检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：梁伟四川农业大学

学位级别：硕士

多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）是一种重要的人畜共患致病菌,不同血清型的Pm可引起猪肺疫、禽霍乱等多种疾病,给世界各国的养殖业造成巨大的经济损失。天然的多杀性巴氏杆菌毒素（Pasteurella multocida toxin,PMT）是由to... 详细信息

多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）是一种重要的人畜共患致病菌,不同血清型的Pm可引起猪肺疫、禽霍乱等多种疾病,给世界各国的养殖业造成巨大的经济损失。天然的多杀性巴氏杆菌毒素（Pasteurella multocida toxin,PMT）是由tox A基因（3858 bp）编码的分子量为146 k Da的蛋白,具有极强的毒性,免疫原性弱。本研究旨在聚焦PMT多表位重组抗原（rPMT）的构建与可溶性表达,探究rPMT对Pm的免疫保护作用,为Pm亚单位疫苗研发提供新思路和理论参考。一是构建并合成了多表位重组抗原基因rpmt（1974 bp）。运用DNA Star 7.1、免疫表位数据库（IEDB）等生物信息学软件对PMT的二级结构、抗原性、B细胞表位、T细胞表位等进行分析,依据综合得分筛选出18个B细胞和13个T细胞的优势表位,构建了70 k Da的多表位重组抗原（rPMT）,而后将rPMT的氨基酸翻译为核苷酸序列并进行密码子优化,得到了rpmt基因（1974 bp）,加入酶切位点后合成、连接至p ET-32a（+）质粒。二是成功表达了含GST标签的可溶性抗原rPMT（97 k Da）。以p ET-32a（+）-rpmt质粒为模板,将rpmt基因克隆至pGEX-4T-1质粒（含GST标签）,后转入大肠杆菌感受态BL21（DE3）,在18℃、180 r/min的条件下诱导表达24 h,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定,成功表达出97 k Da的可溶性抗原rPMT。三是证实了rPMT在小鼠模型上对Pm具有一定的免疫保护作用。将rPMT与佐剂MONTANIDETM Gel 02 ST按比例（10:1）混合,对小鼠进行三次免疫,后测定IgG抗体效价、脾淋巴细胞增殖率、血清中细胞因子含量和攻毒保护率等指标。结果表明:小鼠血清中IgG抗体效价显著增高,抗体水平呈现逐渐增长的规律,说明体液免疫反应被显著激活;脾淋巴细胞显著增殖,增殖率为39.42%,说明细胞细胞应答被激活;小鼠血清中细胞因子IL-12和IFN-γ均显著上调,但IL-4无显著变化,初步表明rPMT能引起Th1型的免疫反应,即增强细胞免疫反应;攻毒试验中rPMT能为感染Pm的小鼠提供57%（8/14）的免疫保护力,说明rPMT对Pm具有一定的免疫保护作用;肺脏组织病理学和免疫组织化学分析说明,rPMT能明显减轻小鼠肺脏病变程度和中性粒细胞浸润程度。

关键词：多杀性巴氏杆菌 PMT 多表位重组抗原小鼠免疫保护

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

多表位重组抗原的研制及在日本血吸虫病诊断和免疫预防上的初步应用

多表位重组抗原的研制及在日本血吸虫病诊断和免疫预防上的初步应...

引用

作者：吕超上海师范大学

学位级别：硕士

日本血吸虫病(schistosomiasis)仍然是我国重要的公共卫生问题之一。病牛是我国血吸虫病最重要的传染源,在某些流行区内羊在血吸虫病传播中的作用也不可忽视,有效控制牛、羊血吸虫病对我国早日阻断血吸虫病传播将有重大的意义。诊断是... 详细信息

