检索结果-内蒙古大学图书馆

南方医科大学学报 2006年第1期26卷 62-65页

作者：张华华曾耀英何贤辉刑飞跃暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632

目的建立实时定量pcr检测小鼠胸腺及脾脏T淋巴细胞中信号结合T细胞受体删除环(sjTRECs)水平的方法,推测其中的初始T细胞的数目,评价胸腺功能,从而为胸腺功能研究及胸腺研究模型的建立提供研究依据和方法。方法提取小鼠胸腺和脾脏淋巴细... 详细信息

目的建立实时定量pcr检测小鼠胸腺及脾脏T淋巴细胞中信号结合T细胞受体删除环(sjTRECs)水平的方法,推测其中的初始T细胞的数目,评价胸腺功能,从而为胸腺功能研究及胸腺研究模型的建立提供研究依据和方法。方法提取小鼠胸腺和脾脏淋巴细胞基因组DNA,pcr扩增目的片段。纯化构建标准质粒的RAG2片段,构建标准重组质粒并鉴定。优化pcr体系后,实时定量pcr反应建立标准曲线,并检测不同品系(BALB／c和C57BL／6)成年小鼠胸腺及脾脏淋巴细胞sjTRECs含量。结果成功构建标准质粒。确定最适实时定量pcr反应条件后,在实时定量pcr中建立可信度高的标准曲线。建立的方法分析表明,这两个不同品系的sjTRECs含量统计学差异不显著。结论成功建立定量检测小鼠T淋巴细胞中sjTRECs含量从而推测其中的初始T细胞数目的方法,为胸腺功能研究及胸腺研究模型的建立提供研究依据和方法。

关键词：实时定量pcr T细胞受体删除环幼稚T细胞

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实时定量pcr检测细菌中bla_(CTX-M-14)基因

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中国抗生素杂志 2009年第8期34卷 505-508页

作者：王震钱凯吕建新邹立林陈栋孙宝昌温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室细胞与分子医学研究所温州325035 温州市疾病预防控制中心温州325000

目的探索实时定量pcr检测临床、环境细菌中blaCTX-M-14基因流行情况。方法将收集的65份标本先用ESBL表型确认试验及其KB琼脂扩散法初筛,然后通过菌落平板计数,实时定量pcr方法测出细菌blaCTX-M-14基因C(t)值,最终计算得到平均每个待测... 详细信息

目的探索实时定量pcr检测临床、环境细菌中blaCTX-M-14基因流行情况。方法将收集的65份标本先用ESBL表型确认试验及其KB琼脂扩散法初筛,然后通过菌落平板计数,实时定量pcr方法测出细菌blaCTX-M-14基因C(t)值,最终计算得到平均每个待测细菌中的blaCTX-M-14基因的单个拷贝数。结果从65份标本中分离得到4株产ESBLs的大肠埃希菌,实时定量pcr检测后得到四株细菌的blaCTX-M-14基因C(t)值依次为11.08,11.63,11.80,13.46,拷贝数分别为6.92×107copies/μl菌液,4.67×107copies/μl菌液,4.22×107copies/μl菌液,1.35×107copies/菌液,即1.05copies/细菌,1.90copies/细菌,2.92copies/细菌,1.10copies/细菌。结论细菌blaCTX-M-14基因拷贝数的高低与细菌多重耐药现象正相关,建立的实时定量pcr检测细菌中blaCTX-M-14基因的方法具有直观,快捷的优点,有助于检测临床及其环境中耐药菌blaCTX-M-14基因流行情况。

关键词：超广谱β-内酰胺酶 CTX—M-14 实时定量pcr

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实时定量pcr检测马传染性贫血病毒载量方法的建立和应用

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第12期25卷 1035-1039页

作者：梁华张晓燕沈弢童骁马燕李红梅相文华沈荣显邵一鸣中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心病毒与免疫研究室北京100050 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

目的建立实时定量pcr检测血浆病毒载量的方法,对马传染性贫血病毒(equine infectious anemia virus,EIAV)强毒株攻毒马和疫苗免疫攻毒马血浆中病毒载量进行了跟踪检测,探讨病毒载量和临床疾病状态的相关性.方法以EIAV强毒株LN40序列为标... 详细信息

