检索结果-内蒙古大学图书馆

食用菌学报 1999年第4期6卷 1-6页

作者：王春晖喻初权张志光湖南省食用菌研究所长沙410006 湖南省生物研究所长沙410081

以平菇dna为供体,草菇原生质体为受体,用PEG,CaCl_2作诱导剂,将平菇dna导入草菇原生质体,选育出V_(157-1)菌株,该菌株在菇型、温型、酶活力及生物转化率上与亲本V_(157)有显著差异。本研究为食用菌育种提供了一条新的途径。

关键词：草菇外源dna片段原生质体导入

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确定转基因生物中外源dna片段的序列、插入位置和边际序列的方法

确定转基因生物中外源DNA片段的序列、插入位置和边际序列的方法

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作者：蒋炳军孙石韩天富吴存祥侯文胜陈莉武婷婷 100081 北京市海淀区中关村南大街12号

本发明公开了确定转基因生物中外源dna片段的序列、插入位置和边际序列的方法。本发明公开的方法包括：对转基因生物的全基因组进行测序，将序列A与转基因生物全基因组序列进行序列比对，确定转基因生物中外源dna片段的序列、插入位置... 详细信息

标准号: CN107630079B

本发明公开了确定转基因生物中外源dna片段的序列、插入位置和边际序列的方法。本发明公开的方法包括：对转基因生物的全基因组进行测序，将序列A与转基因生物全基因组序列进行序列比对，确定转基因生物中外源dna片段的序列、插入位置和边际序列；转基因生物为利用含有外源dna片段的载体处理受体生物得到的转基因生物；序列A为a1)、a2)或a3)：a1)载体的全长序列；a2)来自载体的含有外源dna片段的任一dna片段的序列；a3外源dna片段或其中任一片段的序列。本发明的方法可以突破物种限制，不受构建转基因生物时所用的目的基因的限制，可以更加快速精准地检测转基因插入位置、边际序列甚至拷贝数。

关键词：转基因生物外源dna片段插入位置序列A 源dna 全基因组序列快速精准目的基因全长序列全基因组受体生物序列比对载体处理拷贝数转基因测序构建物种检测

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一种不含外源dna片段的氧化葡萄糖酸杆菌基因工程菌及其制备方法和应用

一种不含外源DNA片段的氧化葡萄糖酸杆菌基因工程菌及其制备方法...

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作者：林建平袁建锋朱力吴绵斌杨立荣 310027 浙江省杭州市西湖区浙大路38号

本发明公开了一种不含外源dna片段的氧化葡萄糖酸杆菌基因工程菌及其制备方法和应用，(1)将GA2DH基因和PDC基因的上、下游片段分别引入重组整合型自杀质粒的多克隆位点，分别得自杀型敲除质粒pΔGOX1231和自杀型敲除质粒pΔGOX1081；(2)... 详细信息

标准号: CN105002131A

本发明公开了一种不含外源dna片段的氧化葡萄糖酸杆菌基因工程菌及其制备方法和应用，(1)将GA2DH基因和PDC基因的上、下游片段分别引入重组整合型自杀质粒的多克隆位点，分别得自杀型敲除质粒pΔGOX1231和自杀型敲除质粒pΔGOX1081；(2)将pΔGOX1231电转化转入宿主菌中，依次经抗生素抗性筛选、无抗培养和蔗糖筛选，然后通过菌落PCR获取GA2DH基因敲除的阳性突变子***？ZJU1；(3)将pΔGOX1081电转化转入经传代后的***？ZJU1中，依次经抗生素抗性筛选、无抗培养和蔗糖筛选，然后通过菌落PCR获取PDC基因敲除的阳性突变子***？ZJU2。GA2DH是氧化葡萄糖酸形成2-KGA的主要酶，而PDC则与催化丙酮酸脱羧，形成乙醛相关，GA2DH和PDC的敲除可以解决5-KGA形成过程中的代谢分流，减少副产物，实现5-KGA的高产。

关键词：敲除抗生素抗性筛选菌落PCR 蔗糖电转化质粒突变氧化葡萄糖酸杆菌传代筛选转入外源dna片段多克隆位点基因工程菌基因敲除葡萄糖酸下游片段制备方法重组整合自杀质粒乙醛自杀丙酮酸副产物宿主菌获取催化脱羧一种代谢培养分流基因引入应用公开减少解决

