检索结果-内蒙古大学图书馆

建立实时定量pcr检测急性早幼粒细胞白血病PML／RARα融合基因转录本

中华医学遗传学杂志 2008年第3期25卷 319-321页

作者：林江韩兰秀钱军王雅丽钱震杨小飞盛晓静江苏大学附属人民医院实验血液学重点实验室江苏省镇江市212002 江苏大学附属人民医院血液科江苏省镇江市212002

目的建立实时定量pcr（real—time quantitative pcr，RQ-pcr）法检测急性早幼粒细胞白血病（acute promyelocytic leukemia，APL）PML／RARa融合基因转录本，评价其在APL患者诊断和微小残留病（minimal residual disease，MRD）监测中的意义。方法设计TaqMan探针和引物，建立RQ-pcr法对长型（L-form）、短型（S-form）、变异型（V—form）不同类型PML／RARα阳性模板进行扩增，并检测6例APL患者PML／RARα融合基因转录本含量。结果RQ-pcr法最低可检测到10个拷贝／μE的阳性模板，但重复性较差，而10^8～10^2拷贝／αL阳模的重复性良好，正常对照无扩增信号。6例初诊APL患者不同类型PML／RARa融合基因转录本绝对含量为4．27×10^3～3．36×10^5拷贝／50ng（中位4．33×10^4拷贝／50ng），ABL纠正后的相对含量为29．38％～600．53％（中位48．12％）。1例患者诱导缓解后PML／RARa融合基因转录本下降，复发时又明显升高。结论RQ-pcr方法敏感、可靠，可用于APL患者的诊断和MRD监测。

关键词：实时定量pcr 急性早幼粒细胞白血病融合基因

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巨细胞病毒启动子序列检测的复合实时定量pcr方法的建立

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中国药理学与毒理学杂志 2014年第2期28卷 296-301页

作者：苗玉发王三龙周晓冰霍艳耿兴超吕建军汪巨峰李波中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心北京100176

目的：建立和验证用于巨细胞病毒（CMV）启动子序列检测的复合实时定量 pcr 方法。方法以 CMV 启动子序列和小鼠管家基因β肌动蛋白基因的 cDNA 序列为模板分别设计探针和引物，用 SYBR GreenⅠ熔解曲线分析引物扩增的特异性。对反应体... 详细信息

目的：建立和验证用于巨细胞病毒（CMV）启动子序列检测的复合实时定量 pcr 方法。方法以 CMV 启动子序列和小鼠管家基因β肌动蛋白基因的 cDNA 序列为模板分别设计探针和引物，用 SYBR GreenⅠ熔解曲线分析引物扩增的特异性。对反应体系进行系统优化，并验证方法的灵敏度、线性和重复性。结果针对 CMV 启动子序列的上游引物为5′AGACTTGGAAATCCCCGTGAGT3′，下游引物为5′CG-TATTAGTCATCGCTATTACCATGGT3′，探针为5′AACCGCTATCCACGCCCATTGATG3′。针对β肌动蛋白基因的上游引物为5′CCTGAGGCTCTTTTCCAGCC3′，下游引物为5′TAGAGGTCTTTACGGATGT-CAACGT3′，探针为5′TCCTTCTTGGGTATGGAATCCTGTGGC3′。用 CMV 启动子标准品制作的标准曲线，反应效率为100％，相关系数为0．9978，定量范围达到1．5＆#215;102～1．5＆#215;107拷贝，反应体系灵敏度为30拷贝。结论建立了检测 CMV 启动子序列的复合实时定量 pcr 方法。

关键词：实时定量pcr CMV启动子 β肌动蛋白基因

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A组轮状病毒实时定量pcr检测方法的研究进展

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病毒学报 2013年第6期29卷 651-654页

作者：郭延青李丹地段招军中国疾病控制预防控制中心病毒病预防控制所病毒性腹泻室北京102206

A组轮状病毒是引起婴幼儿急性肠胃炎的最主要病原之一。目前已建立的轮状病毒检测方法有电镜检测、酶免疫法、反转录pcr法、实时定量pcr法。实时定量pcr法与其他方法相比具有特异性强、敏感度高、可以分型、定量准确等优势。本文就实时... 详细信息