目的建立实时定量pcr检测血浆病毒载量的方法,对马传染性贫血病毒(equine infectious anemia virus,EIAV)强毒株攻毒马和疫苗免疫攻毒马血浆中病毒载量进行了跟踪检测,探讨病毒载量和临床疾病状态的相关性.方法以EIAV强毒株LN40序列为标准,在gag保守区设计1对引物和Taqman探针,用于实时定量pcr扩增,用含扩增目的基因的体外转录RNA作标准品,获得标准曲线,对扩增样品进行准确定量.强毒株LN40直接攻毒,或者疫苗株DLV免疫马6个月后用强毒株LN40进行攻毒,跟踪检测攻毒马及免疫攻毒马血浆中EIAV载量情况.结果反应在101～109copies/ml之间具有良好的线性关系,反应的检出下限为10 copies/ml.强毒攻毒马出现发热并最终死亡,发热期间马血浆中EIAV载量与体温呈正相关,载量最高达107 copies/ml.免疫攻毒马未出现发热,其血浆EIAV载量的总体水平低于强毒攻毒马,攻毒后3个月低至10 copies/ml以下.结论成功建立了实时定量pcr检测血浆EIAV载量的方法,并证实了用实时荧光定量pcr检测EIAV病毒载量的方法来监测动物感染状态具有可行性,为EIAV致病机制研究和弱毒疫苗免疫保护机制的研究提供良好的技术平台.

关键词：马传染性贫血病毒实时定量pcr 病毒载量

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实时定量pcr评估金针菇的内参基因稳定性

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菌物学报 2021年第7期40卷 1700-1711页

作者：贾定洪王波四川省农业科学院土壤肥料研究所四川成都610066

金针菇在中国和日本是最受人喜爱的食用菌之一,在重要栽培食用菌中产销量排名第四。近年来,已在活性物质、分子标记及基因鉴定方面开展了大量工作,但未见有金针菇内参基因稳定性研究的报道,导致金针菇基因表达研究无内源参考基因稳定性... 详细信息

金针菇在中国和日本是最受人喜爱的食用菌之一,在重要栽培食用菌中产销量排名第四。近年来,已在活性物质、分子标记及基因鉴定方面开展了大量工作,但未见有金针菇内参基因稳定性研究的报道,导致金针菇基因表达研究无内源参考基因稳定性数据作为参考。本研究采用ge Norm、Norm Finder、Best Keeper和Ref Finder4种软件评估18S核糖体RNA(18S)、28S核糖体RNA(28S)、60S核糖体蛋白L18(Rpl18)、肌动蛋白1(Act1)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(Gapdh)、翻译延伸因子EF1-alpha(Ef1A)、DNA指导的RNA聚合酶亚基2(Rpb2)、细胞色素C氧化酶亚基1(Cox1)及细胞色素b(Cyt B)等9个内参基因的稳定性。综合分析结果显示,单个基因中Act1基因最稳定,Cyt B表达稳定性最差,但单个候选内参基因的稳定性不能够满足定量pcr实验要求;根据ge Norm软件分析结果,Cyt B和Rpb2是金针菇定量pcr的稳定内参基因组合。本研究首次评估了金针菇的内参基因稳定性,将为后续的基因表达研究提供参考。

关键词：实时定量pcr 金针菇稳定性基因表达

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实时定量pcr方法监测重组痘苗外源基因传代稳定性

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第1期28卷 16-19页

作者：王宁李媛媛徐静王芙戴凯凡刘颖罗兰邵一鸣刘建源北京生物制品研究所免疫研究室 100024 中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心

目的建立实时定量pcr方法以监测外源基因在不同重组痘苗代次中的稳定性。方法裂解法提取8个代次插入有HIV基因的重组痘苗DNA，用实时定量pcr的绝对和相对定量方法，研究不同代次基因组中插入的外源基因与痘苗基因组的数量关系。结果绝... 详细信息

目的建立实时定量pcr方法以监测外源基因在不同重组痘苗代次中的稳定性。方法裂解法提取8个代次插入有HIV基因的重组痘苗DNA，用实时定量pcr的绝对和相对定量方法，研究不同代次基因组中插入的外源基因与痘苗基因组的数量关系。结果绝对和相对定量方法均证明，在传代过程中，重组痘苗中的外源基因有缺失现象。结论建立的实时定量pcr方法可以特异、定量地分析外源基因在重组痘苗中的稳定性。

关键词：实时定量pcr 重组痘苗病毒传代稳定性

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实时定量pcr分析小鼠树突状细胞TLR4 mRNA表达及地塞米松的调节

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第3期24卷 221-224页

作者：张罕吕喆李冬妹何秀娟伍香玲胡永秀首都医科大学基础医学院免疫学系北京100069 北京红十字血液中心北京100088

目的:建立检测小鼠Toll样受体4(TLR4)mRNA表达水平的SYBR GreenⅠ实时定量pcr实验;观察小鼠骨髓源树突状细胞(DC)发育成熟过程中TLR4 mRNA表达水平的动态变化以及地塞米松(DEX)对DCTLR4 mRNA表达的影响。方法:(1)用细胞因子定向诱导的... 详细信息