日本血吸虫病(schistosomiasis)仍然是我国重要的公共卫生问题之一。病牛是我国血吸虫病最重要的传染源,在某些流行区内羊在血吸虫病传播中的作用也不可忽视,有效控制牛、羊血吸虫病对我国早日阻断血吸虫病传播将有重大的意义。诊断是血吸虫病防控中的中心环节。在现已建立的各种血清学诊断技术中,血吸虫虫卵可溶性抗原SEA是最常用的诊断抗原,但以SEA作为诊断抗原,往往特异性较差,交叉反应高,不能区分现症感染和既往感染以及不能作为疗效考核的诊断抗原。一些血吸虫重组抗原已被用作诊断抗原或疫苗候选分子,评估其应用前景,但大多数重组抗原获得的敏感性都低于SEA,诱导的保护效果都不够高或不稳定。多表位重组抗原含有多个抗原表位有可能增强其抗原性和免疫原性,把它们作为诊断抗原或疫苗候选分子,有可能提高诊断方法的敏感性和疫苗的免疫保护效果。基于此,本文开展了以下几个方面的研究:1.候选抗原SjPGM和SjRAD23细胞表位的分析及单分子和多表位重组抗原的构建应用BepiPred 1.0、T-epitope Designer、PredictProtein、IEDB Analysis等在线预测软件预测候选抗原SjPGM和SjRAD23的B细胞和T细胞表位及候选抗原肽段的抗原性、可接近性等,综合各个预测软件的分析结果,筛选出表位富集肽段三段,包括从SjPGM挑选出的BSjPGM(aa 85-166);Sj RAD23挑选出的BSj RAD23-1(aa 46-123)和BSjRAD23-2(aa 166-230)。另Sj23抗原的大亲水区(LHD-Sj23)也被引入作为候选表位富集肽段。设计特异性引物,共构建了9种重组原核表达质粒,其中包括4种单分子重组表达质粒:BSjPGM/p ET-28a(+)、BSj RAD23-1/pET-28a(+)、BSjRAD23-2/p ET-28a(+)、BSj23/p ET-32a(+)和5种多表位重组表达质粒:BSjPGM-BSj23/p ET-28a(+)、BSjPGM-BSj RAD23-1/pET-28a(+)、BSjPGM-BSjRAD23-1-BSj23/pET-28a(+)、BSj RAD23-2-BSjPGM-BSj23/p ET-28a(+)和BSj RAD23-2-BSjPGM/pET-28a(+)。除BSjPGM/p ET-28a(+)、BSjRAD23-2/p ET-28a(+)、BSj RAD23-2-BSjPGM/pET-28a(+)外,其余6种重组表达质粒均成功在大肠杆菌中表达,并经纯化获得条带单一的目的蛋白。2.单分子/多表位重组抗原用于诊断山羊血吸虫病的初步研究以重组抗原rSjPGM和rSj RAD23及新构建的6种表位重组蛋白作为诊断抗原,以sea作为参照抗原,应用间接elisa方法检测山羊日本血吸虫病,共检测91份山羊感染日本血吸虫血清,44份健康山羊血清,12份捻转血矛线虫感染血清及37份东毕吸虫感染血清。结果显示,除rbsjpgm-bsjrad23-1外,其余3种多表位重组抗原获得的敏感性都高于4种单分子重组抗原(rsjrad23,rsjpgm,rbsjrad23-1,rbsj23),其中多表位重组抗原rbsjpgm-bsjrad23-1-bsj23获得最高的敏感性(97.8%,89/91),且保持良好的特异性(100%,44/44)和较低的交叉反应性(捻转血矛线虫:8.33%,1/12;东毕吸虫13.51%,5/37)。而以sea作为诊断抗原,其敏感性为100%(91/91),但特异性仅为75%(33/44),且与捻转血矛线虫和东毕吸虫分别有25%(3/12)和83.78%(31/37)的交叉反应。本研究结果显示,多表位重组抗原的研制与应用有可能提高重组抗原检测山羊血吸虫病的敏感性,多表位重组抗原rbsjpgm-bsjrad23-1-bsj23有可能是一种诊断山羊血吸虫病的优选抗原。3.单分子/多表位重组抗原用于诊断水牛血吸虫病的效果评估将在诊断山羊血吸虫病中显示出较好效果的5种重组表位抗原,包括2种单分子表位抗原(rbsjrad23-1,rbsj23)和3种多表位重组抗原(rbsjpgm-bsj23、rbsjpgm-bsjrad23-1-bsj23、rbsjrad23-2-bsjpgm-bsj23),用于诊断水牛血吸虫病,同样以sea作为参照抗原。共检测114份日本血吸虫感染水牛血清,92份健康水牛血清,14份前后盘吸虫感染血清。elisa结果显示,5种重组表位抗原中rbsjpgm-bsjrad23-1-bsj23获得最高的敏感性(95.61%,109/114),其特异性和交叉反应率分别为97.83%(90/92)和7.14(2/14)。而以sea作为诊断抗原,获得的

