检索结果-内蒙古大学图书馆

db/db小鼠肝脏中实时定量逆转录pcr内参照基因及标准化方法的评估与整合（英文）

中国病理生理杂志 2016年第11期32卷 2106-2112页

作者：李开济田增有田景瑞门秀丽吴静华北理工大学基础医学院病理生理学系河北省慢性疾病重点实验室唐山市慢性病临床基础研究重点实验室河北唐山063000

目的:实时定量逆转录pcr(RT-q pcr)结果的标准化对于保证最终结果的准确性尤其重要。常用的标准化方法包括用加入的核酸量校正(ΔCt法)、用单个内参照基因校正(ΔΔCt法)和用统计学软件计算多个内参照基因的几何平均值进行校正。我们在d... 详细信息

目的:实时定量逆转录pcr(RT-q pcr)结果的标准化对于保证最终结果的准确性尤其重要。常用的标准化方法包括用加入的核酸量校正(ΔCt法)、用单个内参照基因校正(ΔΔCt法)和用统计学软件计算多个内参照基因的几何平均值进行校正。我们在db/db小鼠肝脏中对各种校正方法进行评估。方法:用ge Norm和NormFinder两种软件评估ACTB、e IF5、GAPDH、HMBS、HPRT1、Polr2A和RPLP0共7个内参照基因,以肝脏脂质合成相关基因Thrsp、SCD、SREBP1c和FAS作为目的基因。结果:应用ΔCt法,db/db小鼠肝脏中所有目的基因及GAPDH的表达显著升高(P<0.05)。ge Norm计算认为ACTB和HMBS最稳定。Norm Finder计算认为ACTB最稳定,而GAPDH和RPLP0为最佳组合。以单个基因ACTB或RPLP0,以及ACTB与HMBS,或GAPDH与RPLP0的几何平均值进行校正,db/db小鼠肝脏中除SREBP1c以外,Thrsp、SCD1和FAS的表达均升高(P<0.05)。结论:用ΔCt法校正RTq pcr的结果稳定并具有生物学意义。统计学软件ge Norm或Norm Finder应与ΔCt法整合使用。

关键词：实时定量逆转录pcr 标准化方法内参照基因 db/db小鼠

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实时定量逆转录pcr测定EB病毒DNA负荷的临床应用

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诊断学理论与实践 2004年第1期3卷 43-44页

作者：屠其华郭晓君孙慧平沈志祥嘉兴医学院附属第一医院血液科浙江嘉兴314000 上海第二医科大学附属瑞金医院血液科上海200025

EB病毒(EBV)是1964年由Epstein和Barr在对非洲Burkitt淋巴瘤来源的瘤细胞进行体外培养时发现的.全球估计EBV成入感染率高达90%以上.已有的证据证明EBV感染可引起传染性单核细胞增多症和器官移植及艾滋病感染等免疫功能降低后的淋巴增生... 详细信息

EB病毒(EBV)是1964年由Epstein和Barr在对非洲Burkitt淋巴瘤来源的瘤细胞进行体外培养时发现的.全球估计EBV成入感染率高达90%以上.已有的证据证明EBV感染可引起传染性单核细胞增多症和器官移植及艾滋病感染等免疫功能降低后的淋巴增生性疾病(lymphoproliferativedisease,LPD).此外,还发现EBV与一些疾病,如淋巴瘤、鼻咽癌、胃癌、乳腺癌和系统性红斑狼疮等发病有关[1,2].利用分子生物学方法诊断和监测这些疾病显得日益重要.传统的血清学方法是检测健康人近期或曾经感染EBV的常用方法,但血清学检测的结果不能反映EBV的活动状况.测定EBV DNA负荷量是直接和客观反映EBV感染活动与否的指标[3].目前通常采用实时定量逆转录pcr(RTQ-RT-pcr)的方法来测定DNA负荷量.