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确定转基因生物中外源dna片段的序列、插入位置和边际序列的方法

确定转基因生物中外源DNA片段的序列、插入位置和边际序列的方法

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作者：蒋炳军孙石韩天富吴存祥侯文胜陈莉武婷婷 100081 北京市海淀区中关村南大街12号

标准号: CN107630079A

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一种外源片段高效定点定向插入dna病毒基因组的方法

一种外源片段高效定点定向插入DNA病毒基因组的方法

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作者：寸韡宫悦毕研伟李智华李育中张晶晶 650000 云南省昆明市茭菱路935号

本发明属于病毒基因重组技术领域，具体涉及利用非同源重组机制，将外源dna片段定点、定向地高效插入特定大型dna病毒基因组。本发明包括下列步骤：1)设计并构建针对dna病毒基因组特定切割位点的CRISPR‑Cas9(clustered regularly inters... 详细信息

标准号: CN108913684A

本发明属于病毒基因重组技术领域，具体涉及利用非同源重组机制，将外源dna片段定点、定向地高效插入特定大型dna病毒基因组。本发明包括下列步骤：1)设计并构建针对dna病毒基因组特定切割位点的CRISPR‑Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats and CRISPR‑associated protein 9)系统；2)设计并构建携带一个及以上相同切割位点的外源基因供体；3)将CRISPR‑Cas9系统表达载体和外源基因供体按照一定比例和顺序导入特定细胞；4)经过一段时间，根据病毒特性，选择合适的感染时间点和感染复数，将病毒感染细胞；5)选择优化的时间点收集病毒感染后产生的子代重组病毒；6)分离、筛选和鉴定目标重组子代dna病毒。利用该方法能够显著提高外源基因定点定向插入dna病毒基因组的重组效率，进而缩短重组病毒的构建和筛选时间。

关键词：外源基因基因组构建子代切割位点重组病毒时间点供体筛选病毒感染细胞病毒基因重组外源dna片段非同源重组表达载体病毒感染病毒特性感染复数鉴定目标选择优化细胞携带感染

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一种利用葡萄愈伤组织瞬时转化外源基因的方法

一种利用葡萄愈伤组织瞬时转化外源基因的方法

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作者：徐伟荣吴洁萍张宁波郝新意 750021 宁夏回族自治区银川市西夏区贺兰山西路489号

本发明公开了一种利用葡萄愈伤组织瞬时转化外源基因的方法，属于生物技术领域。本发明首先将葡萄叶片脱分化，诱导其形成愈伤组织，然后以携带GUS基因的农杆菌，利用农杆菌侵染法，在超声处理和真空处理相结合的方式下实现外源dna片段... 详细信息

标准号: CN115786393A

本发明公开了一种利用葡萄愈伤组织瞬时转化外源基因的方法，属于生物技术领域。本发明首先将葡萄叶片脱分化，诱导其形成愈伤组织，然后以携带GUS基因的农杆菌，利用农杆菌侵染法，在超声处理和真空处理相结合的方式下实现外源dna片段在葡萄愈伤组织中的瞬时表达。本发明方法可以将任何基因瞬时转化至葡萄愈伤组织中，时间短，效率高，能在3‑4周时间内诱导出愈伤组织，诱导率可以达到100％，并且在有足够愈伤组织的情况下，在2天的时间就能获得瞬时转化的愈伤组织。

关键词：愈伤组织葡萄诱导转化生物技术领域外源dna片段农杆菌侵染超声处理葡萄叶片瞬时表达外源基因真空处理农杆菌脱分化诱导率携带基因

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转基因植物中载体骨架序列的安全性隐患及解决方案

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中国生物工程杂志 2004年第5期24卷 38-42页

作者：王利华苏乔包永明大连理工大学生物科学与工程系大连116023

载体骨架序列等非目的基因外源dna片段整合入植物染色体中有可能引发的安全性问题已成为近年来植物基因工程研究的热点之一。总结了载体骨架序列整合进植物染色体的现象、由此引发的安全性隐患和机理 ,以及解决该问题的研究思路和方法。

关键词：转基因植物安全性载体骨架序列植物基因工程外源dna片段

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一种长喙壳菌外源基因转化的方法

一种长喙壳菌外源基因转化的方法

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作者：李健强张治萍李迎宾罗来鑫 100193 北京市海淀区圆明园西路2号

