检索结果-内蒙古大学图书馆

林业科学 2015年第5期51卷 135-144页

作者：成龙平胡海涛郭卫东杨莉王长春杨玲浙江师范大学化学与生命科学学院金华321004

【目的】实时定量pcr结果的精确性在很大程度上取决于选择的内参基因的稳定性。通过评估候选管家基因的表达稳定性,筛选出用于牛奶子研究的最佳内参基因。【方法】设计简并引物从牛奶子中克隆12个潜在的内参基因片段,包括14-3-3、18S核... 详细信息

【目的】实时定量pcr结果的精确性在很大程度上取决于选择的内参基因的稳定性。通过评估候选管家基因的表达稳定性,筛选出用于牛奶子研究的最佳内参基因。【方法】设计简并引物从牛奶子中克隆12个潜在的内参基因片段,包括14-3-3、18S核糖体RNA(18SrRNA)、β-actin(Actin)、延长因子1-α(EF1-α)、真核起始因子4A(e IF4A)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、RNA聚合酶-Ⅱ(RPⅡ)、60S核糖体蛋白(RPL7)、翻译延长因子2(TEF2)、泛素连接酶E2(UBCE)、泛素(UBQ)和泛素延伸蛋白5(UBQ5)。采集牛奶子5个不同器官(根、茎、叶、花和红果)、4个成熟期的果实(绿果、黄果、深粉果和完全成熟的红果)、2种激素(脱落酸、赤霉素)处理4个时间点的绿果、热处理4个时间点的离体叶片、幼苗盐胁迫2个时间点的根茎叶,应用实时荧光定量pcr技术检测12个内参基因在各样品中的表达情况,采用基于CT值的ge Norm、Normfinder和Best Keeper及CT比较4种算法评价这些内参基因的稳定性,最终的排名则由Ref Finder算法产生。【结果】器官组稳定性好的前2位内参基因为UBCE和RPL7,果实成熟期组排名前2的为e IF4A和UBCE,激素处理组排名前2的为e IF4A和UBCE,非生物胁迫组排名前2的则为Actin和EF1-α,综合分析所有样品排名前3位的是e IF4A、RPL7和UBCE。分别用筛选出的稳定的e IF4A、RPL7、UBCE和不稳定的RPⅡ作为内参基因评价目的基因八氢番茄红素合成酶基因Eut Psy在果实成熟过程中的表达,结果显示分别以3个稳定的内参基因为单内参基因与以e IF4A同UBCE组合做内参基因所得到的结论一致,而RPⅡ给出的则不同。【结论】在应用荧光实时定量pcr技术研究牛奶子基因转录表达时,通常情况下e IF4A、RPL7和UBCE相对于其他9个候选内参基因更为可靠。研究结果为牛奶子及胡颓子属其他物种的基因表达分析奠定基础。

关键词：牛奶子基因表达实时定量pcr 标准化内参基因

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小反应体积实时定量pcr的可行性评价

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西安交通大学学报（医学版） 2010年第2期31卷 177-180页

作者：韩燕朱文华何晓静蒋丛姗宁启兰吕社民孟列素西安交通大学医学院遗传学与分子生物学系陕西西安710061 环境与疾病相关基因教育部重点实验室陕西西安710061

目的从扩增稳定性、扩增效率以及可靠性等多方面评估实时定量pcr（Rtpcr）反应小体积的可行性,同时确定适合小体积体系的模板量。方法将实验分为10、15、20μL 3个体积组,每组分别采用0.1、0.2、0.3、0.4μL的大鼠cDNA为模板,进行大鼠-... 详细信息