关键词：实时定量逆转录pcr 测定 EB病毒 DNA负荷临床应用

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实时定量逆转录pcr分析D-半乳糖致衰老小鼠胸腺相关基因表达的研究

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临床医学工程 2009年第7期16卷 6-7页

作者：张华华张国平广东医学院医学遗传学研究室广东湛江524023

目的建立D-半乳糖致衰老小鼠模型,分析其胸腺相关基因表达的研究。方法D-Gal模型组小鼠皮下注射剂量为500mg/kg·d的D-半乳糖溶液,连续注射8w;实时定量逆转录pcr方法对D-Gal模型组小鼠的几种胸腺状态和功能相关基因的表达进行相对... 详细信息

目的建立D-半乳糖致衰老小鼠模型,分析其胸腺相关基因表达的研究。方法D-Gal模型组小鼠皮下注射剂量为500mg/kg·d的D-半乳糖溶液,连续注射8w;实时定量逆转录pcr方法对D-Gal模型组小鼠的几种胸腺状态和功能相关基因的表达进行相对定量以直接评价胸腺微环境。结果D-Gal模型组与对照组相比,胸腺相关基因表达变化比值为:LMO2:0.94±0.76,Foxn1:0.45±0.32,IL-7:0.69±0.7。结论D-Gal模型组与对照组相比,胸腺负调控因子的表达无明显变化,而胸腺微环境上皮细胞和胸腺细胞分泌及必需的因子的基因表达显著下降,因而在个体水平上,D-Gal破坏了胸腺微环境的稳定性和功能性,使小鼠胸腺发生明显退化。

关键词： D-半乳糖胸腺实时定量逆转录pcr

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浸润性膀胱癌差异基因的互作网络分析及验证研究

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南方医科大学学报 2010年第8期30卷 1771-1774页

作者：石嵘赵镇高洋吴清华宋艳斌姜立郑文岭马文丽南方医科大学基因工程研究所广东广州510000 南方医科大学热带与公共卫生学院广东广州510515 广东省人民医院广东广州510000

目的采用蛋白互作网络分析研究表达谱基因芯片数据,构建浸润性膀胱癌基因互作网络图并对筛选出的网络中心节点进行实验验证。方法将表达谱芯片筛选到的浸润性膀胱癌152个共同差异表达基因,导入STRING在线数据库进行分析,绘制差异基因互... 详细信息

目的采用蛋白互作网络分析研究表达谱基因芯片数据,构建浸润性膀胱癌基因互作网络图并对筛选出的网络中心节点进行实验验证。方法将表达谱芯片筛选到的浸润性膀胱癌152个共同差异表达基因,导入STRING在线数据库进行分析,绘制差异基因互作网络图,并将互作网络数据导出到Cytoscape2.6.2软件中,筛选出网络中心节点。采用KEGG数据库等进行信号通路分类及基因功能研究,进而采用实时定量RT-pcr对其基因表达进行验证,筛选出基因表达在膀胱癌组与正常膀胱粘膜组差异最大的基因,并对浸润性膀胱癌发生的分子机制进行初步探讨。结果共有103个膀胱癌共同差异表达基因编码的蛋白经STRING筛选存在相互作用,并构成一个复杂的互作网络图;Cytoscape共筛选出26个网络中心节点,广泛参与肿瘤发生的多条信号通路;实时定量RT-pcr结果表明UBE2C、VEGF、TGFBR2、CAV1四个基因表达量在膀胱癌组与正常膀胱粘膜组的差异最大,分别为9.45、4.17、0.13、0.18倍(以GAPHD作为内参,计算2-△△Ct),与芯片检测结果的趋势一致。结论本研究构建出的浸润性膀胱癌差异基因互作网络图,尤其是其中的网络中心节点基因,对于浸润性膀胱癌发生分子机制的研究、早期诊断及分子靶向治疗研究具有较好的提示作用。

关键词：膀胱癌互作网络中心节点实时定量逆转录pcr

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t（15；17）急性早幼粒细胞白血病向t（11；17）急性单核细胞白血病转化一例