本发明公开了属于生物技术领域的一种长喙壳菌外源基因转化的方法。本发明的方法通过将长喙壳菌的原生质体与适量的含有筛选标记的外源dna片段和含有向导RNA(SgRNA)的质粒载体进行混合，然后利用PEG介导的原生质体的转化及转化子筛选，... 详细信息

标准号: CN110714030A

本发明公开了属于生物技术领域的一种长喙壳菌外源基因转化的方法。本发明的方法通过将长喙壳菌的原生质体与适量的含有筛选标记的外源dna片段和含有向导RNA(SgRNA)的质粒载体进行混合，然后利用PEG介导的原生质体的转化及转化子筛选，从而将含有筛选标记的外源dna片段转入长喙壳菌基因组中，实现了PEG介导的长喙壳菌原生质体转化，建立了一套完整的遗传转化、筛选方法，易获得表达潮霉素抗性蛋白且稳定遗传的转化菌株，转化效率较高。

关键词：长喙壳菌外源dna片段筛选标记原生质体介导生物技术领域原生质体转化潮霉素抗性转化子筛选外源基因稳定遗传遗传转化质粒载体转化菌株转化效率基因组转化蛋白筛选转入

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一种PEG介导的腐皮镰刀菌原生质体遗传转化的方法

一种PEG介导的腐皮镰刀菌原生质体遗传转化的方法

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作者：梅鹏颖朱致豫李隆云刘群栋宋旭红崔广林丁刚 404100 重庆市南岸区黄桷垭南山路34号

本发明公开了一种PEG介导的腐皮镰刀菌原生质体遗传转化的方法，属于生物技术领域。本发明利用PEG介导的原生质体转化方法，通过腐皮镰刀菌原生质体的制备和转化以及转化子的筛选，将含有筛选标记的外源dna片段转化入腐皮镰刀菌基因组... 详细信息

标准号: CN116004699A

本发明公开了一种PEG介导的腐皮镰刀菌原生质体遗传转化的方法，属于生物技术领域。本发明利用PEG介导的原生质体转化方法，通过腐皮镰刀菌原生质体的制备和转化以及转化子的筛选，将含有筛选标记的外源dna片段转化入腐皮镰刀菌基因组中。本发明实现了PEG介导的腐皮镰刀菌原生质体转化，建立了一套完整的遗传转化、筛选方法，获得大量高强度表达潮霉素抗性蛋白和绿色荧光蛋白且稳定遗传的转化菌株，本发明的转化效率可达9000个转化子/mg dna。

关键词：腐皮镰刀菌介导原生质体转化转化子原生质体遗传转化绿色荧光蛋白生物技术领域外源dna片段筛选潮霉素抗性筛选标记稳定遗传遗传转化原生质体转化菌株转化效率基因组制备转化蛋白

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一种海洋放线菌基因遗传操作系统的构建方法

一种海洋放线菌基因遗传操作系统的构建方法

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作者：马艳玲陈婉容刑福炜李锐 528000 广东省佛山市禅城区江湾一路18号

本发明公开一种海洋放线菌基因遗传操作系统的构建方法，其包括步骤：将已灭菌的SFMS培养基融化，温度降至40~50℃，在SFMS培养基中加入适量的抗生素，倒平板，将Salinispora？arenlocola？CNS-205孢子悬液涂布平板，25~30℃培养4~5d；... 详细信息

标准号: CN105255936A

本发明公开一种海洋放线菌基因遗传操作系统的构建方法，其包括步骤：将已灭菌的SFMS培养基融化，温度降至40~50℃，在SFMS培养基中加入适量的抗生素，倒平板，将Salinispora？arenlocola？CNS-205孢子悬液涂布平板，25~30℃培养4~5d；将整合型质粒通过CaCl₂法导入接合转移供体菌中，借助于供体菌上tra基因，所述整合型质粒以接合转移方式从供体菌导入到步骤A得到的Salinispora？arenlocola？CNS-205孢子中进行整合。通过上述技术方案，实现了向Salinispora？arenlocola？CNS-205导入外源dna片段的可能性。

关键词：供体菌导入接合转移培养基整合型质粒外源dna片段海洋放线菌构建方法基因遗传涂布平板孢子悬液温度降灭菌孢子一种整合操作系统适量抗生素融化公开加入培养进行

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