检索结果-内蒙古大学图书馆

国外医学(免疫学分册) 2002年第4期25卷 224-封四页

作者：党育平张亮武彩霞第四军医大学西京医院皮肤科，陕西西安 710032

定量免疫印迹技术是近年来新兴的一门崭新技术，本文编译了应用该项技术分析人类自身抗体库所取得的一系列进展。研究发现，天然自身抗体仅与一组进化上保守的自身抗原反应，个体之间高度保守，并且天然自身抗体的选择需要正常T／B细胞... 详细信息

定量免疫印迹技术是近年来新兴的一门崭新技术，本文编译了应用该项技术分析人类自身抗体库所取得的一系列进展。研究发现，天然自身抗体仅与一组进化上保守的自身抗原反应，个体之间高度保守，并且天然自身抗体的选择需要正常T／B细胞的相互作用，这种方法有可能用来区分器官特异性自身免疫疾病与免疫功能失调性自身免疫疾病。另外还观察到在一些自身免疫性疾病中，IgM的调节功能存在缺陷。

关键词：抗体库定量免疫印迹自身免疫

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

N-甲基-D-门冬氨酸受体亚单位蛋白的研究:在发育过程中的表达及受体复合物亚单位组成

N-甲基-D-门冬氨酸受体亚单位蛋白的研究:在发育过程中的表达及受...

引用

作者：罗建红浙江大学

学位级别：博士

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

定量方法研究原核细胞的DNA损伤修复过程动力学

定量方法研究原核细胞的DNA损伤修复过程动力学

引用

作者：倪鸣北京大学

学位级别：博士

细胞的DNA经常受到各种物化因素的攻击而产生损伤。损伤导致遗传性状的不稳定,所以细胞进化出了一套完善的机制处理这种紧急情况,包括控制细胞周期,修复损伤,在真核细胞中还包括触发细胞自杀。DNA修复反应还会主动引入突变,以期产生适... 详细信息

细胞的DNA经常受到各种物化因素的攻击而产生损伤。损伤导致遗传性状的不稳定,所以细胞进化出了一套完善的机制处理这种紧急情况,包括控制细胞周期,修复损伤,在真核细胞中还包括触发细胞自杀。DNA修复反应还会主动引入突变,以期产生适应新环境的后代。上述这些工作需要相互配合,协同作用,使细胞在损伤后获得最大存活机会。大肠杆菌的SOS反应作为研究DNA损伤修复反应的经典模式系统,已积累了大量观测数据。为了综合利用这些数据,了解DNA损伤修复过程的进化优势,本文借助数学模型对SOS反应过程进行分析。本文建立了描述SOS反应过程的随机模型,解释了单细胞中SOS反应诱导信号呈现的类周期调制现象,是目前唯一完整描述SOS反应过程的随机模型。我们提出,诱导信号受类周期调制的原因是细胞内有限几个复制叉在复制过程中间歇性遇到DNA损伤,以致诱导信号被非连续的触发。经过参数拟合和稳定性分析,我们证实触发的间隔时间与系统动力学性质有关,而不是完全随机的。为了进一步验证我们的理论模型,我们设计了分子生物实验,用免疫印迹法定量测量了导致突变的蛋白UmuD的表达量。我们获得了对UmuD和UmuD’(UmuD的变体)有适合的亲和力比例,能同时定量表征两者in vivo水平的抗体。这样我们可以将免疫印迹实验的精度提高到能估计单细胞含有的蛋白个数。我们发现,随着损伤程度的加重,UmuD/UmuD’表达的动力学明显不同。为了解释这种区别,我们在数学模型中考虑了DNA损伤导致细菌生长变慢的因素,模拟了UmuD/UmuD’细胞内水平的动力学曲线。通过测量与模拟,我们发现SOS突变主要发生在损伤被修复后,这意味着SOS突变的作用主要是适应环境变化,而不是损伤发生后帮助DNA复制的恢复。在应用研究方面,我们利用SOS反应元件构造交替开关式基因回路。在间断的紫外照射下,两种颜色的荧光蛋白将交替表达。基因回路可分为两个模块:一个双稳态和一个或非门。双稳态的输出和紫外触发的SOS反应为或非门的两个输入信号,而或非门的输出控制双稳态的跳转。我们建立了一个微分方程模型,证实了该设计在理论上的可行性。在实验构建方面,我们已成功分别得到了性能良好的或非门和双稳态,可以作为今后进行拼接的候选元件。