A组轮状病毒是引起婴幼儿急性肠胃炎的最主要病原之一。目前已建立的轮状病毒检测方法有电镜检测、酶免疫法、反转录pcr法、实时定量pcr法。实时定量pcr法与其他方法相比具有特异性强、敏感度高、可以分型、定量准确等优势。本文就实时定量(Real-time)pcr技术应用于A组RV检测的研究进展进行简单概述。

关键词： A组轮状病毒实时定量pcr

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水稻虫害诱导相关基因实时定量pcr中内参基因的选择

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植物学报 2013年第2期48卷 184-191页

作者：李冉李建彩周国鑫娄永根浙江大学昆虫科学研究所杭州310029

实时定量pcr技术广泛应用于植物功能基因转录水平变化的研究,选择合适的内参基因进行相对定量分析是实验结果准确的关键因素。通过分析5个常用的内参基因(eEF-1α、18SrRNA、25SrRNA、Actin和UBQ5)在水稻(Oryza sativa)经过各种处理后... 详细信息

实时定量pcr技术广泛应用于植物功能基因转录水平变化的研究,选择合适的内参基因进行相对定量分析是实验结果准确的关键因素。通过分析5个常用的内参基因(eEF-1α、18SrRNA、25SrRNA、Actin和UBQ5)在水稻(Oryza sativa)经过各种处理后表达的稳定性,结果表明,水稻经过机械损伤处理后eEF-1α基因的表达最稳定;二化螟处理后25SrRNA基因的表达最为稳定;稻纵卷叶螟处理后Actin基因的表达最稳定;两种刺吸式口器昆虫褐飞虱和白背飞虱危害后,UBQ5基因的表达最稳定。同时,利用OsHI-LOX基因在不同处理后的表达来评价这些内参基因。研究结果为水稻虫害诱导实时定量pcr分析中内参基因的选择提供了理论依据。

关键词：虫害诱导实时定量pcr 内参基因水稻

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利用实时定量pcr对瘤胃甲酸甲烷杆菌定量方法的建立与应用

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中国农业科学 2006年第1期39卷 161-169页

作者：赵玉华王加启中国农业科学院畜牧研究所反刍动物营养研究室中国农业科学院畜牧研究所反刍动物营养研究室北京100094

目的解决传统微生物评价方法存在的弊端,寻找快速、准确、灵敏的瘤胃微生物评价的新方法。方法利用实时定量pcr技术,以16SrDNA为靶序列,建立了瘤胃甲酸甲烷杆菌(Methanobacteriumformicicum)的分子定量方法。结果采用本文所设计的引物... 详细信息

目的解决传统微生物评价方法存在的弊端,寻找快速、准确、灵敏的瘤胃微生物评价的新方法。方法利用实时定量pcr技术,以16SrDNA为靶序列,建立了瘤胃甲酸甲烷杆菌(Methanobacteriumformicicum)的分子定量方法。结果采用本文所设计的引物、探针以及相应的pcr反应体系,检测极限可达到30拷贝(15个甲酸甲烷杆菌),与传统检测方法相比要更为迅速、灵敏。采用实时定量pcr技术所测得的细菌数量与采用传统的最大或然数记数法所测的细菌数量具有很高的相关性(r=0.957,P<0.01),表明采用实时定量pcr方法能够准确反映瘤胃微生物数量的变化。利用所建立的方法对利鲁杂交肉牛和荷斯坦奶牛瘤胃液中甲酸甲烷杆菌进行了定量检测。结果表明,利鲁杂交肉牛瘤胃液中的甲酸甲烷杆菌浓度是荷斯坦奶牛的5.6倍。结论利用实时定量pcr技术建立的瘤胃甲酸甲烷杆菌的分子定量方法能够准确反映瘤胃微生物数量的变化。

关键词：实时定量pcr 瘤胃甲酸甲烷杆菌定量

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转基因抗虫棉花重组DNA在土壤中分布的实时定量pcr分析

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农业环境科学学报 2012年第10期31卷 1933-1940页

作者：李刚修伟明赵建宁王丽娟王慧刘红梅宋晓龙杨殿林农业部环境保护科研监测所农业部转基因生物生态环境安全监督检验测试中心天津300191 中国农业科学院武清转基因生物农田生态系统影响野外科学观测试验站天津301701 内蒙古师范大学生命科学与技术学院呼和浩特010022

