检索结果-内蒙古大学图书馆

实验生物学报 2003年第1期36卷 32-36页

作者：王海邓琳陈苏红王升启曹亚中南大学湘雅医学院肿瘤研究所长沙410078 军事医学科学院二所北京100000

EBV在多种肿瘤中存在,并在相关肿瘤的发病中起一定的作用.本文应用实时定量pcr方法检测鼻咽癌与健康对照全血EBV拷贝数.结果表明在73例鼻咽癌病人与83例正常对照中,NPC组中EBV阳性率为46.6%,对照组阳性率为13.3%.对照组平均EB病毒拷贝数... 详细信息

EBV在多种肿瘤中存在,并在相关肿瘤的发病中起一定的作用.本文应用实时定量pcr方法检测鼻咽癌与健康对照全血EBV拷贝数.结果表明在73例鼻咽癌病人与83例正常对照中,NPC组中EBV阳性率为46.6%,对照组阳性率为13.3%.对照组平均EB病毒拷贝数为3.9×104拷贝/μgDNA,高于鼻咽癌组(1.7×105拷贝/μgDNA).全血EBV的感染与鼻咽癌的发生相关,而裂解状态EBV在细胞转化过程中的作用可能更大.应用实时定量pcr进行全血EBV的检测可用于鼻咽癌的分子诊断.

关键词：实时定量pcr方法检测鼻咽癌病人全血EB病毒拷贝数实验研究

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应用巢式-实时定量pcr方法检测慢性乙型肝炎患者PBMC中HBV cccDNA

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肝脏 2011年第5期16卷 401-404页

作者：陈延平孟存英徐光华冯继红王平忠白雪帆延安大学附属医院 716000 第四军医大学唐都医院全军感染病防治中心

乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA（HBV cccDNA）是HBV复制的原始模板，是HBV持续感染的关键因素。外周血单核细胞（PBMc）中HBV cccDNA的存在状态及动态变化成为研究HBV肝外分布及复制问题的热点。诸多研究证实，PBMC中存在HBVDNA，但是否... 详细信息

乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA（HBV cccDNA）是HBV复制的原始模板，是HBV持续感染的关键因素。外周血单核细胞（PBMc）中HBV cccDNA的存在状态及动态变化成为研究HBV肝外分布及复制问题的热点。诸多研究证实，PBMC中存在HBVDNA，但是否存在HBV复制模板HBV cccDNA及复制过程，却有不同意见。

关键词： cccDNA HBV复制实时定量pcr方法慢性乙型肝炎患者 PBMC HBV持续感染外周血单核细胞检测

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一种细胞中HBV闭合环状DNA含量的快速实时定量pcr方法

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中国药理通讯 2005年第3期22卷 65-65页

作者：卞广兴周侠吕秋军军事医学科学院放射医学研究所药理毒理室北京100850

目的基于实时实时定量pcr技术建立一种快速测定HepG2．2．15细胞中HBV闭合环状DNA（HBV cccDNA）的方法。方法与结果利用正常HBV基因组松驰环状DNA（HBV rcDNA）与HBV cccDNA在结构上的差异，即HBV rcDNA负链有缺口而HBV cccDNA是完... 详细信息

目的基于实时实时定量pcr技术建立一种快速测定HepG2．2．15细胞中HBV闭合环状DNA（HBV cccDNA）的方法。方法与结果利用正常HBV基因组松驰环状DNA（HBV rcDNA）与HBV cccDNA在结构上的差异，即HBV rcDNA负链有缺口而HBV cccDNA是完整闭合环状DNA的特点而设计-对跨过此缺口的引物，从而区分HBV rcDNA与HBV cccDNA；同时利用实时定量pcr技术作为定量的手段，定量检测HepG2．2．15细胞中的HBV cccD—NA的浓度。由HBV基因组中扩增相应的片段M，以此片段构建pGEM／M—T质粒作为标准品模板。

关键词：实时定量pcr方法 DNA含量 HBV HepG2.2.15细胞环状闭合实时定量pcr技术种细胞 cccDNA

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梭子蟹肌孢虫SYBR Green I实时定量pcr检测方法的建立与应用