目的从扩增稳定性、扩增效率以及可靠性等多方面评估实时定量pcr（Rtpcr）反应小体积的可行性,同时确定适合小体积体系的模板量。方法将实验分为10、15、20μL 3个体积组,每组分别采用0.1、0.2、0.3、0.4μL的大鼠cDNA为模板,进行大鼠-βactin mRNA的Rtpcr扩增。通过扩增曲线和熔解曲线考察反应的稳定性,以梯度模板拟合标准曲线获得反应的扩增效率,其线性相关程度反映模板量是否合适。另外,构建大鼠降植烷诱导的关节炎（pristane-induced arthritis,PIA）模型,采用选定的反应体系,分别对模型组和正常组大鼠脾脏TNF-αmRNA进行扩增,通过TNF-α的相对表达趋势反映小体积扩增的可靠性。结果在大鼠-βactin mRNA的Rtpcr扩增中,10、15、20μL 3个体积组均能特异稳定地进行扩增,并保证高扩增效率。而且每个体积组中的模板梯度表现出很好的线性相关趋势。同时选用10μL和20μL反应体积、0.2μL模板对关节炎大鼠脾脏进行TNF-αmRNA扩增,结果一致表现出了预期的显著性上调。结论实验证实10μL、15μL等小反应体积应用于Rtpcr扩增中是可行的,具有较好的稳定性和可靠性,同时0.10.4μL cDNA模板在3种体系的合适模板范围内。这种较小的pcr反应体积,不仅节省了试剂和实验材料,对一些来之不易的临床标本尤为重要,也利于高通量大规模的Rtpcr检测的实现。

关键词：实时定量pcr 小反应体积稳定性可靠性

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大灰象甲实时定量pcr内参基因的筛选

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昆虫学报 2018年第11期61卷 1284-1294页

作者：李晓李建文成波李伟孙文秀高华援鞠倩姜晓静杜龙曲春娟曲明静山东省花生研究所山东青岛266100 长江大学生命科学学院湖北荆州434025 吉林省农业科学院花生研究所吉林公主岭136100

【目的】筛选出适合分析大灰象甲Sympiezomias velatus成虫不同组织中基因表达水平的内参基因。【方法】利用转录组测序技术获得大灰象甲管家基因序列作为候选内参基因,采用实时荧光定量pcr(qRT-pcr)技术分析候选基因在大灰象甲雌雄成... 详细信息

【目的】筛选出适合分析大灰象甲Sympiezomias velatus成虫不同组织中基因表达水平的内参基因。【方法】利用转录组测序技术获得大灰象甲管家基因序列作为候选内参基因,采用实时荧光定量pcr(qRT-pcr)技术分析候选基因在大灰象甲雌雄成虫触角、头、胸、腹和足中的表达量;并利用geNorm, NormFinder和BestKeeper软件及在线工具RefFinder评价候选基因的表达稳定性。以大灰象甲气味结合蛋白1(odorant bindng protein 1, OBP1)基因为目标基因验证候选基因在大灰象甲成虫不同组织中的表达稳定性。【结果】基于大灰象甲转录组数据首次鉴定得到β-肌动蛋白基因(ACT)、3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)、18S核糖体RNA基因(18S rRNA)、60S核糖体蛋白L12基因(RPL12)、60S核糖体蛋白L32基因(RPL32)、40S核糖体蛋白S20基因(RPS20)、延伸因子2基因(EF2)、α-微管蛋白基因(TUA)和β-微管蛋白基因(TUB)共9个管家基因序列。geNorm分析结果显示,RPL12和RPS20是最稳定表达的内参基因,而BestKeeper和NormFinder分析结果显示最稳定表达的内参基因分别是TUA和TUB。综合各分析方法得出9个候选基因中TUB,TUA,RPS20和RPL12是最稳定表达的内参基因,而18S rRNA,ACT和GAPDH这3个广泛应用的内参基因则表现出最低的表达稳定性。最后以OBP1为目标基因对稳定性不同的4个候选基因进行稳定性验证,发现以TUB和RPL12为内参基因,OBP1在成虫不同组织之间的表达模式基本一致;而以RPL32为内参基因,表达模式与应用TUB作为内参基因时稍有不同,使用18S rRNA作为内参基因得到的OBP1表达模式则与应用TUB作为内参基因时的完全不一致。【结论】TUB,TUA,RPS20和RPL12可以作为分析大灰象甲成虫不同组织中基因表达水平的内参基因,为后续基因表达研究奠定了基础。