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中华医学遗传学杂志 2018年第2期35卷 276-279页

作者：王峥李叶党辉师岩何琦冯麟鲍立秦亚溱刘艳荣黄晓军赖悦云北京大学人民医院北京大学血液病研究所造血干细胞移植治疗血液病北京市重点实验室100044

目的报告1个急性早幼粒细胞白血病（acute promyelocytic leukemia, APL）治疗第13个月向t（11；17）（q23；q21）急性单核细胞白血病转化的病例。方法应用骨髓细胞形态学、免疫分型、细胞遗传学以及实时定量逆转录pcr（real-time quant... 详细信息

目的报告1个急性早幼粒细胞白血病（acute promyelocytic leukemia, APL）治疗第13个月向t（11；17）（q23；q21）急性单核细胞白血病转化的病例。方法应用骨髓细胞形态学、免疫分型、细胞遗传学以及实时定量逆转录pcr（real-time quantitative reverse-transcription polymerase chain reaction, RQ-pcr）方法对疾病进行诊断和分型。结果患者起病时骨髓细胞形态学和免疫分型均显示为典型的APL，染色体分析核型为t（15；17）（q22；q21），RQ-pcr示PML-RARα融合基因为S型。该患者治疗第13个月时出现疾病反复，骨髓细胞形态学和免疫分型显示转化为急性单核细胞白血病，染色体核型为t（11；17）（q23；q21），进一步的荧光原位杂交和RQ-pcr证实具有MLL-AF17q融合基因而非PLZF-RARα。结论APL治疗后可以继发治疗相关的急性髓性白血病（therapy-related acute myeloid leukemia, t-AML），t（11；17）（q23；q21）不仅可以出现于变异型APL，还可出现于t-AML，荧光原位杂交和RQ-pcr方法进行融合基因检测是确定诊断的必要手段。

关键词：急性早幼粒细胞白血病细胞遗传学荧光原位杂交实时定量逆转录pcr

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血清/血浆中miR-21与食管癌关系的病例对照研究

血清/血浆中miR-21与食管癌关系的病例对照研究

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作者：高永鑫汕头大学

学位级别：硕士

背景与目的：食管癌是世界上最常见的八大恶性肿瘤之一，我国食管癌发病率和死亡率位居世界之冠。食管癌就诊时多处于中晚期,相当部分的病人已不能手术治疗,总的五年生存率很低,但是早期食管癌手术10年生存率可达95.00%。因此提高食管... 详细信息