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南方水产科学 2017年第6期13卷 22-29页

作者：陈甜甜房文红王元李新苍赵姝周俊芳农业部东海渔业资源开发利用重点实验室中国水产科学研究院东海水产研究所上海200090 上海海洋大学水产与生命学院上海201306

梭子蟹肌孢虫(Ameson portunus)是感染三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)的常见病原之一,该研究以其SSU rRNA基因为靶标建立了SYBR Green I实时定量pcr检测方法。结果显示:该方法扩增效率为101.45%,检测灵敏度下限可达2.0×10~... 详细信息

梭子蟹肌孢虫(Ameson portunus)是感染三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)的常见病原之一,该研究以其SSU rRNA基因为靶标建立了SYBR Green I实时定量pcr检测方法。结果显示:该方法扩增效率为101.45%,检测灵敏度下限可达2.0×10~1拷贝·μL^(-1),特异性、组内重复性和组间重复性均好。利用该荧光定量pcr方法对一批来自"牙膏病"流行区的养殖三疣梭子蟹样品进行检测,梭子蟹肌孢虫检出率为82.35%。检测结果显示,活蟹的每毫克肌肉平均带虫量大幅低于死蟹,表明该地区梭子蟹的死亡与肌孢虫的感染密切相关,而且,当梭子蟹肌孢虫载量达到1.0×10~9拷贝·mg^(-1)时三疣梭子蟹存在暴发疾病甚至死亡的风险。另外,通过对比检测发现,梭子蟹肌孢虫套式pcr方法对这批样品的检出率为64.71%,表明该研究建立的荧光定量pcr方法具有更高的灵敏度。

关键词：梭子蟹肌孢虫三疣梭子蟹实时定量pcr方法 SYBR Green I

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血液中检测人巨细胞病毒的荧光定量pcr方法建立及评估

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中国输血杂志 2015年第6期28卷 637-641页

作者：李佳凌巫岳龙邹礼乐蔡延森何苗泸州医学院形态实验室四川泸州646000 泸州医学院组织学与胚胎学教研室泸州医学院医学生物学与遗传学教研室中国医学科学院北京协和医学院输血研究所

目的建立2种实时荧光定量pcr方法,用于在血液样本中检测有可能威胁血液安全的人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)。方法根据Gen Bank中HCMV的MIE基因保守序列的分析结果,分别建立基于SYBR Green和Taq Man探针的2种实时定量pcr检... 详细信息

目的建立2种实时荧光定量pcr方法,用于在血液样本中检测有可能威胁血液安全的人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)。方法根据Gen Bank中HCMV的MIE基因保守序列的分析结果,分别建立基于SYBR Green和Taq Man探针的2种实时定量pcr检测方法,同时用这2种方法对来自血液制品厂的血浆进行检测。结果基于SYBR Green的实时定量pcr检测方法,得到的熔解曲线峰单一,建立的2种实时定量pcr方法对于HCMV的DNA具有高度特异性和灵敏度,检测下限均为50 copies/m L,并且具有较好的批间和批内重复性。结论应用本研究建立的实时荧光定量pcr方法对献浆人群血浆样品进行HCMV检测,2种方法检测结果一致,证明该方法可用于在血液样本中检测HCMV。

关键词：人巨细胞病毒实时定量pcr方法血液安全

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Taqman MGB荧光pcr检测生殖支原体

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中华皮肤科杂志 2012年第5期45卷 349-351页

作者：向志尹跃平施美琴王红春韩燕王宝玺陈祥生中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所南京210042

目的参照文献建立一种快速、灵敏、准确的生殖支原体（Mg）的检测方法，并应用该方法调查生殖支原体在广西贺州暗娼中的流行情况。方法参考文献中以生殖支原体Pa基因为靶基因设计的引物和Taqman MGB探针进行实时定量pcr，以生殖支原体... 详细信息