关键词： SOS反应随机模型微分方程模型定量免疫印迹合成生物学

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

白斑综合征病毒(WSSV)基因VP28原核表达与检测

引用

上海海洋大学学报 2017年第2期26卷 183-188页

作者：张正阳张春莉施定基贾晓会贾睿何培民上海海洋大学水产与生命学院上海201306 Department of Molecular Membrane Biology Max Planck Institute of Biophysics 中国科学院植物研究所北京100093

VP28是对虾白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)的囊膜蛋白。将VP28基因序列密码子优化后合成,经限制性内切酶NdeⅠ、XhoⅠ酶切后,按正确的阅读框顺序插入到p ET-28a(+)表达载体上。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经质粒... 详细信息

VP28是对虾白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)的囊膜蛋白。将VP28基因序列密码子优化后合成,经限制性内切酶NdeⅠ、XhoⅠ酶切后,按正确的阅读框顺序插入到p ET-28a(+)表达载体上。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经质粒双酶切、测序鉴定后成功地构建了VP28基因原核表达载体p ET-28a-VP28。转化菌经IPTG诱导,SDS-PAGE显示含有与预期大小一致的约30 ku蛋白带,主要以包涵体形式表达。采用Ni-IDA-Sepharose CL-6B亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,获得了纯度为95%的大肠杆菌重组蛋白VP28。该纯化蛋白作为绝对定量Western的标准品,梯度稀释建立标准曲线,以定量检测转基因鱼腥藻7120中的VP28绝对表达量。实验结果表明,大肠杆菌BL21(DE3)表达的重组蛋白VP28与鱼腥藻7120中表达的VP28分子量基本相同,纯化后的大肠杆菌重组蛋白梯度稀释作为绝对定量Western标准曲线,计算出转基因鱼腥藻7120在培养第17天时,VP28的表达量最大,为5.14μg/m L,占转基因鱼腥藻7120总蛋白浓度的1.45%。这不仅对转基因鱼腥藻的高效培养具有重要意义,也为日后确定投喂对虾口服疫苗有效剂量防治白斑综合征奠定了基础。

关键词：对虾白斑综合征病毒(WSSV) VP28 大肠杆菌鱼腥藻7120 定量免疫印迹

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

对虾白斑综合症病毒（WSSV）基因原核表达与检测

对虾白斑综合症病毒（WSSV）基因原核表达与检测

引用

作者：张正阳上海海洋大学

学位级别：硕士

白斑综合症是危害世界虾养殖业的一大危害,自1992年在中国台湾发现以来,随后迅速在亚洲、欧洲、美洲蔓延开来。一旦感染白斑综合症病毒(WSSV),对虾3-10天发病,且死亡率100%,至今仍没有针对WSSV有效治疗方法。目前只能以清洁养殖环境、... 详细信息