关键词：大灰象甲实时定量pcr 内参基因基因表达分析表达稳定性

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芍药实时定量pcr内参基因的筛选和验证

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分子植物育种 2017年第7期15卷 2544-2549页

作者：李健中国科学院上海辰山植物科学研究中心上海辰山植物园上海201602 上海市资源植物功能基因组学重点实验室上海201602 复旦大学生物多样性与生态工程教育部实验室上海200438

以芍药不同花发育时期和不同组织器官为研究材料,利用qpcr技术检测8个内参基因的表达水平,并利用geNorm,NormFinder,Bestkeeper和RefFinder软件综合评价它们的表达稳定性。结果表明,分析芍药花瓣不同发育时期和不同组织的基因表达时可选... 详细信息

以芍药不同花发育时期和不同组织器官为研究材料,利用qpcr技术检测8个内参基因的表达水平,并利用geNorm,NormFinder,Bestkeeper和RefFinder软件综合评价它们的表达稳定性。结果表明,分析芍药花瓣不同发育时期和不同组织的基因表达时可选用UBQ,GAPDH和ACTIN作为内参基因,而PP2A和SAMS不适于作为内参基因。PlF3H基因的相对表达水平证实,在芍药花瓣不同发育时期,利用UBQ和GAPDH两个表达最稳定的组合即可获得精确的基因表达结果。

关键词：芍药内参基因实时定量pcr

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微孢子感染东亚飞蝗实时定量pcr内参基因的筛选

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应用昆虫学报 2021年第1期58卷 108-116页

作者：魏笑佳何岚阿地拉·阿吉季荣扈鸿霞新疆师范大学生命科学学院中亚区域跨境有害生物联合控制国际研究中心乌鲁木齐830054

【目的】筛选出微孢子Paranosema locustae感染条件下东亚飞蝗Locusta migratoria实时定量pcr最适内参基因。【方法】本研究应用实时荧光定量pcr技术测定东亚飞蝗甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(Glyceralde-hyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)、18s核糖体RNA(18s RNA)、微管蛋白基因(Tubulin,TUB)、肌动蛋白基因(Actin,ACT)和延伸因子1基因(Elongation factor1,EF1)5个候选基因在3个微孢子浓度(1×10^(4)、1×10^(6)和1×10^(8)个孢子/头)感染12 d后的表达稳定性;应用ge Norm、Bestkeeper和Normfinder 3个软件综合分析5个内参基因的稳定性。【结果】ge Norm软件对5个内参基因在不同微孢子虫浓度感染下稳定性分析结果表明:18S基因稳定性最低,平均表达稳定性值M值最高为0.6584,TUB基因稳定性最高,M值最低为0.2784。Norm Finder软件分析在不同微孢子虫浓度感染下的5个内参基因的稳定值分别为0.152(EF1)、0.181(ACT)、0.212(TUB)、0.329(GAPDH)和0.395(18S),可知内参基因稳定性顺序为:EF1>ACT>TUB>GAPDH>18S。由Best Keeper软件分析表明5个候选内参基因的SD值均小于1.0,表达均较稳定。根据其变异系数值CV的大小可知,ACT基因最为稳定。【结论】综合3种软件分析结果,在不同微孢子虫浓度感染下,可选择的较为稳定的内参基因ACT、EF1和TUB基因作为相对定量的参照基因。

关键词：微孢子东亚飞蝗内参基因实时定量pcr 表达稳定性

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茶树新梢不同叶片中β-葡萄糖苷酶和β-樱草糖苷酶基因表达的实时定量pcr分析