根据转基因抗虫棉花35S启动子与Cry1A(c)基因以及35S启动子与nptⅡ基因之间的构建特异性序列分别设计引物和探针,建立荧光定量pcr检测方法,并对采集于3个生长时期(播种后40、50d和60d)的不同根区(根表、根际和非根际)土壤中35S-Cry1A和3... 详细信息

根据转基因抗虫棉花35S启动子与Cry1A(c)基因以及35S启动子与nptⅡ基因之间的构建特异性序列分别设计引物和探针,建立荧光定量pcr检测方法,并对采集于3个生长时期(播种后40、50d和60d)的不同根区(根表、根际和非根际)土壤中35S-Cry1A和35S-nptⅡ片段进行定量分析。结果表明,所建立的荧光定量pcr方法最低能够检测到10个拷贝数的外源重组DNA片段,定量标准曲线相关系数均达到0.998以上,具有很好的重复性。实时定量pcr分析表明,同一生长时期不同根区土壤中35S-Cry1A和35S-nptⅡ片段拷贝数变化情况均为根表土>根际土>非根际土,即转基因抗虫棉花重组DNA片段主要分布于根表土壤中,其次为根际土壤和非根际土壤。在60d生长期内,土壤中35S-Cry1A和35S-nptⅡ片段的拷贝数随生长时期的推进均呈现上升趋势,其分布范围逐渐扩大。土壤中35S-nptⅡ片段拷贝数均高于同一生长时期相应根区中35S-Cry1A片段的拷贝数。转基因抗虫棉花对环境可能存在潜在影响。

关键词：转基因抗虫棉花重组DNA 实时定量pcr 根盒法分布

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多重胁迫下玉米实时定量pcr内参基因的筛选与验证

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植物生理学报 2015年第9期51卷 1457-1464页

作者：姜婷苏乔安利佳大连理工大学生命科学与技术学院辽宁大连116024

实时定量pcr(qpcr)技术广泛应用于基因表达量的检测,为了保证其结果的准确性,选择合适的内参基因是必不可少的环节。本研究分析了11个玉米候选内参基因的稳定性,其中7个是常用内参基因(GAPDH、ACT、EF-1α、γ-TUB、18S rRNA、5S rRNA和... 详细信息

实时定量pcr(qpcr)技术广泛应用于基因表达量的检测,为了保证其结果的准确性,选择合适的内参基因是必不可少的环节。本研究分析了11个玉米候选内参基因的稳定性,其中7个是常用内参基因(GAPDH、ACT、EF-1α、γ-TUB、18S rRNA、5S rRNA和U6 snRNA),4个是microRNA(zma-miR171a、zma-miR171b、zma-miR172和zma-miR159a/b)。通过计算11个基因在正常生长条件与干旱、盐和碱共胁迫条件下的循环阈值(Ct),输入软件geNorm、Norm Finder和Best Keeper中进行分析。结果表明,microRNA比其他候选内参基因稳定,其中zma-miR172和zma-miR171a最稳定,18S rRNA最不稳定。另外,选择zma-miR397a及其靶基因LAC4对候选内参基因进行验证,发现不合适的内参基因可能会导致错误的结果。

关键词：玉米内参基因实时定量pcr 干旱胁迫盐胁迫碱胁迫

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肺癌组织中白介素-8基因表达的实时定量pcr研究

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肿瘤 2004年第1期24卷 3-5页

作者：苏建中董强刚黄进肃包国良上海市胸部肿瘤研究所上海200030 上海市胸科医院肺内科

目的　建立白介素 8(IL 8)基因表达的绝对定量实时pcr检测技术。方法　应用实时定量pcr和ELISA方法检测 2株人肺癌细胞H4 6 0及A5 4 9中IL 8mRNA表达及蛋白分泌。同时对 9例正常肺及 4 4例非小细胞肺癌 (NSCLC)组织中IL 8mRNA进行分析... 详细信息

