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范例一：(K=图书馆学 OR K=情报学) AND A=范并思 AND Y=1982-2016
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文献类型

3 篇 学位论文

馆藏范围

3 篇 电子文献
0 种 纸本馆藏

日期分布

学科分类号

3 篇 理学
- 3 篇 生物学
3 篇 工学
- 3 篇 生物工程
3 篇 农学
- 3 篇 作物学

主题

3 篇 多角体融合表达
2 篇 rnai
2 篇 膜蛋白
1 篇 降血糖活性
1 篇 bac-to-bac系统
1 篇 家蚕杆状病毒表达...
1 篇 hw基因
1 篇 bbx-b4
1 篇 表达分析
1 篇 家蚕
1 篇 蚕素
1 篇 bmsnmp

机构

3 篇 浙江理工大学

作者

1 篇 黄崇政
1 篇 陈维芹
1 篇 张雅凝

语言

3 篇 中文

检索条件"主题词=多角体融合表达"

共 3 条记录，以下是1-10 订阅

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详细简洁

排序：

家蚕感觉神经元膜蛋白基因BmSNMP的多角体融合表达、纯化与表达分析

家蚕感觉神经元膜蛋白基因BmSNMP的多角体融合表达、纯化与表达分...

引用

作者：黄崇政浙江理工大学

学位级别：硕士

昆虫在处理来自环境的化学信号过程中,嗅觉起着非常重要的作用,其对昆虫的栖息地的选择、觅食、信息传递以及寻找配偶、产卵场所、寄主和猎物等行为都具有重要的作用。感觉神经元膜蛋白(sensory neuron membrane protein, SNMP)是参与... 详细信息

昆虫在处理来自环境的化学信号过程中,嗅觉起着非常重要的作用,其对昆虫的栖息地的选择、觅食、信息传递以及寻找配偶、产卵场所、寄主和猎物等行为都具有重要的作用。感觉神经元膜蛋白(sensory neuron membrane protein, SNMP)是参与昆虫气味识别的重要蛋白之一,在人类基因中属于CD36基因家族成员,是CD36家族中唯一在神经元中发现的基因。家蚕特别是其成虫的嗅觉是研究昆虫化学通讯的理想模型,一直备受关注。我们从本实验室构建的家蚕蛹cDNA文库中筛选到一条序列。生物信息学分析发现此序列含一个1569 bp的开放阅读框(open reading frame, ORF),编码一个由522个氨基酸残基组成的蛋白,预测分子量为56.76 kD,等电点为8.58。由于其所编码的蛋白含有一个完整的CD36保守结构域,且与其他物种中的SNMP蛋白有很高的同源性,故将该基因命名为BmSNMP。GenBank登录号：NM 001043721。通过PCR扩增获得的BmSNMP基因,构建原核表达载体pET-32a(+)-polh-tev-BmSNMP,将构建的重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株感受态细胞,经IPTG诱导,高效表达重组融合蛋白。利用多角体蛋白的性质通过pH值的调节和离心及阴离子交换层析纯化蛋白Polh-tev-BmSNMP,纯化的蛋白用TEV酶切。构建转座载体pFastBac HTb-polh-BmSNMP,将polh-BmSNMP基因转座到杆状病毒基因组(Bacmid)上,构建Bacmid-polh-BmSNMP,通过脂质体将Bacmid-polh-BmSNMP转染家蚕BmN细胞获得重组病毒vBmpolh-BmSNMP。重组病毒感染正常家蚕细胞,Western blotting鉴定结果显示多角体融合的BmSNMP蛋白在家蚕细胞中获得成功表达。同理构建重组病毒vBmpolh-BmSNMP-EGFP,感染家蚕细胞后荧光显微镜下观察细胞体内的荧光,发现绿色荧光都在细胞膜附近,表明BmSNMP在真核细胞中表达且为膜蛋白。利用荧光定量PCR技术对BmSNMP基因在家蚕五龄幼虫各组织中的转录情况进行分析。荧光定量PCR结果显示,在五龄幼虫不同组织中BmSNMP基因的转录差异较大,从高到低依次为脂肪体、气门、丝腺、马氏管、中肠、性腺、头部和表皮。上述研究将为进一步研究BmSNMP蛋白的功能打下基础。此外,体外转录dsRNA,脂质体法转染BmN细胞,以MTT法检测干扰前后细胞活力,RNA干扰后的细胞活力上升;将细胞用PI染色后流式细胞仪分析,与对照组相比,干扰后S期细胞数量减少,说明polh融合的BmSNMP基因影响细胞周期,可能与细胞周期的调控有关。

关键词：家蚕膜蛋白 BmSNMP 多角体融合表达表达分析 RNAi

来源：评论

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蚕素Bombyxin B4（Bbx-b4）基因的表达及其产物活性研究

蚕素Bombyxin B4（Bbx-b4）基因的表达及其产物活性研究

引用

作者：陈维芹浙江理工大学

学位级别：硕士

蚕素（bombyx mori bombyxin）是一种属于胰岛素家族的5kD的家蚕脑组织分泌肽，是由A-链和B-链组成的异源二聚体，氨基酸序列与脊椎动物胰岛素有较高的同源性。虽然蚕素的具体功能现在尚不完全清楚，其在家蚕中的一些基本功能可能像生... 详细信息