关键词：日本血吸虫多表位重组抗原血清学诊断 ELISA 免疫保护

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

细粒棘球蚴抗原B亚单位多表位重组抗原的血清学诊断评价

细粒棘球蚴抗原B亚单位多表位重组抗原的血清学诊断评价

引用

2013年全国寄生虫学与热带医学学术研讨会

作者：江莉冯正张耀光王真瑜上海市疾病预防控制中心上海市预防医学研究院中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心

目的对6个细粒棘球蚴抗原B(AgB)亚单位多表位重组抗原和AgB亚单位抗原进行血清学平行比较分析,评价多表位抗原的诊断价值。方法在多表位重组抗原MEA-26中插入一段Linker序列,成为MEA-49抗原,用I-TASSER在线服务器模拟分析蛋白质三维结构... 详细信息

目的对6个细粒棘球蚴抗原B(AgB)亚单位多表位重组抗原和AgB亚单位抗原进行血清学平行比较分析,评价多表位抗原的诊断价值。方法在多表位重组抗原MEA-26中插入一段Linker序列,成为MEA-49抗原,用I-TASSER在线服务器模拟分析蛋白质三维结构,比较2个目标序列相同但三维结构不同的重组抗原在样本检测中反应性的差异。用间接ELISA方法对6个多表位抗原(MEA-8、MEA-20、MEA-26、MEA-36、MEA-49和MEA-52)、3个亚单位抗原(AgB1、AgB2和AgB4)和2个对照抗原(Trx和Linker)平行检测232份血清样本(细粒棘球蚴病患者血清112份、多房棘球蚴病患者血清35份、囊尾蚴病患者血清43份和健康人血清42份)进行比较,并用ROC曲线分析不同抗原对细粒棘球蚴病患者血清的诊断价值。结果三维模型预测结果显示,MEA-26和MEA-49的表位区域结构明显不同,MEA-26的表位区域相互靠近,呈平行排列,MEA-49表位区域相互分离形成独立的结构域。MEA-49检测细粒棘球蚴病的反应性(2.88±2.02)、敏感性(92%)和诊断效率(89%)等均高于MEA-26(2.54±2.02,78%,82%)。ELISA结果显示,MEA-20(2.24±1.31)、MEA-26(2.54±2.02)、MEA-36(2.44±1.51)、MEA-49(2.88±2.02)和MEA-52(2.50±1.37)等5个抗原检测细粒棘球蚴病患者血清的反应性均高于AgB1(2.15±1.26),其中,MEA-49和MEA-52抗原与AgB1的统计学差异极显著(P<0.01);MEA-8(1.62±1.04)1个抗原的反应性低于AgB1,但差异无统计学意义(P>0.05)。多表位抗原检测AE患者血清的反应性与AgB1抗原的比较,差异无统计学意义(P>0.05)。MEA-52检测囊尾蚴病患者血清(1.27±0.70)的反应性显著高于AgB1(0.95±0.13)(P<0.01)。6个多表位抗原检测健康人血清的反应性与AgB1抗原比较,除MEA-8外差异均无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线结果显示,3个亚单位抗原检测细粒棘球蚴病患者血清的敏感性以AgB1最高,为77%,MEA-49(92%)、MEA-36(92%)、MEA-52(87%)和MEA-26(78%)等4个多表位抗原的检测敏感性均高于AgB1。结论多表位抗原的总体反应性优于亚单位抗原,MEA-49对不同患者血清的反应性均强于目标序列相同但三维结构不同的MEA-26。