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茶叶科学 2006年第1期26卷 11-16页

作者：赵丽萍陈亮王新超姚明哲中国农业科学院茶叶研究所/农业部茶叶化学工程重点实验室茶树资源遗传改良与分子生物学实验室浙江杭州310008

在建立茶树基因表达绝对定量实时pcr检测方法后,检测了龙井43新梢不同部位叶片中的β-葡萄糖苷酶和β-樱草糖苷酶基因的表达情况,结果表明β-葡萄糖苷酶在一芽五叶新梢的第四叶中表达活性最高,为2.86E+08拷贝/μl,第四叶>第三叶>... 详细信息

在建立茶树基因表达绝对定量实时pcr检测方法后,检测了龙井43新梢不同部位叶片中的β-葡萄糖苷酶和β-樱草糖苷酶基因的表达情况,结果表明β-葡萄糖苷酶在一芽五叶新梢的第四叶中表达活性最高,为2.86E+08拷贝/μl,第四叶>第三叶>第五叶>第二叶>一芽一叶;而β-樱草糖苷酶基因在一芽一叶中最高,为4.31E+06拷贝/μl,一芽一叶>第二叶>第三叶>第四叶>第五叶。与茶叶香气密切相关两个基因在茶树不同部位的叶片中表达量和表达类型存在明显差异。本实验建立的实时荧光定量pcr可有效地用于茶树基因表达的定量分析。

关键词：茶树 β-葡萄糖苷酶 β-樱草糖苷酶实时定量pcr

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应用实时定量pcr技术研究人重组干扰素α2b在人群中对麻疹病毒和风疹病毒的抑制作用

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病毒学报 2004年第2期20卷 166-168页

作者：舒跃龙周蕊刘丽琦史智扬朱凤才赵静李刚唐震林里卓张丽兰侯云德病毒生物技术国家工程研究中心江苏省疾病预防控制中心江苏南京210009 徐州市铜山县疾病预防控制中心江苏徐州221006 北京远策药业有限责任公司北京100176

Human recombinant interferon α2b can inhibit replication of many viruses and it is an important prophylactic drug for virus infection. In this study, interferon α2b was used to study the biological function on measles virus and rubella virus replication in human. For each virus, selected population was divided into two groups, including with and without interferon α2b treatment, then the attenuated viral vaccine was used to inoculate each group and the respiratory samples were collected at fixed intervals. A highly sensitive and accurate Real-time pcr method was used to detect the virus copy number in samples. The results showed that the virus copy number was much lower after interferon treatment and suggested that interferon α2b could inhibit the measles virus and rubella virus replication in human.

关键词：实时定量pcr 干扰素人群麻疹副粘病毒科麻疹病毒

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鹦鹉热嗜衣原体实时定量pcr检测方法的建立

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中国人兽共患病学报 2006年第8期22卷 701-703页

作者：王争强朱虹苏裕心何君端青军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立一种简便、快速、特异的荧光定量pcr检测方法,用于鹦鹉热嗜衣原体的快速检测。方法以主要外膜蛋白(MOMP)基因为靶序列设计特异性引物,采用SYBR GreenⅠ随机渗入法建立实时定量pcr检测方法。结果循环阈值(Ct)与标准DNA模板在1.0&... 详细信息

目的建立一种简便、快速、特异的荧光定量pcr检测方法,用于鹦鹉热嗜衣原体的快速检测。方法以主要外膜蛋白(MOMP)基因为靶序列设计特异性引物,采用SYBR GreenⅠ随机渗入法建立实时定量pcr检测方法。结果循环阈值(Ct)与标准DNA模板在1.0×102-1.0×107拷贝/μl浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.989。该方法用于鹦鹉热嗜衣原体的检测具有很高的特异性,其敏感性与常规pcr相比可以提高100倍。结论本研究建立的检测鹦鹉热嗜衣原体的实时定量pcr检测方法具有很高的特异性和敏感性,可以用于鹦鹉热嗜衣原体的检测。