目的:建立检测小鼠Toll样受体4(TLR4)mRNA表达水平的SYBR GreenⅠ实时定量pcr实验;观察小鼠骨髓源树突状细胞(DC)发育成熟过程中TLR4 mRNA表达水平的动态变化以及地塞米松(DEX)对DCTLR4 mRNA表达的影响。方法:(1)用细胞因子定向诱导的方法将小鼠骨髓细胞培养为DC;(2)构建pUCm-T/TLR4和pUCm-T/β-actin重组质粒,建立检测小鼠TLR4 mRNA水平的实时定量pcr实验;(3)用实时定量pcr技术对体外培养4、6、8、10、12d的DCTLR4 mRNA表达水平进行动态观察;(4)在DC培养体系中加入DEX,与常规培养DCTLR4 mRNA表达水平进行比较。结果:(1)从小鼠骨髓细胞中成功诱导培养了DC,经免疫磁珠纯化后其纯度可达90%以上;(2)建立了能精确分析小鼠TLR4 mRNA表达水平的SYBR GreenⅠ实时定量pcr实验;(3)在DC培养前期TLR4 mRNA表达水平变化不大,后期则明显升高;(4)DEX可使DCTLR4 mRNA表达增强。结论:小鼠骨髓源DCTLR4 mRNA表达水平与其发育成熟阶段密切相关;DEX促进DCTLR4 mRNA表达。

关键词：实时定量pcr 树突状细胞 TLR4 地塞米松

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实时定量pcr分析脂肪酸合酶在口腔鳞癌中的表达

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华西口腔医学杂志 2006年第6期24卷 551-554页

作者：王玉凤王晓毅高庆红杨晓勇王洪萍曾磊口腔生物医学工程教育部重点实验室四川大学四川成都610041 四川大学华西口腔医学院口腔颌面外科学教研室四川成都610041

目的利用实时定量pcr(RT-pcr)相对定量脂肪酸合酶(FAS)在口腔鳞癌、癌周以及正常口腔组织中的表达情况。方法切取口腔鳞癌患者新鲜手术标本的癌组织、癌周组织及正常组织,将组织切剪成碎块,提取细胞总RNA,经寡聚脱氧胸腺嘧啶逆转录,实... 详细信息

目的利用实时定量pcr(RT-pcr)相对定量脂肪酸合酶(FAS)在口腔鳞癌、癌周以及正常口腔组织中的表达情况。方法切取口腔鳞癌患者新鲜手术标本的癌组织、癌周组织及正常组织,将组织切剪成碎块,提取细胞总RNA,经寡聚脱氧胸腺嘧啶逆转录,实时定量pcr扩增,针对内参照GAPDH基因相对定量FAS的表达,比较FAS在3种组织中的表达。结果FAS在癌组织中高表达,19例患者癌组织中的FASmRNA表达水平皆高于正常组织,最高达16倍(P<0.001)。13例癌旁组织表达水平较正常组织高(P<0.001)。结论口腔鳞癌组织和正常组织中的FAS表达有显著差异。实时定量pcr方法简便、快速、高效,并能相对定量内源性脂肪酸合酶在口腔鳞癌组织中的表达。

关键词：口腔鳞状细胞癌实时定量pcr 脂肪酸合酶

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实时定量pcr检测大鼠神经激肽1受体mRNA方法的建立及评价

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吉林大学学报（医学版） 2011年第2期37卷 366-369页

作者：姚刚满玉红毛西京于挺敏吉林大学第二医院神经内科吉林长春130041

目的:建立检测大鼠神经激肽1(NK1)受体mRNA的SYBR GreenⅠ实时定量pcr方法,为检测大鼠NK1受体基因表达提供有效的手段。方法:提取大鼠中脑总RNA,扩增NK1受体基因片段,将其克隆入pMD-18T载体,制作NK1受体标准品质粒;应用SYBR GreenⅠ双... 详细信息