蚕素（bombyx mori bombyxin）是一种属于胰岛素家族的5kD的家蚕脑组织分泌肽，是由A-链和B-链组成的异源二聚体，氨基酸序列与脊椎动物胰岛素有较高的同源性。虽然蚕素的具体功能现在尚不完全清楚，其在家蚕中的一些基本功能可能像生长因子一样，对各个发育时期和各个组织的细胞生长、增殖和分化起作用，可能通过调节细胞增殖和分化与卵子发生和胚胎发生的调控有关。另外，蚕素的含量增长与血淋巴中葡萄糖滴度增加有很大相关性，所以可能与体内碳水化合物的代谢有关。所以大量制备蚕素蛋白对其功能研究有重要意义。本研究利用原核表达系统和家蚕杆状病毒载体表达系统分别在大肠杆菌和家蚕中表达蚕素蛋白，并对家蚕表达的蚕素进行了降血糖作用研究。首先，通过融合家蚕杆状病毒病毒多角体基因(polyhedrin,Polh)，本研究将Bbx-b4基因在大肠杆菌中高效表达，利用多角体蛋白的碱可溶性分离纯化重组蚕素作为抗原免疫制备了多克隆抗体，同时，将Bbx-b4克隆到pFastBac1中构建重组载体，利用转座重组构建了重组BmNPV。重组病毒，分别在大肠杆菌和家蚕细胞BmN中表达。原核表达融合蛋白利用多角体特点，通过调节缓冲液pH变化溶解包涵体和镍柱亲和层析的方法进行蛋白纯化，将纯化的重组蛋白免疫新西兰雄兔制备多克隆抗体；将成功构建的pFastBac1-Bbx-b4转化感受态细胞*** DH10Bac，经蓝白斑筛选和PCR检测方法证明Bacmid中含有目的片段，脂质体法将重组Bacmid转染家蚕细胞，获得完整的重组杆状病毒，重组病毒在BmN细胞中扩增，经三代传代后，收集重组病毒液，接种新鲜蚕蛹，Western blotting检测结果表明在发病家蚕细胞BmN和发病蚕蛹中以蚕素原的形式存在。同时流式细胞检测表明Bbx-b4蚕素原会加速BmN细胞进入S期，具有促进细胞生长的能力。小鼠降血糖实验表明蚕蛹中表达的Bbx-b4蚕素原较正常蚕蛹具有一定的降血糖作用。本实验结果提示蚕素可能与体内碳水化合物的代谢有关，为其以后的应用研究奠定了基础。

关键词：蚕素 Bbx-b4 多角体融合表达家蚕杆状病毒表达系统降血糖活性

来源：评论

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家蚕中一个新的膜蛋白基因HW的融合表达和纯化

家蚕中一个新的膜蛋白基因HW的融合表达和纯化

引用

作者：张雅凝浙江理工大学

学位级别：硕士

从实验室的膜蛋白库中筛选出一个膜蛋白,通过分析预测这个蛋白有三个跨膜区,为一个未知功能的膜蛋白,将其命名为HW。生物信息学分析发现,HW基因cDNA全长1230 bp,开放阅读框（ORF）大小为294 bp,编码97个氨基酸残基,预测分子量大小约为10... 详细信息

从实验室的膜蛋白库中筛选出一个膜蛋白,通过分析预测这个蛋白有三个跨膜区,为一个未知功能的膜蛋白,将其命名为HW。生物信息学分析发现,HW基因cDNA全长1230 bp,开放阅读框（ORF）大小为294 bp,编码97个氨基酸残基,预测分子量大小约为10.93 kD。基于膜蛋白难表达的问题,本课题利用多角体融合表达分别在大肠杆菌和家蚕细胞中表达该膜蛋白基因。根据HW基因cDNA序列的ORF框设计一对特异引物,PCR扩增出目的基因,克隆到本实验室构建的融合多角体基因的载体pBacPAK8-Ph获得重组载体pBacPAK8-Ph-HW,该载体可以将HW基因与多角体基因融合,两者之间插入TEV酶基因序列,便于HW膜蛋白与多角体蛋白的分离。双酶切pBacPAK8-Ph-HW载体获得Ph-HW片段,克隆到pET-28a（+）相同酶切位点获得重组原核表达载体pET-28a（+）-Ph-HW,将构建的重组表达载体转化BL21（DE3）E. coli感受态细胞,经PCR、BamHⅠ/NotⅠ酶切鉴定以及测序分析证实重组正确。采用终浓度为1 mM的IPTG、28℃条件下诱导重组蛋白表达,裂解菌体SDS-PAGE分析发现有大小约40 kD的目的条带。利用亲和层析方法纯化融合蛋白后,TEV酶酶切得到膜蛋白HW。家蚕细胞表达该目的蛋白,根据Bac-to-Bac系统,将上述获得的HW与多角体融合基因Ph-HW片段插入到pFastBacTMHTB载体构建重组转移载体pFastBac-Ph-HW,将pFastBac-Ph-HW重组载体转化E. coli DH10BacTM感受态细胞。重组pFastBac-Ph-HW载体与穿梭载体bacmid发生同源重组,获得重组bacmid杆粒。重组成功的bacmid转染家蚕细胞,收集重组杆状病毒继续感染家蚕细胞,三次感染细胞后的重组杆状病毒用来大量感染家蚕正常细胞,收集感染的细胞进行SDS-PAGE和Western blot分析,结果表明多角体融合的家蚕HW基因在家蚕细胞中成功表达。家蚕细胞中HW基因的RNAi实验表明该基因对家蚕细胞的存活有一定的作用,在纯化基础上探究HW蛋白的结晶,初步得到家蚕膜蛋白HW的粗结晶,这些为进一步探究HW膜蛋白的结构和功能奠定了基础。

关键词：膜蛋白 HW基因多角体融合表达 Bac-to-Bac系统 RNAi

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