目的参照文献建立一种快速、灵敏、准确的生殖支原体（Mg）的检测方法，并应用该方法调查生殖支原体在广西贺州暗娼中的流行情况。方法参考文献中以生殖支原体Pa基因为靶基因设计的引物和Taqman MGB探针进行实时定量pcr，以生殖支原体标准菌株G37制备标准品，对广西贺州暗娼人群的宫颈拭子标本进行生殖支原体的检测。结果建立的Taqman MGB实时定量pcr方法检测的线性范围好（1×10—10^6拷贝／μl，R^2=0．993，重复性好，（批内变异系数=0．7％，批间变异系数：1．09％），敏感性高，检测限（LOD）为10拷贝／μl，定量限（LOQ）为50拷贝／μl。采用该方法检测404份拭子标本，生殖支原体的检出率为12．1％。结论针对生殖支原体Pa基因的TaqmanMGB实时pcr可以快速、灵敏地对生殖支原体进行定性及定量的检测。

关键词： TaqmanMGB实时pcr 生殖支原体检测限荧光pcr 实时定量pcr方法宫颈拭子标本参考文献暗娼人群

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实时定量聚合酶链反应在鉴别诊断结节病和结核病中的应用

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中华结核和呼吸杂志 2009年第4期32卷 311-312页

作者：周瑛李惠萍李秋红郑卉张容轩陈岗同济大学附属上海市肺科医院呼吸科 200433 同济大学附属上海市肺科医院病理科 200433

结节病与结核病的组织病理学均属于肉芽肿病变，当结核病标本未见干酪样坏死（即增殖型结核病），且抗酸染色阴性时，两种疾病的鉴别诊断非常困难。为了解决这一难题，上海市肺科医院呼吸科曾建立一种实时定量pcr方法，通过MTBDNA进行... 详细信息

结节病与结核病的组织病理学均属于肉芽肿病变，当结核病标本未见干酪样坏死（即增殖型结核病），且抗酸染色阴性时，两种疾病的鉴别诊断非常困难。为了解决这一难题，上海市肺科医院呼吸科曾建立一种实时定量pcr方法，通过MTBDNA进行定量分析，鉴别结节病和抗酸染色阴性的增殖型结核病。为验证该方法的可靠性，我们在前期研究的基础上扩大样本量，检测104例经病理证实的结节病标本，并设定结节病和结核病鉴别诊断的定量标准。

关键词：实时定量聚合酶链反应鉴别诊断结核病结节病实时定量pcr方法上海市肺科医院抗酸染色肉芽肿病变

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生理状态下外周血白细胞IL-2基因表达的荧光定量pcr检测

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中国运动医学杂志 2005年第4期24卷 457-459,475页

作者：王茹陈佩杰董强刚上海体育学院运动科学系上海200438

目的:建立白细胞介素2(IL-2)基因表达的绝对定量实时pcr检测技术。方法:应用实时定量pcr方法检测25名健康运动员中IL-2mRNA的表达。主要结果和结论:应用实时定量pcr方法能够对健康受试者外周血白细胞自发性IL-2mRNA表达进行定量分析,相... 详细信息

目的:建立白细胞介素2(IL-2)基因表达的绝对定量实时pcr检测技术。方法:应用实时定量pcr方法检测25名健康运动员中IL-2mRNA的表达。主要结果和结论:应用实时定量pcr方法能够对健康受试者外周血白细胞自发性IL-2mRNA表达进行定量分析,相关系数r>0.99。

关键词：外周血白细胞荧光定量pcr检测基因表达生理状态实时定量pcr方法 IL-2mRNA pcr检测技术 mRNA表达白细胞介素健康受试者绝对定量定量分析相关系数运动员自发性

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GAPDH mRNA在支气管肺泡灌洗液和血清中表达的差异

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江苏医药 2012年第17期38卷 2088-2089页

作者：张钰唐亮毛旻无锡市第九人民医院呼吸病科江苏省214062 上海肺科医院肿瘤科

我国肺癌发病呈逐年上升趋势，目前比较成熟的基因检测是GAPDHmRNA的检测11]，我们采用实时定量pcr方法，针对GAPDHmRNA扩增测定间接反映总的游离RNA水平，建立一种新的游离RNA测定的方法，探讨通过肺泡灌洗液（BALF）和血清中的游离RN... 详细信息

