本研究以西伯利亚鲟为试验对象,对摄食调控因子CB1以及ghrelin的摄食调控作用和关系进行了初步探讨。首先,本研究通过分子克隆获得西伯利亚鲟CB1、ghrelin及其受体GHSR核苷酸序列;基于这些序列,通过实时荧光定量PCR方法,检测西伯利亚鲟这三个基因的m RNA在其22个组织中的表达模式以及对摄食的响应模式;最后,通过腹腔注射CB1拮抗剂以及侧脑室注射ghrelin及其受体拮抗剂,探究西伯利亚鲟CB1和ghrelin的摄食调控作用及两者之间的调控关系。1.西伯利亚鲟CB1、ghrelin及其受体GHSR的克隆、组织分布和摄食响应本研究通过分子克隆首次得到西伯利亚鲟CB1 c DNA全长1428bp,编码475个氨基酸;ghrelin c DNA全长345bp,编码114个氨基酸;GHSR c DNA部分序列,长500bp。在西伯利亚鲟22个组织器官中,CB1 m RNA除脾以外的组织器官中均有表达,其中端脑、间脑、中脑、小脑、延脑、性腺、鳔、眼和皮肤的表达量较高。ghrelin m RNA在所检测的22个组织中均有表达,其中食道、胃、鳔和眼表达较高。GHSR m RNA表达范围较小,仅涉及13个组织,其中端脑、间脑、中脑、小脑、延脑和皮肤表达量较高。摄食后1和3小时,仅端脑CB1 m RNA的表达量显著低于未投喂组(P<0.01),而未投喂组中,端脑和间脑CB1 m RNA在投喂时间点前后均没有显著差异。禁食组端脑CB1 m RNA水平在前6天显著高于投喂组(P<0.01)。而禁食组内,端脑CB1m RNA水平逐步降低,最终在禁食10和15天显著低于对照组(P<0.01)。禁食组与对照组的间脑CB1 m RNA水平在禁食期间没有显著差异。摄食1小时和3小时后,西伯利亚鲟端脑、间脑和胃中ghrelin m RNA的表达量显著下降(P<0.05或P<0.01),中脑ghrelin在摄食后与对照组没有显著差异;端脑和间脑GHSR m RNA极显著降低(P<0.01),中脑中GHSR m RNA没有显著变化。这些结果暗示:CB1、ghrelin及其受体GHSR参与西伯利亚鲟增食欲过程。2.西伯利亚鲟CB1和ghrelin信号的增食欲作用腹腔注射5μg/g bw AM6545(CB1外周限制性拮抗剂)显著抑制了西伯利亚鲟1小时内的摄食量(P<0.01),第1天腹腔注射5μg/g bw AM6545和0.5μg/g bw Rimonant(CB1中枢非限制性拮抗剂)后5小时内,累计摄食量显著降低,该作用持续至第5天(P<0.01)。腹腔注射5μg/g bw AM6545显著抑制了端脑和间脑ghrelin m RNA表达(P<0.05),显著提高了端脑CART m RNA表达(P<0.01);腹腔注射0.5μg/g bw Rimonabant显著抑制了端脑和间脑ghrelin m RNA表达(端脑P<0.01,间脑P<0.05),同时显著抑制了间脑NPY m RNA表达(P<0.01),显著提升了中脑CART m RNA表达(P<0.05)。侧脑室注射ghrelin极显著提高了西伯利亚鲟的摄食量(P<0.01),而侧脑室注射ghrelin受体拮抗剂DLys极显著降低了西伯利亚鲟的摄食量(P<0.01),同时DLys也能阻断ghrelin对摄食量的提高作用。进一步地,侧脑室注射ghrelin极显著降低了西伯利亚鲟端脑CART m RNA表达(P<0.01),极显著提升了端脑和中脑NPY m RNA表达(P<0.01)。这些结果表明:西伯利亚鲟CB1和ghrelin信号具有促进摄食的作用。3.西伯利亚鲟ghrelin信号的增食欲作用依赖CB1信号腹腔注射AM6545+侧脑室注射ghrelin,显著升高西伯利亚鲟摄食量(P<0.01),同时间脑和中脑NPY m RNA升高(P<0.05或P<0.01),中脑ghrelin显著降低(P<0.01);腹腔注射Rimonabant+侧脑室注射ghrelin,西伯利亚鲟摄食量无显著变化,端脑NPY和中脑ghrelin m RNA显著降低(P<0.01),中脑NPY m RNA显著升高(P<0.01)。另一方面,侧脑室注射CB1激动剂ACEA显著提高西伯利亚鲟摄食量(P<0.01),同时提高了中脑NPY m RNA(P<0.01);而侧脑室注射ghrelin受体拮抗剂DLys未能阻断ACEA提高西伯利亚鲟摄食量(P<0.01),但间脑ghrelin和NPY m RNA以及中脑CART和NPY m RNA均显著升高(P<0.01)。这些结果表明:西伯利亚鲟中枢神经系统中,ghrelin信号促进摄食的作用依赖于CB1信号,这可能与端脑奖赏激励的神经回路相关。综合上述结果,本研究得到如下结论:西伯利亚鲟C
中国科学院深圳先进技术研究院脑功能图谱与行为研究中心王枫研究团队在成年雌雄小鼠脑内大麻素ⅰ型受体mRNA的差异分布研究取得进展。相应成果为"Liu X, Li X, Zhao G,et *** dimorphic distribution of cannabinoid 1 receptor m...
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中国科学院深圳先进技术研究院脑功能图谱与行为研究中心王枫研究团队在成年雌雄小鼠脑内大麻素ⅰ型受体mRNA的差异分布研究取得进展。相应成果为"Liu X, Li X, Zhao G,et *** dimorphic distribution of cannabinoid 1 receptor mRNA in adult C57BL/6J mice[J].Journal of Comparative Neurology, 2020:1-14(成年C57BL/6J小鼠脑内大麻素ⅰ型受体mRNA分布的雌雄二态性)"。
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