关键词：鹦鹉热嗜衣原体实时定量pcr MOMP基因熔解曲线

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实时定量pcr技术诊断PCP的研究进展

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寄生虫与医学昆虫学报 2011年第1期18卷 52-57页

作者：孙岚黄敏君郭增柱首都医科大学附属北京友谊医院北京热带医学研究所北京100050

肺孢子菌肺炎（PCP）是一种由耶氏肺孢子菌引起的致死性肺炎,常见于免疫功能低下人群,早期诊断有助于临床治疗.目前常用的病原学检查漏诊率较高;定性pcr检测虽然敏感,但有时难以区分隐性感染和显性感染.实时定量pcr是近年来发展的一种... 详细信息

肺孢子菌肺炎（PCP）是一种由耶氏肺孢子菌引起的致死性肺炎,常见于免疫功能低下人群,早期诊断有助于临床治疗.目前常用的病原学检查漏诊率较高;定性pcr检测虽然敏感,但有时难以区分隐性感染和显性感染.实时定量pcr是近年来发展的一种精确、敏感、污染少的核酸定量技术.本文综述结果表明,实时定量pcr技术能快速、敏感、特异地检测肺孢子菌,可随时跟踪监测PCP的治疗效果,指导临床用药,有助于PCP的流行病学研究及其他基础生物学研究.

关键词：肺孢子菌肺孢子菌肺炎机会性感染实时定量pcr 实验室诊断

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杏鲍菇采后木质化相关基因实时定量pcr中内参基因的选择

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2015年第7期43卷 219-227页

作者：秦晓艺王杰华南农业大学食品学院广东广州510642

【目的】筛选出合适的内参基因,为分析不同贮藏时期杏鲍菇(Pleurotus eryngii)子实体中木质化相关基因的表达提供支持。【方法】以4℃低温贮藏0,3,6,9,12,15和18d的杏鲍菇子实体为材料,采用实时荧光定量pcr(Quantitative real-time pcr,... 详细信息

【目的】筛选出合适的内参基因,为分析不同贮藏时期杏鲍菇(Pleurotus eryngii)子实体中木质化相关基因的表达提供支持。【方法】以4℃低温贮藏0,3,6,9,12,15和18d的杏鲍菇子实体为材料,采用实时荧光定量pcr(Quantitative real-time pcr,RT-qpcr)技术,分析了β-actin、18SrRNA、β-tubulin、ELF和GAPDH 5个候选内参基因在不同贮藏时期杏鲍菇的表达情况;通过GeNorm和NormFinder 2种软件筛选出最稳定的内参基因;选取最佳内参基因,采用相对表达定量法对木质素合成途径中的关键酶,即苯丙氨酸转氨酶(Phenylalanina ammonia-lyse,PAL)基因的表达进行定量分析。【结果】5个内参基因均能特异扩增,其中GAPDH基因表达丰度较低,不适合用作内参基因;经GeNorm软件分析计算,β-actin、β-tubulin、ELF、18SrRNA表达稳定度平均值M分别为0.527,0.527,0.584,0.875,最适内参基因组合为β-actin、β-tubulin和ELF;由NormFinder软件分析计算,β-actin、β-tubulin、ELF、18SrRNA稳定值S分别为0.221,0.356,0.583,1.092,β-actin稳定性最高;综合分析认为β-actin的表达稳定性最高,为最佳内参基因;以β-actin为内参基因,发现4℃低温贮藏3,6,9,12,15和18d的杏鲍菇子实体中PAL基因表达量分别比新鲜样品(0d)增加了11.3%,10.8%,11.3%,11.5%,11.4%,10.7%。【结论】β-actin可作为杏鲍菇子实体采后贮藏条件下品质变化相关基因表达研究的内参基因。

关键词：杏鲍菇采后木质化内参基因实时定量pcr

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