背景与目的：食管癌是世界上最常见的八大恶性肿瘤之一，我国食管癌发病率和死亡率位居世界之冠。食管癌就诊时多处于中晚期,相当部分的病人已不能手术治疗,总的五年生存率很低,但是早期食管癌手术10年生存率可达95.00%。因此提高食管癌早期诊断率以便进行二级预防,十分必要。目前较常用的诊断方法是食管功能检查、影像学检查、食管脱落细胞学检查和食管镜检查，但会给患者造成较大的伤害和痛苦，且敏感性较差。在过去对miRNA的研究中，发现miRNA能够成为肿瘤的一种新的补充生物标志物，而目前研究较多的血清/血浆miRNA则可能给肿瘤诊断提供了一个新的选择。miR-21作为一个重要的miRNA,在多种肿瘤细胞中异常表达,参与了细胞的分化、增殖和凋亡，与肿瘤发生发展密切相关,对于肿瘤的诊断、治疗和预后,具有重要的临床意义。然而，就目前文献报道来看，没有发现血清/血浆中miR-21与食管癌相关性的研究，本论文旨在揭示食管癌患者血清/血浆中miR-21的表达情况，评估血清/血浆中miR-21表达水平作为一个新的食管癌生物标志物的价值。方法：血液标本由汕头大学医学院附属第一医院检验科收集，冰盒送运，-80℃超低温冰箱保存。Trizol法提取22例食管鳞癌患者的血清/血浆及22例正常体检者血清/血浆总RNA，以及5例手术患者术前术后的血清/血浆总RNA，运用紫外分光光度仪和凝胶成像系统对所提总RNA的纯度和完整性进行分析。设计miR-21和内参照U6的茎环结构反转录引物和pcr扩增引物，利用SYBR Green实时荧光定量pcr法检测miR-21及内参照U6的表达水平。运用spss17.0对所得数据进行分析。结果: SYBR Green实时荧光定量pcr检测得到的U6和miR-21熔解曲线单一，pcr产物特异。22例正常体检者组血清/血浆miR-21的表达水平是食管鳞癌患者的1.70倍，但是两者差异无统计学意义（P>0.05）。5例手术患者术后血清/血浆miR-21的表达水平是术前的4.56倍（P<0.05）。食管癌血清/血浆miR-21的表达水平与性别、年龄、癌发部位、分化程度、分期、转移类型、有无放化疗无相关性（P>0.05)，但与有无手术、是否转移相关（P<0.05）。结论：食管癌患者血清/血浆中的miR-21表达水平低于正常体检者，但差别无统计学意义；食管癌患者血清/血浆miR-21的表达水平与有无手术、是否转移相关；血清/血浆中的miRNA具有较高的稳定性，检验剩余血能够很好的用于血清/血浆中miRNAs表达水平研究；检测患者血清/血浆miR-21的表达水平有可能为食管癌的诊断提供一个新的分子生物学指标，但后期仍需扩大样本量进行分析。

关键词： miR-21 食管癌血清实时定量逆转录pcr 病例对照研究

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MDM4基因在慢性淋巴细胞白血病中表达及临床意义的研究

MDM4基因在慢性淋巴细胞白血病中表达及临床意义的研究

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作者：刘玲南京医科大学

学位级别：硕士

目的鼠双微体4(murine double minute4, MDM4)属于鼠双微体(murine double minute,MDM)基因家族，定位于人类染色体1q32，编码490个氨基酸。截短MDM4(splicing variant of MDM4, S-MDM4)是MDM4的变异体，与全长MDM4(full-length MDM4, FL-MDM4)在第6号外显子存在68bp缺失。鼠双微体2(murine double minute2, MDM2)是MDM4的类似物，两者在结构上具有高度的相似性。近年研究发现，MDM4基因在调节p53活性方面具有重要的作用，且在慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia, CLL)中过表达。本研究目的旨在探索MDM4在CLL中的预后意义和研究MDM4在p53通路中的作用机制。方法采用实时定量逆转录pcr(quantitative reverse transcription-polymerase chainreaction, qRT-pcr)技术、SYBR Green荧光染料法检测140例CLL患者外周血淋巴细胞中FL-MDM4、S-MDM4和MDM2基因表达水平，运用循环阈值(cyclethreshold, Ct)比较法进行MDM mRNA相对定量分析，上述基因的相对表达量以公式2(-△Ct)表示，其中△Ct=Ct目的基因-Ct对照基因。应用统计软件SPSS17.0对数据进行统计分析，不同分组间基因表达水平的差异采用Mann-Whitney U检验，P<0.05为差异有统计学意义。分析FL-MDM4、S-MDM4和MDM2mRNA表达水平与性别、年龄、Binet分期、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)、胸苷激酶1(thymidine kinase1, TK1)、β2-微球蛋白(β2-microglobulin, β2-MG)、免疫球蛋白重链可变区(immunoglobulin heavy-chain variable region, IGHV)基因突变状态、细胞遗传学异常、p53基因突变、p53异常、CD38和ZAP-70蛋白的关系。结果 ①140例CLL患者包括96例男性和44例女性患者(男性：女性=2.2)，中位发病年龄为61岁(33～84岁)。根据Benit分期，Benit A期49例(35.0%)，B期53例(37.9%)，C期38例(27.1%)。140例CLL患者外周血淋巴细胞中FL-MDM4、S-MDM4和MDM2的mRNA表达水平中位数分别为0.05274(0.1101～0.01342)、0.01689(0.03349～0.00645)和0.01172(0.02717～0.00539)； ②p53异常定义为CLL患者伴del(17p13)和/或p53突变，在可统计的131例患者中，p53异常为28例(21.4%)。 ③FL-MDM4和S-MDM4mRNA表达水平在伴del(17p13)(P=0.037和P=0.006)、p53突变(P=0.023和P<0.001)和p53异常(P=0.024和P<0.001)的CLL患者中明显升高，但是并未发现MDM2与上述p53状态有相关性(P=0.196、P=0.095和P=0.092)。此外，S-MDM4表达水平在Binet分期较晚的患者，LDH水平增高和β2-MG水平增高的患者中明显升高。 ④无治疗生存时间(treatment free survival, TFS)定义为从诊断到首次治疗的时间或最后随访的时间。生存分析提示，S-MDM4高表达是确定TFS的不良预后因素。多因素Cox回归分析发现del(17p13)是与TFS明显相关的独立预后因素。结论 CLL患者中，FL-MDM4和S-MDM4高表达提示患者伴p53异常。S-MDM4表达水平与CLL多种临床和生物学特征存在相关性，具有一定的预后意义。目的慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia, CLL)是一种异质性的恶性血液病，而化疗效果在一定程度上决定了患者的预后，氟达拉滨为目前治疗CLL常用药物，通过拮抗嘌呤代谢引起DNA损伤从而激活p53基因，使CLL细胞进入线粒体凋亡途径从而发挥其抗肿瘤作用。氟达拉滨活性物质(F-ara-A)的药理作用通过抑制DNA的合成，从而引起DNA的损伤和p53的活化。Nutin-3是鼠双微体2(murine double minute, MDM2)基因特异性的拮抗剂，阻止MDM2-p53的结合，从而解除MDM2对p53的抑制，使p53活化。全长鼠双微体4(full-lengt