目的:建立检测大鼠神经激肽1(NK1)受体mRNA的SYBR GreenⅠ实时定量pcr方法,为检测大鼠NK1受体基因表达提供有效的手段。方法:提取大鼠中脑总RNA,扩增NK1受体基因片段,将其克隆入pMD-18T载体,制作NK1受体标准品质粒;应用SYBR GreenⅠ双链嵌合染料,对连续稀释的标准品质粒进行实时pcr分析,评价所建立方法的检测灵敏度;对pcr产物进行溶解曲线分析评价其特异性。结果:成功构建NK1受体标准品质粒,经酶切及测序鉴定,目的片段已插入pMD-18T载体;所建立的实时定量pcr方法的最低检测限度均为每反应102个拷贝,在每反应102～109拷贝范围内,荧光信号达到设定阈值所经历的循环数(Ct值)与起始模板浓度具有良好的线性关系,r=0.999。结论:所建立的检测大鼠NK1受体mRNA的SYBRGreenⅠ实时定量pcr方法具有敏感性高、特异性强和线性范围广等特点,适用于对大鼠各种组织NK1受体的大量样本检测。

关键词：实时定量pcr SYBR Green Ⅰ 神经激肽大鼠,Wistar

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实时定量pcr方法检测宫颈癌组织中SNAIL mRNA的表达

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四川大学学报（医学版） 2008年第3期39卷 414-417页

作者：赵乐陈葳李旭西安交通大学医学院第一附属医院实验医学中心

目的研究锌指转录抑制因子SNAIL mRNA在宫颈癌组织和宫颈癌细胞系中的表达情况并探讨其意义。方法采用实时定量pcr方法检测5例宫颈原位癌、55例宫颈浸润癌、14例癌旁组织和3种宫颈癌细胞系HeLa、SiHa、C33A中SNAIL mRNA的表达,并分析其... 详细信息

目的研究锌指转录抑制因子SNAIL mRNA在宫颈癌组织和宫颈癌细胞系中的表达情况并探讨其意义。方法采用实时定量pcr方法检测5例宫颈原位癌、55例宫颈浸润癌、14例癌旁组织和3种宫颈癌细胞系HeLa、SiHa、C33A中SNAIL mRNA的表达,并分析其与宫颈浸润癌各临床病理指标的相关性。结果正常宫颈组织、宫颈原位癌和宫颈浸润癌SNAIL mRNA的相对表达水平分别为0.01±0.01、0.08±0.05、0.09±0.07;宫颈原位癌和浸润癌均高于正常宫颈组织(P<0.05)。但在不同FIGO分期、病理分级、浸润深度及淋巴结转移情况之间SNAIL mRNA水平无明显变化。3种宫颈癌细胞系中均有SNAIL mRNA的表达,分别为0.06±0.06、0.18±0.05、0.09±0.08,以SiHa细胞系最高(P<0.05)。结论SNAIL基因在宫颈原位癌和浸润癌中高表达,提示SNAIL可能与宫颈癌的发生和发展有关。

关键词：宫颈癌锌指转录抑制因子SNAIL 实时定量pcr

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实时定量pcr法分析2型糖尿病患者肠道乳酸杆菌菌种数量的改变

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世界华人消化杂志 2012年第15期20卷 1359-1365页

作者：刘婷婷蔡德鸿南方医科大学附属珠江医院内分泌科广东省广州市510282

目的:明确2型糖尿病患者与正常对照人群比较是否存在总乳酸杆菌及其具体菌种嗜酸乳杆菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌数目的差异,以及探索乳酸杆菌与血糖、血脂等代谢指标是否相关.方法:选取2型糖尿病患者50... 详细信息

目的:明确2型糖尿病患者与正常对照人群比较是否存在总乳酸杆菌及其具体菌种嗜酸乳杆菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌数目的差异,以及探索乳酸杆菌与血糖、血脂等代谢指标是否相关.方法:选取2型糖尿病患者50人、正常对照者30人作为研究对象,两组性别、年龄、BMI相匹配.检测糖尿病患者空腹血糖、餐后2h血糖、血脂、C反应蛋白等指标,并收集糖尿病患者及对照者粪便提取细菌总DNA,通过实时荧光定量pcr方法测定目标细菌的拷贝数.结果:2型糖尿病组肠道乳酸杆菌(P<0.001)及嗜酸乳杆菌(P<0.001)、保加利亚乳杆菌(P<0.001)、干酪乳杆菌(P=0.008)、鼠李糖乳杆菌(P<0.001)显著高于对照组,且乳酸杆菌与低密度脂蛋白胆固醇显著负相关(P=0.04).结论:2型糖尿病患者肠道总乳酸杆菌及其某些具体菌种数量增多,乳酸杆菌数量的改变对血脂也存在影响.通过饮食调节肠道乳酸杆菌含量可能有助于改善糖尿病、高脂血症等代谢性疾病.

关键词：实时定量pcr 2型糖尿病乳酸杆菌

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