所述短链脱氢酶的编码基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本... 详细信息

标准号: CN116875573A

本发明属于生物防治技术领域，具体涉及一种在大肠杆菌中外源表达来自季也蒙毕赤酵母的短链脱氢酶及其应用。所述短链脱氢酶是由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；所述短链脱氢酶的编码基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明提供了一株外源表达来自季也蒙毕赤酵母的短链脱氢酶基因的重组工程菌，表达了一种能够高效降解展青霉素的短链脱氢酶，其在48h内可以降解MES缓冲液中100％的展青霉素以及苹果汁中60％的展青霉素，具有显著的控制降解作用。同时，本发明的短链脱氢酶编码基因来自季也蒙毕赤酵母，具有安全、高效等特点，因此可用于控制食品中的展青霉素污染，保障相关产品的食用安全性。

关键词：短链脱氢酶展青霉素季也蒙毕赤酵母编码基因降解生物防治技术氨基酸序列核苷酸序列食用安全性重组工程菌大肠杆菌高效降解外源表达苹果汁可用蛋白质基因污染应用安全

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竹花叶病毒介导的外源表达系统及其应用

竹花叶病毒介导的外源表达系统及其应用

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作者：顾连峰王柏杰包明川金炎冬张航晓赵良真 350002 福建省福州市仓山区上下店路15号

本发明提供了一种竹花叶病毒介导的外源表达系统及其应用，属于基因工程技术领域。所述外源基因表达系统的元件包括竹花叶病毒基因组、pCAMBIA1302线性化载体、ORF5亚基因组启动子、RNA沉默抑制子P19、T2A自剪切肽、外源基因和农杆菌GV3... 详细信息

标准号: CN116042701A

本发明提供了一种竹花叶病毒介导的外源表达系统及其应用，属于基因工程技术领域。所述外源基因表达系统的元件包括竹花叶病毒基因组、pCAMBIA1302线性化载体、ORF5亚基因组启动子、RNA沉默抑制子P19、T2A自剪切肽、外源基因和农杆菌GV3101。该过表达体系能够被应用于毛竹和麻竹基因功能研究，可为竹类分子育种提供科学指导。

关键词：花叶病毒亚基因组启动子基因工程技术基因功能研究外源基因表达线性化载体表达体系分子育种科学指导外源表达外源基因剪切基因组农杆菌介导毛竹竹类应用

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