关键词：细粒棘球蚴 AgB抗原亚单位多表位重组抗原血清学分析

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

细粒棘球蚴抗原B亚单位多表位重组抗原的血清学诊断评价

引用

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2013年第6期31卷 438-442页

作者：江莉冯正张耀光王真瑜上海市疾病预防控制中心上海市预防医学研究院上海200336 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织疟疾血吸虫病和丝虫病合作中心上海200025

目的对6个细粒棘球蚴抗原B(AgB)亚单位多表位重组抗原和3个AgB亚单位抗原进行血清学平行比较分析,评价多表位抗原的诊断价值。方法在多表位重组抗原MEA-26中插入一段Linker序列,成为MEA-49抗原。用I-TASSER在线服务器模拟分析蛋白质三... 详细信息

目的对6个细粒棘球蚴抗原B(AgB)亚单位多表位重组抗原和3个AgB亚单位抗原进行血清学平行比较分析,评价多表位抗原的诊断价值。方法在多表位重组抗原MEA-26中插入一段Linker序列,成为MEA-49抗原。用I-TASSER在线服务器模拟分析蛋白质三维结构,比较2个目标序列相同但三维结构不同的重组抗原(MEA-26和MEA-49)在样品检测中反应性的差异。用间接ELISA方法对6个多表位抗原(MEA-8、MEA-20、MEA-26、MEA-36、MEA-49和MEA-52)、3个亚单位抗原(AgB1、AgB2和AgB4)和2个对照抗原(Trx和Linker)平行检测232份血清样品(细粒棘球蚴病患者血清112份、多房棘球蚴病患者血清35份、囊尾蚴病患者血清43份和健康人血清42份),并用ROC曲线分析不同抗原对细粒棘球蚴病患者血清的诊断价值。结果三维模型预测结果显示,MEA-26的表位区域相互靠近,呈平行排列;MEA-49表位区域相互分离形成独立的结构域。用MEA-49抗原检测细粒棘球蚴病患者血清的反应性(2.88±2.02)、敏感性(92%)和诊断效率(89%)等均高于MEA-26抗原(2.54±2.02,78%,82%)。ELISA结果显示,MEA-20(2.24±1.31)、MEA-26(2.54±2.02)、MEA-36(2.44±1.51)、MEA-49(2.88±2.02)和MEA-52(2.50±1.37)等5个抗原检测细粒棘球蚴病患者血清的反应性均高于AgB1抗原(2.15±1.26)。多表位抗原检测多房棘球蚴病患者血清的反应性与AgB1抗原的比较,差异无统计学意义(P>0.05)。MEA-52抗原检测囊尾蚴病患者血清(1.27±0.70)的反应性显著高于AgB1抗原(0.95±0.13)(P<0.01)。6个多表位抗原检测健康人血清的反应性仅MEA-8抗原的反应性(1.04±0.15)与AgB1抗原(0.89±0.07)差异有统计学意义(P<0.01)。ROC曲线结果显示,3个亚单位抗原检测细粒棘球蚴病患者血清的敏感性以AgB1抗原最高,为77%;MEA-49(92%)、MEA-36(92%)、MEA-52(87%)和MEA-26(78%)等4个多表位抗原的检测敏感性均高于AgB1抗原。结论多表位抗原的总体反应性优于亚单位抗原,MEA-49抗原对不同患者血清的反应性均强于目标序列相同但三维结构不同的MEA-26抗原。

关键词：细粒棘球蚴 AgB抗原亚单位多表位重组抗原血清学分析

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

细粒棘球蚴抗原B亚单位多表位重组抗原的血清学分析

细粒棘球蚴抗原B亚单位多表位重组抗原的血清学分析

引用

上海市寄生虫学会2012学术年会

作者：江莉冯正张耀光王真瑜上海市疾病预防控制中心/上海市预防医学研究院上海200336 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所上海200025

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：