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幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位与大肠杆菌不耐热肠毒素b亚单位融合蛋白表达的研究

免疫学杂志 2003年第1期19卷 41-45页

作者：冉向阳邹全明毛旭虎王缚鲲第三军医大学临床微生物学及免疫学教研室重庆400038

目的　获得大肠杆菌不耐热肠毒素b亚单位 (LTb)与幽门螺杆菌保护性抗原热休克蛋白A亚单位 (HspA)的融合蛋白。方法　PCR扩增ltb和hspA基因 ,依次构建至表达载体pIM 1,转化大肠杆菌 ,SDS PAGE、免疫印迹分析目的蛋白表达情况。采用GM1 EL... 详细信息

目的　获得大肠杆菌不耐热肠毒素b亚单位 (LTb)与幽门螺杆菌保护性抗原热休克蛋白A亚单位 (HspA)的融合蛋白。方法　PCR扩增ltb和hspA基因 ,依次构建至表达载体pIM 1,转化大肠杆菌 ,SDS PAGE、免疫印迹分析目的蛋白表达情况。采用GM1 ELISA和D(+) 半乳糖亲和层析方法检测重组LTb HspA融合蛋白LTb组分与GM1 神经节苷脂结合活性。结果　重组LTb HspA融合蛋白表达量最高可达细菌总蛋白的 2 5 %。免疫印迹检测结果证实为重组LTb HspA融合蛋白。GM1ELISA和D(+) 半乳糖亲和层析方法检测结果证实重组LTb HspA融合蛋白具有与GM1 神经节苷脂结合的活性。结论　LTb HspA融合蛋白的表达研究。

关键词：幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位大肠杆菌不耐热毒素b亚单位融合蛋白重组表达

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幽门螺杆菌双亚单位表位融合蛋白的构建、表达及鉴定

引用

免疫学杂志 2007年第2期23卷 121-125,130页

作者：周维英吴超石云张卫军邹全明第三军医大学临床微生物学及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038

目的构建和表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)黏附素(HpaA)和尿素酶b亚单位(Ureb)表位串联体(HUepi)与大肠杆菌不耐热肠毒素b亚单位(LTb)融合蛋白(HUepi-LTb),并对其进行纯化和鉴定。方法采用PCR技术分别扩增HpaA-Ureb表位多肽编... 详细信息

目的构建和表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)黏附素(HpaA)和尿素酶b亚单位(Ureb)表位串联体(HUepi)与大肠杆菌不耐热肠毒素b亚单位(LTb)融合蛋白(HUepi-LTb),并对其进行纯化和鉴定。方法采用PCR技术分别扩增HpaA-Ureb表位多肽编码基因HUepi和LTb的编码基因Ltb,重叠延伸PCR将2段基因拼接起来,T-A克隆后构建融合基因表达质粒pET-22b(+)-HUepi-Ltb,经酶切鉴定后转化***21(DE3),IPTG诱导表达,采用阳离子和阴离子交换层析进行纯化,PAGE检测、N端测序和westernblotting、ELISA检测、GM1活性检测。结果成功构建表位串联体(HUepi)与LTb融合蛋白的高效表达质粒pET-22b(+)-HUepi-Ltb,重组工程菌pET-22b(+)-HUepi-Ltb/bL21经IPTG诱导目的蛋白表达率约28%,PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约20.7×103,破菌后电泳证实目的蛋白以包涵体形式表达,纯化后蛋白纯度达97%,免疫学鉴定该融合蛋白与兔抗LTb抗血清可以发生特异性的结合。结论HpHpaA-Ureb表位串联体(HUepi)与LTb融合蛋白(HUepi-LTb)经基因克隆获得了较高的表达量,并初步显示了较好的免疫活性。为新一代Hp疫苗的研制奠定基础。

关键词：幽门螺杆菌黏附素尿素酶b亚单位大肠杆菌不耐热毒素b亚单位

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幽门螺杆菌KatA及KatA与大肠杆菌LTb融合蛋白的表达研究

幽门螺杆菌KatA及KatA与大肠杆菌LTB融合蛋白的表达研究

引用

作者：陶惠重庆医科大学

学位级别：硕士

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori Hp)的高感染率及其严重的危害性,使Hp疫苗成为医学微生物领域研究的热点之一,为探讨过氧化氢酶(Catalase,KatA)作为基因工程疫苗候选抗原在防治Hp感染中的作用,该研究采用PCR方法从Hp临床分离株中克隆k... 详细信息

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori Hp)的高感染率及其严重的危害性,使Hp疫苗成为医学微生物领域研究的热点之一,为探讨过氧化氢酶(Catalase,KatA)作为基因工程疫苗候选抗原在防治Hp感染中的作用,该研究采用PCR方法从Hp临床分离株中克隆katA基因(katA),构建Hp过氧化氢酶高效表达载体,并对重组工程菌的表达条件进行优化;重组蛋白KatA(rKatA)经镍离子亲和层析纯化后,以Western blot、ELISA及动物实验检测其免疫学活性.在此基础上,进一步采用重叠延伸技术将大肠杆菌不耐热肠毒素b亚单位(*** heat-labile enterotoxin bsubunit,LTb)基因(ltb)和katA基因以不同次序进行融合并分别在大肠杆菌中进行表达,筛选较理想的KatA-LTb融合蛋白表达载体,以期获得既具有免疫学活性又具有粘膜佐剂活性的KatA-LTb融合蛋白,为进一步研制Hp分子内佐剂亚单位疫苗奠定基础.

关键词：幽门螺杆菌过氧化氢酶融合蛋白基因表达大肠杆菌不耐热毒素b亚单位

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一种禽传染性支气管炎多表位粘膜免疫疫苗及其应用

一种禽传染性支气管炎多表位粘膜免疫疫苗及其应用

引用

作者：张晓丹李殿明蒲勤齐春梅田春辉刘甜甜任百亮张导春党将将吴启凡 266061 山东省青岛市崂山区株洲路153号高层次人才创业中心1号楼东单元B302室

本发明涉及一种用于预防禽传染性支气管炎的融合蛋白及该融合蛋白的制备方法及其应用。具体而言，本发明涉及一种融合蛋白，该融合蛋白包含禽传染性支气管炎病毒IbV主要结构蛋白S1蛋白和N蛋白主要的抗原表位、大肠杆菌不耐热毒素b亚单... 详细信息

标准号: CN105622760A

本发明涉及一种用于预防禽传染性支气管炎的融合蛋白及该融合蛋白的制备方法及其应用。具体而言，本发明涉及一种融合蛋白，该融合蛋白包含禽传染性支气管炎病毒IbV主要结构蛋白S1蛋白和N蛋白主要的抗原表位、大肠杆菌不耐热毒素b亚单位及纯化标签，本发明还涉及该融合蛋白的制备方法及其药学应用。

关键词：融合蛋白制备方法大肠杆菌不耐热毒素b亚单位禽传染性支气管炎病毒禽传染性支气管炎纯化标签抗原表位药学应用蛋白预防应用

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