目的　建立白介素 8(IL 8)基因表达的绝对定量实时pcr检测技术。方法　应用实时定量pcr和ELISA方法检测 2株人肺癌细胞H4 6 0及A5 4 9中IL 8mRNA表达及蛋白分泌。同时对 9例正常肺及 4 4例非小细胞肺癌 (NSCLC)组织中IL 8mRNA进行分析。结果　应用实时定量pcr方法能够对肺癌细胞中IL 8mRNA拷贝数进行定量分析 ,IL 8表达值与蛋白分泌量呈正相关。正常肺组织中IL 8基因表达值为 4 .87± 1.6 9(单位 :拷贝数 / 10 4GAPDH拷贝 ) ,肺癌组织为 17.0 4± 2 3.96 ,两组间差异有统计学显著意义 (P =0 .0 0 2 )。若以正常肺组织均数的 2倍 (9.74 )和 4倍 (19.4 8)分别作为IL 8阳性表达及过表达的界限 ,5 2 .3% (2 3/ 4 4例 )的肺癌组织IL 8表达增高 ,其中IL 8阳性表达率为 2 9.5 % (13/ 4 4例 ) ,过表达率为 2 2 .7%(10 / 4 4例 )。统计分析显示 ,在女性、鳞癌和晚期肿瘤 (III期及T2 ～T4)中IL 8过表达率明显增高 ,具有统计学显著差异 (P <0 .0 5 )。结论　应用实时定量pcr技术能够对IL 8表达水平进行定量分析 ,IL 8过表达与患者性别、组织类型和病期密切相关。

关键词：肺癌白介素-8 基因表达实时定量pcr 癌组织

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猕猴桃6个LOX基因家族成员实时定量pcr引物特异性的检测与应用

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中国生物化学与分子生物学报 2008年第3期24卷 262-267页

作者：张波徐昌杰陈昆松浙江大学果实分子生理与生物技术实验室农业部园艺植物生长发育与生物技术重点开放实验室浙江杭州310029

从基因家族成员的视角开展基因表达研究是阐明基因功能的重要组成内容,实时定量pcr(Qpcr)技术是分析基因表达的有效手段.以猕猴桃脂氧合酶(LOX)基因家族6个成员为对象,分析了引物特异性的检测方法.该方法整合了熔点曲线分析、琼脂糖电... 详细信息

从基因家族成员的视角开展基因表达研究是阐明基因功能的重要组成内容,实时定量pcr(Qpcr)技术是分析基因表达的有效手段.以猕猴桃脂氧合酶(LOX)基因家族6个成员为对象,分析了引物特异性的检测方法.该方法整合了熔点曲线分析、琼脂糖电泳、交叉pcr扩增和pcr产物测序等分析手段,有效消除其它成员的交叉扩增干扰,为利用Qpcr检测基因家族成员表达提供了特异、准确与可行的途径.

关键词：猕猴桃脂氧合酶基因家族成员引物特异性实时定量pcr

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基于vhhP2基因的SYBR Green I实时定量pcr检测哈维氏弧菌方法的建立

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中国水产科学 2014年第3期21卷 611-620页

作者：廖梅杰张正荣小军王印庚刘智超栾晶李彬王岚陈贵平中国水产科学研究院黄海水产研究所、农业部海洋渔业可持续发展重点实验室山东青岛266071 山东省出入境检验检疫局山东青岛266001

根据哈维氏弧菌(Vibro harveyi)溶血素基因vhhP2的保守序列设计特异性引物,建立了SYBR Green I实时定量pcr检测哈维氏弧菌的方法。构建含vhhP2基因的重组质粒作为标准品,进行SYBR Green I实时定量pcr,在Tm为60℃时,扩增产物的熔解曲线... 详细信息

根据哈维氏弧菌(Vibro harveyi)溶血素基因vhhP2的保守序列设计特异性引物,建立了SYBR Green I实时定量pcr检测哈维氏弧菌的方法。构建含vhhP2基因的重组质粒作为标准品,进行SYBR Green I实时定量pcr,在Tm为60℃时,扩增产物的熔解曲线仅有一个特异峰,扩增所得标准曲线为y=–3.331x+37.48,相关系数为0.998,扩增效率为1,最低可检测到7个拷贝。实验结果表明该检测技术具有较高的特异性、敏感性和重复性,对哈维氏弧菌病的快速诊断和流行病学调查有重要意义。

关键词： vhhP2基因哈维氏弧菌实时定量pcr SYBR Green I

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