我国肺癌发病呈逐年上升趋势，目前比较成熟的基因检测是GAPDHmRNA的检测11]，我们采用实时定量pcr方法，针对GAPDHmRNA扩增测定间接反映总的游离RNA水平，建立一种新的游离RNA测定的方法，探讨通过肺泡灌洗液（BALF）和血清中的游离RNA测定，再结合细胞学检测结果，探讨是否能提高肺癌的诊断率。

关键词：支气管肺泡灌洗液血清实时定量pcr方法游离RNA 基因检测 RNA扩增检测结果测定

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通过蛋白质组和转录水平研究寡孢节丛孢细胞壁相关蛋白

通过蛋白质组和转录水平研究寡孢节丛孢细胞壁相关蛋白

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作者：吴恒云南大学

学位级别：硕士

食线虫真菌寡孢节丛孢(Arthrobotrys oligospora)是研究食线虫真菌与宿主线虫相互作用最为深入的模式菌株。在线虫诱导下可发生从腐生到寄生的生活史转变，菌丝特化形成粘性三维菌网，然后用粘性三维菌网捕捉线虫，最后菌丝从体壁侵入... 详细信息

食线虫真菌寡孢节丛孢(Arthrobotrys oligospora)是研究食线虫真菌与宿主线虫相互作用最为深入的模式菌株。在线虫诱导下可发生从腐生到寄生的生活史转变，菌丝特化形成粘性三维菌网，然后用粘性三维菌网捕捉线虫，最后菌丝从体壁侵入线虫体内将线虫消解。本研究以寡孢节丛孢细胞壁为研究对象，通过蛋白质组学和实时定量pcr的方法研究细胞壁相关蛋白与其生活史转变中的形态发生和侵染机制的关系。\n 首先通过线虫的匀浆液诱导寡孢节丛孢产生大量粘性三维菌网，通过机械破碎和低速离心分离普通菌丝和粘性三维菌网的细胞壁，使其不含完整细胞和细胞质成分，通过表面活性剂和酶的顺序处理，分步将细胞壁蛋白从细胞壁骨架（葡聚糖和几丁质）上解离下来。然后通过同重同位素相对与绝对定量（Isobaric Tags for Relative and AbsoluteQuantitation，iTRAQ）和LC/MS对细胞壁蛋白质进行分析和鉴定得到95个细胞壁蛋白，另外通过生物信息学的方法分别从寡孢节丛孢基因组数据库和假定蛋白数据库中获得35个磷脂酰肌醇(GPI)保守序列的蛋白和94个细胞壁形态学相关蛋白。最后应用Real-Time pcr对这些细胞壁相关蛋白在两种生活阶段下的转录水平进行分析。\n 分析结果揭示了细胞壁上存在一系列与侵染线虫有关的毒力蛋白，如粘附素、丝氨酸蛋白酶等。另外，通过对实验结果的分析说明了糖基水解酶在寡孢节丛孢捕食器官形成过程中发挥着重要作用。捕器上的粘附素可能有两种功能:黏住线虫和含有各种分泌的毒力蛋白混合物。本研究首次以细胞壁为研究对象鉴定了食线虫真菌寡孢节丛孢侵染宿主线虫过程中捕捉和侵染相关的细胞壁蛋白成员。\n 本论文的创新性主要体现为:\n 1)首次分离获得寡孢节丛孢细胞壁，并通过表面活性剂和酶顺序处理获得细胞壁蛋白质;\n 2)通过蛋白组学和实时定量pcr的方法研究寡孢节丛孢两种生活史下细胞壁相关蛋白的表达和转录水平，结果揭示了细胞壁上存在一系列与捕捉和侵染线虫相关的毒力蛋白，为改造食线虫真菌，构建高效线虫生防菌株奠定基础。

关键词：食线虫真菌寡孢节丛孢细胞壁相关蛋白蛋白质组实时定量pcr方法形态发生侵染机制

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