关键词：慢性淋巴细胞白血病鼠双微体4 鼠双微体2 实时定量逆转录pcr 慢性淋巴细胞白血病 p53 鼠双微体氟达拉滨 Nutin-3

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2型糖尿病不同糖耐量患者血清miR-103的检测和临床应用

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实验与检验医学 2019年第3期37卷 485-488页

作者：臧素纲陈鑫韩霜陈曦周玉贵南通大学附属东台医院检验科

目的检测2型糖尿病不同糖耐量水平患者和正常人血清中miR-103的表达水平,探讨miR-103在2型糖尿病不同糖耐量水平的三个糖耐量模式早期筛查及鉴别诊断方面的应用价值。方法应用poly(A)聚合酶加尾SYBRGreenI实时定量逆转录荧光pcr法2型糖... 详细信息

目的检测2型糖尿病不同糖耐量水平患者和正常人血清中miR-103的表达水平,探讨miR-103在2型糖尿病不同糖耐量水平的三个糖耐量模式早期筛查及鉴别诊断方面的应用价值。方法应用poly(A)聚合酶加尾SYBRGreenI实时定量逆转录荧光pcr法2型糖尿病不同糖耐量水平患者及健康体检者血清中miR-103的表达水平,绘制ROC曲线,评价miR-103在2型糖尿病不同糖耐量水平患者中的诊断效能。结果2型糖尿病不同糖耐量水平三个病例组的血清中miR-103表达水平和正常对照组比较差异有统计学意义(P=0.015、P=0.046、P=0.001,P<0.05),且三个病例组间miR-103表达水平比较差异也有统计学意义(P=0.001、P=0.001、P=0.036,P<0.05)。结论血清标本miR-103可作为2型糖尿病诊断的新型生物学标志物,对不同糖耐量水平的诊断、鉴别及2型糖尿病治疗方案的选择具有一定的临床参考价值。

关键词：实时定量逆转录pcr 2型糖尿病不同糖耐量水平 miR-103 microRNA

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