白斑综合症是危害世界虾养殖业的一大危害,自1992年在中国台湾发现以来,随后迅速在亚洲、欧洲、美洲蔓延开来。一旦感染白斑综合症病毒(WSSV),对虾3-10天发病,且死亡率100%,至今仍没有针对WSSV有效治疗方法。目前只能以清洁养殖环境、筛选抗病毒虾苗、使用一般的抗病毒药等手段预防WSSV感染。自WSSV基因组测序工作完成以来,越来越多的研究重点放在WSSV感染宿主细胞致病机理上,并且已经证明病毒囊膜蛋白在感染宿主的过程中起到了关键性作用,其中囊膜蛋白VP28研究居多。VP28蛋白已经在多种真核、原核表达系统中表达并被证明能够有效的抵御WSSV感染,所以重组VP28蛋白疫苗可作为防治白斑综合症的一种新手段。大肠杆菌中表达的VP28蛋白需要提取纯化后才能施用,这会增加成本和技术难度,对于规模化养殖中应用推广是十分不利的。蓝藻为光合自养生物,结构简单,基因组小便于遗传操作,蛋白酶含量少不易分解外源表达产物,光合效率高,生长速度快,且个体为多细胞易于大量收获。因此,蓝藻作为原核表达系统已被广泛应用于制备重组药物、生物柴油和环境保护等领域。对虾仔虾期具有植食性阶段,蓝藻为天然开口饵料,故蓝藻可作为口服重组疫苗。本实验室目前已获得转vp28基因的鱼腥藻7120(丝状体蓝藻),并经过药效试验证明其具有抗WSSV能力。但是关于其VP28蛋白的表达效率、表达规律以及投喂对虾防治WSSV的有效剂量却知之甚少。所以,本文构建了一种定量检测鱼腥藻7120异源表达VP28蛋白的方法,以解决上述问题。***28基因原核表达载体构建与表达及纯化首先将密码子优化后合成的vp28基因序列,通过PCR扩增技术克隆获得目的片断产物,然后与pET-28a表达载体连接,构建大肠杆菌高效表达载体pET-28a-vp28。采用热激法转化DH5α,应用抗生素筛选阳性克隆,再经PCR鉴定(636bp)正确后,提取其质粒进行双酶切,结果验证后(重组质粒5910bp,双酶切产物5289bp、621bp)再进行DNA测序验证。测序结果表明,vp28基因正确的插入到了pET-28a表达载体中,最终成功获得了重组pET-28a-vp28表达载体。将其转入表达菌株bl21(de3)中后,卡那霉素筛选出阳性克隆,并用iptg进行诱导表达,sds-page电泳结果显示vp28蛋白诱导表达成功。进一步确定诱导表达的vp28蛋白是包涵体。包涵体经尿素洗涤并溶解后,利用biologiclp层析系统过镍柱琼脂糖亲和层析纯化,经含有10-250mm梯度浓度的咪唑洗脱后,得到融合蛋白,结果显示纯化蛋白为单一条带分子量约为30kda,纯度为95%以上。使用非干扰型蛋白浓度测定试剂盒测定纯化后的重组蛋白浓度为1.094mg/ml。2.抗vp28单克隆抗体的制备使用软件分析vp28氨基酸序列,综合其二级结构、跨膜区、信号肽、抗原性等参数选取了8个表位合成多肽并偶联血蓝蛋白klh,制备免疫原。常规方法免疫小鼠,选取抗血清效价1:16000的balb/c鼠1的脾细胞与杂交瘤细胞进行融合,有限稀释法筛选阳性克隆,得到3株单克隆细胞株,分别为e9、a7和h3。制备腹水后,elisa法测定其亚型均igg,效价分别为1×10-6、1×10-5、1×10-4,表位分别为ngksdaqmkeed(84-95aa)、dnietnmdenlr(42-53aa)、ssftpvsidede(156-167aa)。选取效价最高的e9作为后续westernblotting实验的第一抗体。3.工程蓝藻vp28外源蛋白表达量的定量检测将野生型和转vp28基因鱼腥藻7120分别进行单藻落纯化并扩大培养,并进一步采用逐渐增加硫酸新霉素浓度(25-200μg/ml)方法筛选出含有重组质粒的转基因鱼腥藻7120。将筛选后的工程藻株培养在200μg/ml硫酸新霉素液体培养基中,并分别提取转基因鱼腥藻7120和野生型的蛋白,应用单克隆抗体e9进行westernblotting定性检测和验证。将该2种藻株分别以1:50比例重新接种,设三个平行样,培养在30℃培养箱内。然后分别采集接种后第1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23天的藻液,一方面使用分光光度计测定其od750值,绘制藻体生长曲线。一方面采用冻融法破碎细胞并提取各自的总蛋白,bradford法测定总蛋白浓度后,-80℃保存。采用效价为1:10000的抗vp28单克隆抗体e9作为第一抗体,1:5000hrp标记的羊抗鼠igg作为第二抗体进行westernblotting。将已纯化的原核表达pet-28a-vp28融合蛋白依次上样0.05μg、0.1μg、0.25μg、0.5μg、1μg、2μg作为横坐标,chemi-docmpimagingsystem成像仪采集条带的

关键词：白斑综合症病毒(WSSV) vp28基因大肠杆菌鱼腥藻7120 单克隆抗体定量免疫印迹

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：