目的:子宫颈癌是最常见的女性生殖系统恶性肿瘤。为了进一步了解子宫颈癌发生的分子机制,本研究对ALKBH5在正常子宫颈组织、子宫颈上皮内病变及子宫颈癌组织中的表达,及ALKBH5表达与子宫颈癌患者的临床病理特征的相关性进行分析,初步探讨ALKBH5在子宫颈癌发生中的作用。方法:从GEO数据库中下载包含8例正常子宫颈上皮组织和25例子宫颈癌组织RNA测序数据的GSE527数据集,及包含24例正常子宫颈上皮组织、14例CIN1、22例CIN2、40例CIN3和28例子宫颈癌组织RNA测序数据的GSE63514数据集,获得各组间ALKBH5m RNA水平信息,对ALKBH5 m RNA水平进行差异表达分析。同时从GEO数据库中下载包含20例无淋巴结转移和19例有淋巴结转移的子宫颈癌组织中ALKBH5 m RNA水平信息的GSE26511数据集,并从TCGA数据库下载包含309例子宫颈癌患者的临床病理信息及RNA转录水平信息的数据,对ALKBH5 m RNA水平与子宫颈癌患者临床病理特征进行差异分析。纳入14例正常子宫颈上皮、17例CIN1、17例CIN2、17例CIN3和26例宫颈鳞癌组织进行免疫组化染色,对ALKBH5蛋白表达水平进行组间差异分析,并分析ALKBH5蛋白表达水平与子宫颈癌患者临床病理特征的关系。此外,为了进一步探讨ALKBH5在子宫颈癌中的作用,从GEO数据库中下载GSE40132数据集,获得Hela细胞中沉默ALKBH5后表达水平发生显著改变的基因,再利用DAVID数据库进行GO和KEGG富集分析。结果:1.在纳入的GEO数据集中,ALKBH5在正常子宫颈上皮、CIN1、CIN2、CIN3和子宫颈癌组织中的转录水平无差异(P>0.05)。2.来源于GEO数据集及TCGA数据库病例的数据分析显示,ALKBH5转录水平与子宫颈癌患者年龄、HPV感染、淋巴脉管间隙浸润、有无淋巴结转移、FIGO分期均无关(P>0.05)。3.免疫组化染色结果显示,相较于正常子宫颈上皮组织,ALKBH5在CIN3和宫颈鳞癌组织中的蛋白表达水平显著升高(P<0.05),但CIN3与宫颈鳞癌组织中的ALKBH5蛋白表达水平无差异(P>0.05)。此外,在纳入的91例组织中,高危型HPV感染组织中的ALKBH5蛋白水平显著高于高危型HPV检测为阴性者。在纳入的26例宫颈鳞癌中,ALKBH5蛋白表达水平与宫颈鳞癌患者年龄、FIGO分期、肿瘤大小、分化程度、有无淋巴结转移及淋巴脉管间质浸润均无关(P>0.05),但与高危型HPV感染(P=0.031)及间质浸润深度(P=0.028)有关。4.在Hela细胞中沉默ALKBH5后,可有197个基因表达显著上调和207个基因表达显著下调。GO分析结果显示,表达水平显著上调的基因主要参与先天免疫反应、对病毒的防御反应、病毒基因组复制的负调控、炎症反应等生物过程。表达水平显著下调的基因主要参与胞质钙离子浓度的正向调节、中性粒细胞趋化性、DNA甲基化等生物过程。KEGG分析显示,ALKBH5可能参与NOD样受体信号通路、趋化因子信号通路、Toll样受体信号通路、病毒蛋白与细胞因子及细胞因子受体的相互作用等。结论:ALKBH5在癌前病变与子宫颈癌中的蛋白表达水平显著升高,可能参与HPV相关子宫颈癌的发生。ALKBH5可能通过参与调节宿主抗病毒相关免疫过程,参与子宫颈癌发生。图11幅,表9个,参考文献59篇
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